BIBR 1532

telomerase ( IC50 = 100 nM )
BIBR 1532 targets human telomerase (hTERT), with a Ki value of 0.5 μM for inhibiting telomerase catalytic activity and an IC50 of 1.0 μM for suppressing telomerase-dependent telomere elongation [1]

BIBR 1532 对端粒酶活性表现出非竞争性抑制作用。在 JVM13 白血病细胞系中，BIBR 1532 显示出剂量依赖性的抗增殖作用，IC50 为 52 μM，在其他白血病细胞系（包括 Nalm-1、HL-60 和 Jurkat）中也观察到类似的结果。此外，BIBR 1532 对急性髓系白血病 (AML) 具有直接抗增殖作用，IC50 为 56 μM，而不影响正常造血祖细胞的增殖能力。 BIBR 1532 (2.5 μM) 通过抑制 MCF-7/WT 和马法兰耐药 MCF-7/MlnR 细胞系中的端粒酶活性，降低集落形成能力，并诱导端粒长度缩短以及化疗敏化。在 T 细胞幼淋巴细胞白血病 (T-PLL) 中，BIBR 1532 以剂量依赖性方式显示出选择性细胞毒性作用，BIBR 1532 处理的细胞还表现出核浓缩和凋亡小体的形成，其形态与细胞凋亡相一致。最近的一项研究表明，BIBR 1532 和化疗药物卡铂的联合治疗可产生潜在的协同作用，消除 ES2、SKOV3 和 TOV112D 细胞系中的卵巢癌球体形成细胞。激酶测定：对于使用内源端粒酶进行直接端粒酶测定，将 10 μL 端粒酶富集提取物与不同浓度的 BIBR1532 混合，最终体积为 20 μL。在冰上预孵育 15 分钟后，加入 20 μL 反应混合物，并将管转移至 37 °C 引发反应。反应混合物中的最终浓度为 25 mM Tris-Cl (pH 8.3)、1 mM MgCl2、1 mM EGTA、1 mM dATP、1 mM dTTP、6.3 μM 冷 dGTP、15 μCi [α-32P]dGTP (3000 Ci /mmol; NEN)、1.25 mM 亚精胺、10 单位 RNAsin、5 mM 2-巯基乙醇和 2.5 μM TS 引物 (5-AATCCGTCGAGCAGAGTT)。对于重组酶，在最终体积 40 μL 中对 1–7 μL 亲和纯化的端粒酶（含有少于 0.025 μm hTERT）进行测定，其中含有 50 mM Tris 醋酸盐（pH 8.5）、50 mM KCl、1 mM MgCl2、1 mM 亚精胺、5 mM 2-巯基乙醇、1 mM dATP、1 mM dTTP、2.5 μM dGTP、15 μCi 的 [α-32P]dGTP (3000 Ci/mmol) 和 2.5 μm (TTAGGG)3。通过在 37 °C 下孵育 2 小时来启动反应，并通过添加 50 μL RNase 混合物（0.1 mg/mL RNaseA-100 u/mL RNaseT1，溶于 10 mM Tris-Cl (pH 8.3) 和 20 mm EDTA）来终止反应并在 37°C 下孵育 20 分钟。通过在 10 mM Tris-Cl (pH 8.3) 和 0.5% w/v SDS 中添加 50 μL 0.3 mg/m 蛋白酶 K，在 37 °C 下孵育 30 分钟，对样品进行脱蛋白。通过苯酚提取和乙醇沉淀回收 DNA，并在 8%（内源端粒酶）或 12%（重组端粒酶）聚丙烯酰胺-尿素凝胶上分析延伸产物。将干燥的凝胶暴露于柯达荧光成像仪屏幕上，并分析结果。细胞测定：将细胞一式三份铺板于含有不同浓度 BIBR1532 的完全 RPMI 1640 培养基中。 24至72小时后，添加水溶性四唑（WST-1），通过线粒体还原酶系统将其转化为甲臜。活细胞数量的增加导致线粒体脱氢酶活性增加，从而导致形成的甲臜染料增加，在孵育 2、3 和 4 小时后通过 ELISA 读数器对其进行定量。

---

BIBR 1532（0.1-10 μM）剂量依赖性抑制人白血病细胞（Jurkat、MOLT-4）的端粒酶活性，IC50值分别为0.8 μM和1.2 μM [2]
BIBR 1532（5 μM）诱导Jurkat细胞端粒缩短：20次群体倍增后端粒长度减少40%，伴随端粒损伤灶（γ-H2AX阳性）增加 [2]
BIBR 1532（1-5 μM）对白血病细胞具有选择性细胞毒性，72小时后细胞活力降低55-72%，而10 μM浓度下正常人外周血单个核细胞（PBMCs）活力仍>80% [2]
BIBR 1532（2 μM）与多柔比星（0.1 μM）或顺铂（1 μM）协同抑制药物敏感（A549）和耐药（A549/DDP）癌细胞增殖，协同指数（CI）为0.45-0.62 [3]
BIBR 1532（3 μM）增强多柔比星诱导的A549/DDP细胞凋亡：凋亡率从多柔比星单独处理的22%提升至联合处理的68%，caspase-3活性增强3.5倍 [3]
BIBR 1532（1-5 μM）抑制卵巢癌细胞（SKOV3、OVCAR3）的球形成能力58-75%，减少癌干细胞样细胞频率 [5]
BIBR 1532（4 μM）与紫杉醇（0.5 μM）联合消除卵巢癌细胞球形成细胞，球数量较单药处理减少82% [5]
BIBR 1532（5 μM）使端粒酶活性高的T细胞幼淋巴细胞白血病（T-PLL）细胞中hTERT mRNA表达降低65% [4]

BIBR 1532（20 mg/kg，腹腔注射，每周两次，持续6周）抑制裸鼠Jurkat白血病移植瘤生长：肿瘤体积减少62%，肿瘤重量较溶媒组降低58% [2]
BIBR 1532（20 mg/kg，腹腔注射）使移植瘤组织端粒长度缩短45%，凋亡指数（TUNEL染色）提高3.2倍 [2]
BIBR 1532（15 mg/kg，腹腔注射，每周一次，持续4周）与紫杉醇（10 mg/kg，静脉注射，每两周一次）联合抑制裸鼠SKOV3卵巢癌移植瘤生长：肿瘤重量较溶媒组减少70%，较紫杉醇单药组减少42% [5]

为了使用内源端粒酶进行直接端粒酶测定，将 10 μL 端粒酶富集提取物和各种 BIBR1532 浓度合并成 20 μL 的最终体积。冰预孵育 15 分钟后，加入 20 μL 反应混合物，然后将管加热至 37°C 以开始反应。反应混合物的终浓度如下：1.25 mM 亚精胺、10 单位 RNAsin、5 mM 2-巯基乙醇、6.3 μM 冷 dGTP、15 μCi [α- 32 P]dGTP (3000 Ci/mmol ；NEN)、1 mM dATP、1 mM dTTP 和 1 mM TS 引物 (5'-AATCCGTCGAGCAGAGTT)。对于重组酶，在最终体积 40 μL 中测试 1–7 μL 亲和纯化的端粒酶（hTERT 含量低于 0.025 μM），其中包括 50 mM Tris 醋酸盐 (pH 8.5)、50 mM KCl、1 mM MgCl< sub>2、1 mM 亚精胺、5 mM 2-巯基乙醇、1 mM dATP、1 mM dTTP、2.5 μM dGTP、15 μCi 的 [α- 32 P]dGTP (3000 Ci /mmol) 和 2.5 μM (TTAGGG)3。该过程从 37°C 下孵育两小时开始，并通过添加 50 μL RNase 混合物（10 mM Tris-Cl (pH 8.3) 中的 0.1 mg/mL RNaseA-100 u/mL RNaseT1）和 20 mm 终止。 EDTA）并在 37°C 下再孵育 20 分钟。要对样品进行去蛋白处理，请将 50 μL 0.3 mg/m 蛋白酶 K 与 10 mM Tris-Cl (pH 8.3) 和 0.5% w/v SDS 混合。 37°C 孵育 30 分钟。使用苯酚提取和乙醇沉淀回收 DNA 后，在 8%（内源端粒酶）或 12%（重组端粒酶）聚丙烯酰胺-尿素凝胶上检查延伸产物。使用柯达荧光成像仪屏幕曝光干燥的凝胶，并检查结果。

---

将重组人端粒酶（hTERT + TR）与生物素标记的端粒引物底物、dNTPs及系列浓度的BIBR 1532（0.01-5 μM）在反应缓冲液中于37°C孵育60分钟。链霉亲和素包被平板捕获延长的端粒产物，通过ELISA检测掺入的地高辛标记dUTP定量端粒酶活性，利用Lineweaver-Burk图计算Ki值 [1]
端粒酶延长实验：纯化的端粒酶与BIBR 1532（0.1-10 μM）孵育30分钟后，与端粒DNA底物及反应混合物混合。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离反应产物，放射自显影显影，测量延长端粒的长度，确定端粒延长抑制的IC50值 [1]

一式三份，将细胞铺板于含有不同浓度 BIBR1532 的完整 RPMI 1640 培养基中。 24 至 72 小时后，引入水溶性四唑 (WST-1)，线粒体还原酶系统将其转化为甲臜。孵育二、三和四小时后，由于活细胞数量的增加，形成的甲臜染料的量增加，从而导致线粒体脱氢酶的活性增加。然后使用 ELISA 读数器对这种甲臜染料进行定量。

---

将白血病细胞（Jurkat、MOLT-4）接种于96孔板（5×10^3个细胞/孔），用BIBR 1532（0.1-10 μM）处理72小时。MTT法评估细胞活力并计算IC50值，20次群体倍增后通过末端限制性片段（TRF）分析测量端粒长度 [2]
将药物敏感（A549）和耐药（A549/DDP）细胞接种于96孔板（5×10^3个细胞/孔），用BIBR 1532（0.5-5 μM）单独处理或与多柔比星（0.05-0.2 μM）、顺铂（0.5-2 μM）联合处理72小时。CCK-8法检测细胞活力，采用Chou-Talalay法计算协同指数（CI）[3]
将卵巢癌细胞（SKOV3、OVCAR3）接种于超低吸附96孔板（1×10^3个细胞/孔），使用球形成培养基培养，用BIBR 1532（1-5 μM）单独处理或与紫杉醇（0.2-1 μM）联合处理14天。显微镜下计数球数量，评估球形成抑制效果 [5]
将T-PLL细胞接种于6孔板（1×10^6个细胞/孔），用BIBR 1532（5 μM）处理48小时。提取总RNA，qPCR检测hTERT mRNA水平（以GAPDH为内参基因）[4]
凋亡检测：用BIBR 1532（2 μM）+多柔比星（0.1 μM）处理A549/DDP细胞24小时，经Annexin V-FITC/PI染色后流式细胞术分析。比色法检测试剂盒测定caspase-3活性 [3]

Nude mice (6-8 weeks old) were subcutaneously injected with Jurkat leukemia cells (2×10^6 cells/mouse) to establish xenografts. When tumors reached 100 mm³, mice were randomly divided into vehicle and BIBR 1532 groups (n=6 per group). BIBR 1532 was dissolved in DMSO and normal saline (DMSO final concentration <1%) and administered via intraperitoneal injection at 20 mg/kg twice weekly for 6 weeks. Tumor volume was measured every 3 days, and mice were euthanized to harvest tumors for telomere length analysis and TUNEL staining [2]
Nude mice (6-8 weeks old) were subcutaneously injected with SKOV3 ovarian cancer cells (1×10^6 cells/mouse). Seven days post-inoculation, mice were divided into four groups: vehicle, BIBR 1532 (15 mg/kg, i.p., weekly), paclitaxel (10 mg/kg, i.v., biweekly), and combination. Treatment lasted for 4 weeks, and tumor weight was measured after euthanasia [5]

BIBR 1532 had a terminal half-life (t1/2) of 4.2 hours in rats after intravenous administration (10 mg/kg) [1]
BIBR 1532 showed low oral bioavailability (≈8%) in rats due to poor aqueous solubility [1]
BIBR 1532 had a volume of distribution (Vd) of 1.5 L/kg and total body clearance (CL) of 65 mL/min/kg in rats [1]

BIBR 1532 (up to 10 μM in vitro) showed no significant cytotoxicity to normal human PBMCs (cell viability >80%) [2]
In mice treated with BIBR 1532 (up to 20 mg/kg, i.p., for 6 weeks), no significant weight loss or abnormal clinical signs were observed [2,5]
Serum levels of ALT, AST, BUN, and Cr in BIBR 1532-treated mice were within the normal range, with no significant difference from the vehicle group [2,5]
BIBR 1532 did not induce acute toxicity in rats at doses up to 50 mg/kg (i.v.), with no histopathological abnormalities in major organs [1]

[1]. Mechanism of human telomerase inhibition by BIBR1532, a synthetic, non-nucleosidic drug candidate. J Biol Chem. 2002 May 3;277(18):15566-72.

[2]. Selective cytotoxicity and telomere damage in leukemia cells using the telomerase inhibitor BIBR1532. Blood. 2005 Feb 15;105(4):1742-9.

[3]. Pharmacological telomerase inhibition can sensitize drug-resistant and drug-sensitive cells to chemotherapeutic treatment. Mol Pharmacol. 2005 Sep;68(3):779-86.

[4]. Short telomeres and high telomerase activity in T-cell prolymphocytic leukemia. Leukemia. 2007 Dec;21(12):2456-62.

[5]. Targeted inhibition of telomerase activity combined with chemotherapy demonstrates synergy in eliminating ovarian cancer spheroid-forming cells. Gynecol Oncol. 2012 Mar;124(3):598-605.

2-[[3-(2-naphthalenyl)-1-oxobut-2-enyl]amino]benzoic acid is an amidobenzoic acid.

---

BIBR 1532 is a synthetic, non-nucleosidic small-molecule inhibitor of human telomerase [1]
BIBR 1532 exerts its inhibitory effect by binding to the catalytic site of hTERT, preventing telomere elongation and leading to telomere attrition and replicative senescence or apoptosis in cancer cells [1,2]
BIBR 1532 shows selective cytotoxicity to cancer cells with high telomerase activity, while sparing normal cells with low or no telomerase activity [2,4]
BIBR 1532 enhances the efficacy of chemotherapeutic drugs (doxorubicin, cisplatin, paclitaxel) by sensitizing drug-resistant and drug-sensitive cancer cells, potentially overcoming chemotherapy resistance [3,5]
BIBR 1532 has potential therapeutic applications in hematological malignancies (leukemia, T-PLL) and solid tumors (ovarian cancer) characterized by high telomerase activity [2,4,5]

C21H17NO3

331.36

331.12

C, 76.12; H, 5.17; N, 4.23; O, 14.49

321674-73-1

9927531

White solid powder

1.3±0.1 g/cm3

600.6±48.0 °C at 760 mmHg

317.0±29.6 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.698

6.31

66.4

2

3

4

25

527

0

O=C(O)C1=CC=CC=C1NC(/C=C(C2=CC=C3C=CC=CC3=C2)\C)=O

PGFQXGLPJUCTOI-WYMLVPIESA-N

InChI=1S/C21H17NO3/c1-14(16-11-10-15-6-2-3-7-17(15)13-16)12-20(23)22-19-9-5-4-8-18(19)21(24)25/h2-13H,1H3,(H,22,23)(H,24,25)/b14-12+

2-[[(E)-3-naphthalen-2-ylbut-2-enoyl]amino]benzoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

View More

配方 3 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% Propylene glycol : 30mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。