| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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描述:四硫代钼酸双胆碱是一种新型强效的胞质超氧化物歧化酶 (SOD1) 抑制剂,具有治疗威尔逊病的潜力。
| 靶点 |
ATN-224 (choline tetrathiomolybdate) is a copper-binding compound that primarily targets and inhibits superoxide dismutase 1 (SOD1). It inhibits purified bovine SOD1 with an IC50 of 0.33 ± 0.03 μmol/L after 16 hours of incubation. [1]
It also inhibits intracellular SOD1 activity in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) with an IC50 of 0.0175 ± 0.0037 μmol/L. [1] The compound has a high and specific affinity for copper ions (Kd ~10⁸ mol/L⁻¹) and shows no binding to calcium, iron, magnesium, zinc, or manganese ions at concentrations up to 1 mmol/L. [1] It is a poor inhibitor of cytochrome c oxidase, with significant inhibition (50%) observed only at 1 mmol/L in isolated mitochondrial preparations. [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
根据等温滴定量热法,ATN-224 对铜离子具有很高的特异性亲和力(10⁸ mol/L⁻¹),且在浓度高达 1 mM 时不与钙、铁、镁、锌或锰离子结合。ATN-224 可抑制人脐静脉内皮细胞 (HUVECs) 的增殖(IC₅₀ = 1.4±0.3 μM;n=5)。纯化的牛 SOD1 活性也受到 ATN-224 的抑制,在 24 小时孵育期间的 IC₅₀ 为 0.33±0.03 μM。ATN-224 对 SOD1 的最大抑制作用在大约 16 小时后达到,且该抑制作用具有时间依赖性。ATN-224 似乎是通过降低铜酶水平来抑制 SOD1 的。 ATN-224 的 IC50 值为 17.5±3.7 nM,能够剂量依赖性地降低内皮细胞中 SOD1 的活性。ATN-224 以时间和剂量依赖的方式抑制 FGF-2 诱导的 ERK1/2 磷酸化;其 IC50 值范围为 1.25 至 2.5 μM,与抑制细胞增殖的 IC50 值一致 [1]。ATN-224 是一种可口服的小分子无机化合物,能够抑制肿瘤细胞和内皮细胞中铜/锌依赖性酶超氧化物歧化酶 1 (Cu/Zn-SOD1) 的活性 [2]。ATN-224 抑制 HUVEC 细胞增殖的 IC50 值为 1.4 ± 0.3 μmol/L,但对融合的静止期 HUVEC 细胞几乎没有影响。它还能抑制人微血管内皮细胞的增殖。 [1]
ATN-224抑制多发性骨髓瘤细胞系MM1S的增殖,IC50约为6.5 μmol/L。[1] 它抑制MM1S细胞中SOD1的活性,IC50约为0.04 μmol/L。[1] 在HUVEC细胞中,ATN-224处理(1 μmol/L,72小时)可导致超氧阴离子稳态水平升高,该水平可通过二氢乙啶染色测定。[1] ATN-224以剂量和时间依赖的方式抑制HUVEC细胞中FGF-2和VEGF诱导的细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)的磷酸化,在10 μmol/L预孵育48小时后可观察到完全抑制。 [1] 与内皮细胞相反,ATN-224(10 μmol/L,48 小时)可诱导 MM1S 多发性骨髓瘤细胞凋亡,这可通过裂解的聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)和活化的 caspase-3 检测到。[1] ATN-224 对 HUVEC 增殖、血管生成和 ERK 磷酸化以及肿瘤细胞凋亡的影响,可通过细胞渗透性 SOD 模拟物 Mn(III) 四(4-苯甲酸)卟啉氯化物 (Mn-TBAP) 或用聚乙二醇偶联的 SOD (PEG-SOD) 预加载细胞而显著逆转。 [1]在白蛋白存在下,用铜离子预加载ATN-224可消除其在HUVEC中的抗增殖和SOD1抑制活性。[1]ATN-224以剂量依赖的方式被HUVEC摄取,并在从培养基中移除后至少保留24小时。在测试的最高浓度(培养基中浓度为20 μmol/L)下,每个HUVEC细胞内的ATN-224浓度约为411 μmol/L。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠Matrigel胶塞模型中,当ATN-224被添加到胶塞中或通过灌胃给药时,均能显著抑制血管生成(P<0.05)。当ATN-224通过灌胃给药时,血管生成的抑制发生在血浆或Matrigel胶塞中铜含量出现可检测的下降之前。这一发现表明,ATN-224抑制血管生成无需消耗铜[1]。在雌性BALB/c裸鼠的Matrigel胶塞血管生成模型中,通过灌胃给药(周一至周五,每日一次)的ATN-224显著抑制了生长因子驱动的血管生成。这种抑制发生在血浆或Matrigel胶塞中铜含量出现任何可测量的下降之前。 [1]
在Matrigel胶塞中,ATN-224的抗血管生成作用可通过将SOD模拟物Mn-TBAP直接注入胶塞中而逆转。[1] |
| 酶活实验 |
细胞色素c氧化酶活性测定:使用分离的小鼠肝线粒体测定了ATN-224对细胞色素c氧化酶的影响。将线粒体与不同浓度的化合物在4℃下孵育16小时,然后使用商业试剂盒评估酶活性。[1]
纯化SOD1活性测定:使用水溶性四唑盐(WST-1)法测定了ATN-224对纯化牛SOD1的抑制作用。黄嘌呤氧化酶产生的超氧阴离子将WST-1还原为甲臜染料。SOD1抑制这种还原反应。将化合物与SOD1孵育不同时间(最长16小时)后测定活性。使用牛SOD绘制标准曲线。 [1] 细胞内SOD1活性测定:将HUVEC或MM1S细胞用ATN-224处理16小时后裂解。采用相同的基于WST-1的方法测定裂解液中的SOD1活性,即测量超氧化物介导的四唑盐还原的抑制情况。[1] SOD1铜耗竭:将ATN-224与纯化的SOD1蛋白孵育30分钟。然后通过凝胶过滤色谱法再次纯化该蛋白,并使用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定其铜含量。[1] |
| 细胞实验 |
细胞增殖实验:对于HUVEC细胞,将细胞接种于明胶上,用2 ng/mL FGF-2刺激,并用ATN-224处理48小时。采用Alamar Blue或MTT法检测细胞增殖。对于MM1S多发性骨髓瘤细胞,将细胞接种于T-75培养瓶中,并用化合物孵育48-96小时。采用钙黄绿素AM染色法检测细胞增殖。[1]
蛋白质印迹分析:对于ERK磷酸化研究,将HUVEC细胞预先用不同时间和剂量的ATN-224孵育,然后用10 ng/mL FGF-2或VEGF刺激一段时间。使用针对磷酸化ERK1/2(Thr202/Tyr204)的特异性抗体,通过蛋白质印迹分析细胞裂解液。使用总ERK1/2抗体进行信号校正。在细胞凋亡研究中,MM1S细胞用ATN-224处理48小时,并通过Western blot分析细胞质/细胞核组分中裂解的PARP和活化的caspase-3。[1] 超氧阴离子检测(二氢乙啶染色):HUVEC细胞用1 μmol/L ATN-224处理72小时。然后将细胞与5 μmol/L二氢乙啶(用于显微镜观察)或1.5 μmol/L二氢乙啶(用于流式细胞术)孵育。二氢乙啶的氧化产物产生红色荧光,可通过显微镜观察或通过流式细胞术定量。[1] 亚细胞组分分离:采用标准差速离心法制备细胞的细胞质和细胞核组分。使用商业试剂盒从小鼠肝脏中新鲜分离线粒体。[1] |
| 动物实验 |
Matrigel胶塞血管生成模型:** 使用雌性BALB/c裸鼠(4-8周龄)。将冷Matrigel胶与800 ng/mL FGF-2或300 ng/mL VEGF以及50 μg/mL肝素混合。将混合物皮下注射。ATN-224可通过灌胃(每日,周一至周五)或直接添加到Matrigel胶塞中(94 μmol/L)。在一些实验中,还将SOD模拟物Mn-TBAP(100 μmol/L)直接添加到胶塞中。5天后,取出胶塞,匀浆,并使用Drabkin氏溶液测定血红蛋白含量以量化血管生成。[1]
Matrigel胶塞血管生成模型:使用雌性BALB/c裸鼠(4-8周龄)。将冷Matrigel与800 ng/mL FGF-2或300 ng/mL VEGF以及50 μg/mL肝素混合。将混合物皮下注射。ATN-224可通过灌胃(每日一次,周一至周五)或直接添加到Matrigel胶塞中(94 μmol/L)给药。在一些实验中,还将SOD模拟物Mn-TBAP(100 μmol/L)直接添加到胶塞中。5天后,切除胶塞,匀浆,并使用Drabkin氏溶液测定血红蛋白含量以量化血管生成。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
ATN-224以剂量依赖的方式被细胞吸收,并在从培养基中取出后至少24小时内仍保留在细胞内。[1]
该化合物在体内通过灌胃给药。[1] 在Matrigel胶塞模型中,血管生成抑制发生在血浆或Matrigel胶塞本身中铜含量出现任何可测量的下降之前,表明其抗血管生成作用与全身铜耗竭无关。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
ATN-224耐受性良好。最常见的非血液学不良事件为疲乏、胃肠道疾病和皮肤反应。血液学毒性包括可逆性3-4级白细胞减少症。[2]
高剂量组中有3例患者因3-4级毒性而停止使用研究药物:1例因白细胞减少症,1例因全身皮疹,1例因氨基转移酶升高。[2] 对于出现轻度至中度(1-2级)ATN-224相关不良事件的患者,给予对症治疗并继续治疗。对于可通过对症治疗至2级或以下的严重或危及生命的(3-4级)不良事件,给予适当的治疗,无需延迟或调整剂量。对于持续存在的3-4级毒性(>14天),则需降低剂量。[2] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
硫钼酸胆碱是一种口服有效的第二代四硫钼酸盐类似物,具有抗血管生成和抗肿瘤活性。硫钼酸胆碱选择性螯合内皮细胞中超氧化物歧化酶1 (SOD1) 中的铜离子,从而消耗SOD1中的铜并抑制其活性。SOD1的抑制会干扰细胞增殖和血管生成所需的多种信号转导通路的激活,包括ERK1/2、FAK和Src激酶介导的通路。这导致细胞增殖和血管生成受到抑制,并诱导细胞凋亡。
药物适应症 治疗威尔逊病 ATN-224(四硫钼酸胆碱)是一种第二代口服铜结合化合物,由四硫钼酸铵衍生而来。该药物正在研发用于治疗癌症,在本文发表时,它正处于针对晚期实体瘤和血液系统恶性肿瘤的两项I期临床试验中。本研究首次证实了SOD1作为抑制血管生成和肿瘤生长的治疗靶点,并确定了ATN-224的具体分子靶点。该化合物对不同类型的细胞似乎具有不同的作用:它抑制内皮细胞增殖而不诱导细胞凋亡,同时诱导多发性骨髓瘤等肿瘤细胞凋亡。这种差异性活性可能通过同时靶向肿瘤及其血管系统而产生协同抗肿瘤作用。[1] |
| 分子式 |
C10H28MON2O2S4
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|---|---|
| 分子量 |
434.5574
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| 精确质量 |
436.024
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| CAS号 |
649749-10-0
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| PubChem CID |
18442052
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| 外观&性状 |
Pink to red solid powder
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| tPSA |
91.06
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
19
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| 分子复杂度/Complexity |
65.7
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
[Mo](=S)=S.[S-][H].[S-][H].O([H])C([H])([H])C([H])([H])[N+](C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H].O([H])C([H])([H])C([H])([H])[N+](C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H]
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| InChi Key |
NEYVHGQOGHJAAD-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/2C5H14NO.Mo.4S/c2*1-6(2,3)4-5-7/h2*7H,4-5H2,1-3H3/q2*+12*-1
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| 化学名 |
2-hydroxy-N,N,N-trimethylethan-1-aminium tetrathiomolybdate
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| 别名 |
Bis-choline tetrathiomolybdate Decuprate ATN-224 ATN 224 ATN224
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~115.59 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3012 mL | 11.5059 mL | 23.0118 mL | |
| 5 mM | 0.4602 mL | 2.3012 mL | 4.6024 mL | |
| 10 mM | 0.2301 mL | 1.1506 mL | 2.3012 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT04422431 | COMPLETEDWITH RESULTS | Drug: Bis-Choline Tetrathiomolybdate | Wilson Disease | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | 2020-12-02 | Phase 2 |
| NCT04526197 | COMPLETEDWITH RESULTS | Drug: ALXN1840 Drug: Celecoxib |
Wilson Disease | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | 2020-07-07 | Phase 1 |
| NCT05319912 | COMPLETEDWITH RESULTS | Drug: ALXN1840 Enteric-coated Tablet Drug: ALXN1840 Non-coated Capsule Drug: Omeprazole |
Healthy | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | 2014-04-07 | Phase 1 |
| NCT05319899 | COMPLETEDWITH RESULTS | Drug: ALXN1840 Drug: Omeprazole |
Healthy | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | 2014-01-20 | Phase 1 |
| NCT04526210 | COMPLETEDWITH RESULTS | Drug: ALXN1840 Drug: Bupropion Hydrochloride |
Wilson Disease | Alexion Pharmaceuticals, Inc. | 2020-10-21 | Phase 1 |