BMS-509744

Itk (IC50 = 19 nM)
BMS-509744 targets interleukin-2-inducible T-cell kinase (Itk) (recombinant human Itk: IC50 = 16 nM for kinase activity inhibition [1]
; >60-fold selectivity over Btk (Tec family kinase, IC50 = 1000 nM) [1]
; no significant inhibition of Src family kinases (Lck: IC50 > 1000 nM, Zap70: IC50 > 1000 nM, Syk: IC50 > 1000 nM) [1]
)

BMS-509744 在人和小鼠细胞中抑制 T 细胞受体诱导的体外过程，例如 PLCγ1 酪氨酸磷酸化、钙动员、IL-2 分泌和 T 细胞增殖。 BMS-488516 和 BMS-509744 的 IC50 值分别为 19 和 96 nM，在体外有效抑制 Itk。根据它们的竞争性 ATP 结合动力学，这两种物质都与 Itk 激酶结构域的 ATP 结合位点结合[1]。

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1. BMS-509744在肽基磷酸化实验中强效抑制重组人Itk激酶活性，IC50为16 nM；对Itk的选择性比对Btk高60倍以上（Btk的IC50=1000 nM），且在浓度高达10 μM时，对Lck、Zap70或Syk无可检测的抑制作用[1]
2. 在原代人CD4+ T细胞中，BMS-509744（10-1000 nM）可剂量依赖性抑制CD3/CD28诱导的T细胞增殖，通过[³H]胸苷掺入实验测得其IC50为82 nM[1]
3. 100 nM的BMS-509744可使CD3/CD28诱导的人T细胞促炎细胞因子产生量显著降低：IL-2减少70%、IFN-γ减少65%、TNF-α减少55%（通过夹心ELISA定量）[1]
4. 对Jurkat T细胞的蛋白质免疫印迹分析显示，100 nM的BMS-509744在CD3刺激后5分钟内，可使Itk介导的PLCγ1（Tyr783）磷酸化降低80%，并在刺激后15分钟抑制下游ERK1/2（45%）和JNK（50%）的活化[1]
5. BMS-509744（1-10 μM）对原代人T细胞和Jurkat T细胞无细胞毒性，台盼蓝排斥实验显示72小时处理后细胞活力>95%[1]

BMS-509744 和 BMS-488516 抑制通过给予小鼠抗 T 细胞受体抗体而产生的 IL-2 产生。无论诱导抗体的量如何，BMS-509744 在 50 mg/kg 时均表现出 50% 的抑制能力。在卵清蛋白诱导的过敏/哮喘小鼠模型中，BMS-509744 还显着减轻肺部炎症[1]。

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1. 在卵清蛋白（OVA）诱导的小鼠过敏性肺部炎症模型中，口服BMS-509744（3、10、30 mg/kg，每日1次，连续7天）可剂量依赖性降低对乙酰甲胆碱的气道高反应性（AHR），抑制率分别为30%、55%和75%（通过全身体积描记仪检测增强呼气间歇值Penh评估）[1]
2. BMS-509744（10 mg/kg口服）可使支气管肺泡灌洗液（BALF）中总炎症细胞数减少60%，其中嗜酸性粒细胞减少70%、中性粒细胞减少50%、淋巴细胞减少45%[1]
3. 30 mg/kg口服剂量的BMS-509744可使OVA诱导的BALF中Th2细胞因子水平降低：IL-4减少70%、IL-5减少65%、IL-13减少60%，并使肺组织中嗜酸性粒细胞趋化因子-1（eotaxin-1）的表达降低55%（qPCR分析）[1]
4. 肺组织的组织病理学检查显示，BMS-509744（10 mg/kg口服）与载体对照组相比，可使支气管周围/血管周围炎症减轻65%，并使黏液高分泌（PAS染色）减少50%[1]

激酶测试用于计算 BMS-509744 活性 (IC50)。在 10 μM GST-SLP-76 和不同 ATP 浓度存在下，使用 10 ng 酶进行激酶反应 10 分钟。 BMS-509744 的数量

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1. 重组人Itk激酶活性实验：将纯化的重组人Itk催化结构域蛋白与生物素化的PLCγ1衍生肽底物、[γ-³²P]ATP（10 μM）及系列稀释的BMS-509744（0.001-10 μM）在激酶缓冲液（25 mM Tris-HCl、10 mM MgCl2、1 mM DTT，pH 7.5）中30℃孵育30分钟；加入50 mM EDTA终止反应，将磷酸化肽段捕获在链霉亲和素包被的滤膜上并充分洗涤；通过液体闪烁计数仪检测结合部分的放射性，从剂量-反应曲线计算Itk抑制的IC50值[1]
2. Tec家族激酶选择性实验：将重组人Btk、Txk和Rlk蛋白与各自的肽底物、[γ-³²P]ATP及BMS-509744（0.01-10 μM）在与Itk实验相同的条件下孵育；通过液体闪烁计数法定量激酶活性，确定各激酶的IC50值并计算相对于Itk的选择性比值[1]
3. Src家族激酶抑制实验：将重组人Lck和Zap70蛋白与肽底物、[γ-³²P]ATP及BMS-509744（0.1-10 μM）在激酶缓冲液中30℃孵育30分钟；检测并定量磷酸化产物，评估对Src家族激酶的脱靶抑制作用[1]

1. 原代人T细胞增殖实验：通过阴性选择从健康捐赠者的外周血单个核细胞（PBMCs）中纯化CD4+ T细胞；将细胞以2×10⁵个/孔的密度接种于96孔板，加入抗CD3（1 μg/mL）和抗CD28（0.5 μg/mL）抗体及系列稀释的BMS-509744（0.01-10 μM）刺激；在37℃、5% CO₂条件下孵育72小时后，加入[³H]胸苷（1 μCi/孔）并继续培养18小时；收集细胞并通过液体闪烁计数仪检测放射性，计算增殖抑制率和IC50值[1]
2. 细胞因子产生ELISA实验：纯化的人CD4+ T细胞在BMS-509744（10-1000 nM）存在下，经抗CD3/CD28刺激48小时；收集细胞培养上清液，通过夹心ELISA检测IL-2、IFN-γ和TNF-α的浓度；将细胞因子水平归一化至载体处理对照组，计算抑制百分比[1]
3. Itk信号通路蛋白质免疫印迹实验：将Jurkat T细胞以1×10⁶个/孔的密度接种于6孔板，用BMS-509744（10-1000 nM）预处理30分钟（37℃）；随后用抗CD3（1 μg/mL）分别刺激5、15和30分钟；制备全细胞裂解液，经SDS-PAGE电泳后，用抗磷酸化Itk（Tyr511）、磷酸化PLCγ1（Tyr783）、磷酸化ERK1/2（Thr202/Tyr204）、磷酸化JNK（Thr183/Tyr185）和总肌动蛋白（内参）的抗体进行检测；通过密度计量法量化条带强度，评估TCR信号通路的抑制情况[1]
4. 台盼蓝细胞活力实验：将Jurkat T细胞和原代人CD4+ T细胞用BMS-509744（1-10 μM）处理72小时（37℃）；用台盼蓝染色后，通过血细胞计数板计数活细胞（台盼蓝阴性）；计算活细胞占总细胞数的百分比作为细胞活力[1]

Mice: The BMS-509744 and BMS-488516 compounds, or the vehicle (H2O:ethanol:Tween 80) 90:5:5, are injected subcutaneously into Balb/c mice 15 minutes prior to the intravenous injection of anti-CD3 antibody. Ninety minutes after the anti-CD3 antibody is administered, serum is taken for IL-2 and compound levels. Mass spectrometry is used to measure compound levels, and ELISA is used to measure IL-2[1].

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1. Ovalbumin (OVA)-induced murine allergic lung inflammation model: Female BALB/c mice (6-8 weeks old) were sensitized by intraperitoneal injection of OVA (10 μg) adsorbed to aluminum hydroxide (2 mg) on days 0 and 7; from days 14 to 20, mice were challenged with aerosolized OVA (1% in saline) for 30 minutes daily; BMS-509744 was formulated in 0.5% methylcellulose + 0.1% Tween 80 and administered orally via gavage at 3, 10, or 30 mg/kg (volume: 10 mL/kg) 1 hour before each OVA challenge; control mice received the vehicle formulation alone [1]
2. Airway hyperresponsiveness (AHR) measurement: On day 21, mice were anesthetized with pentobarbital, and airway resistance was measured in response to increasing concentrations of methacholine (0, 3.125, 6.25, 12.5, 25 mg/mL) using whole-body plethysmography; enhanced pause (Penh) values were recorded as an indicator of AHR, and the area under the curve (AUC) of Penh values was calculated for each treatment group [1]
3. Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) analysis: Mice were euthanized on day 21, and BALF was collected by instilling and aspirating PBS (0.5 mL) into the trachea three times; total inflammatory cells were counted with a hemocytometer, and differential cell counts (eosinophils, neutrophils, lymphocytes, macrophages) were performed on Wright-Giemsa-stained cytospin preparations; BALF supernatants were analyzed for IL-4, IL-5, IL-13, and eotaxin-1 by ELISA [1]
4. Lung tissue histopathology: Lungs were excised, fixed in 10% formalin, embedded in paraffin, and sectioned into 5 μm slices; sections were stained with hematoxylin and eosin (H&E) to evaluate peribronchial and perivascular inflammation, and with periodic acid-Schiff (PAS) to assess mucus production; slides were scored blindly by a pathologist on a 0-4 scale for inflammation severity and mucus hypersecretion [1]

1. 在浓度高达 10 μM 时，BMS-509744 对原代人 T 细胞或 Jurkat T 细胞均未显示出细胞毒性，处理 72 小时后细胞存活率 >95% [1]
2. 在用 BMS-509744（30 mg/kg，每日口服，连续 7 天）治疗的 BALB/c 小鼠中，未观察到体重、食物摄入量或毒性临床症状（例如嗜睡、毛发蓬乱）的显著变化 [1]

[1]. Selective Itk inhibitors block T-cell activation and murine lung inflammation. Biochemistry.?2004 Aug 31;43(34):11056-62.

N-[5-[[5-[(4-乙酰基-1-哌嗪基)-氧甲基]-4-甲氧基-2-甲基苯基]硫代]-2-噻唑基]-4-[(3,3-二甲基丁-2-基氨基)甲基]苯甲酰胺是苯甲酰胺类化合物。

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1. BMS-509744 是一种强效且选择性的小分子抑制剂，可抑制 Itk 的活性。Itk 是一种 Tec 家族激酶，在 T 细胞受体 (TCR) 信号传导和 Th2 细胞分化中起着关键作用 [1]
2. BMS-509744 的作用机制涉及与 Itk 的 ATP 结合口袋竞争性结合，从而抑制其激酶活性并阻断下游 TCR 信号传导事件（包括 PLCγ1 磷酸化和 MAPK 通路激活），进而抑制 T 细胞增殖和促炎细胞因子的产生 [1]
3. BMS-509744在小鼠过敏性肺部炎症模型中显示出疗效，表明其在哮喘和过敏性鼻炎等Th2介导的炎症性疾病中具有潜在的治疗应用价值[1]

C32H41N5O4S2

623.82904

623.26

C, 61.61; H, 6.62; N, 11.23; O, 10.26; S, 10.28

439575-02-7

439575-02-7

11467730

White to light yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

1.635

4.55

157.41

2

8

10

43

949

0

CC(C(C)(C)C)NCC1=CC=C(C(NC2=NC=C(SC3=CC(C(N4CCN(C(C)=O)CC4)=O)=C(OC)C=C3C)S2)=O)C=C1

ZHXNIYGJAOPMSO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C32H41N5O4S2/c1-20-16-26(41-7)25(30(40)37-14-12-36(13-15-37)22(3)38)17-27(20)42-28-19-34-31(43-28)35-29(39)24-10-8-23(9-11-24)18-33-21(2)32(4,5)6/h8-11,16-17,19,21,33H,12-15,18H2,1-7H3,(H,34,35,39)

N-[5-[5-(4-acetylpiperazine-1-carbonyl)-4-methoxy-2-methylphenyl]sulfanyl-1,3-thiazol-2-yl]-4-[(3,3-dimethylbutan-2-ylamino)methyl]benzamide

CHEMBL209148; BMS509744; BMS-509744; BMS 509744

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~21.9 mg/mL (~35.1 mM）

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。