BMS-986278

human LPA1 (Kb = 6.9 nM), mouse LPA (Kb = 4.0 nM)[1]

在过表达 LPA1 的 CHO 细胞中，BMS-986278 是一种高亲和力 LPA1 拮抗剂，对人类 LPA1 的 Kb 为 6.9 nM，对小鼠 LPA1 的 Kb 为 4.0 nM [1]。 BMS-986278 的 Kb 为 5.8 nM，在溶血磷脂酸 (LPA) 刺激下可抑制正常人肺成纤维细胞中的钙通量 [1]。

BMS-986278（0.1-10 mg/kg；单次口服剂量）以浓度依赖性方式完全抑制 CD1 小鼠中 LPA 刺激的全身组胺释放 [1]。 BMS-986278（3-30 mg/kg；每天口服两次，持续 14 天）可减少博莱霉素诱导的大鼠胶原沉积/肺纤维化 [1]。 BMS-986278 在临床前物种中的药代动力学 [1] 血浆清除率 ((mL/min)/kg) Vss (L/kg) 口服生物利用度 (%) T1/2 (h) 血浆蛋白结合（% 游离） 小鼠 37 5.5 70 2.5 31.4 大鼠 15 3.5 100 4.5 12.6 猴 2.0 1.6 79 11 0.8

In Vitro Biological Assays/体外生物检测[1]
化合物作为LPA1抑制剂的有效性可以在LPA1功能拮抗剂测定中确定，如下所示：
将过表达人LPA1、小鼠LPA1受体或正常人肺成纤维细胞（NHLF，Lonza，MD，USA）的CHO细胞分别以每孔20000或10000个细胞的体积接种在聚-d-赖氨酸涂覆的384孔微孔板中，并在37°下用5%的CO2孵育过夜。第二天，在37°C下用钙指示剂染料加载细胞30分钟，然后在测定前平衡至RT 30分钟。使用Labcyte Echo声学分配器将溶解并连续稀释在100%DMSO中的测试化合物转移到384孔非结合性表面板上，并用测定缓冲液（1×HBSS（Hanks平衡盐溶液）与钙/镁、20 mM HEPES（4-（2-羟乙基）-1-哌嗪乙磺酸）缓冲液和0.1%无脂肪酸BSA）进一步稀释至0.5%DMSO，然后以0.08 nM至5μM的终浓度加入细胞。随后在室温下孵育细胞20分钟，然后用终浓度为10nM的LPA刺激（EC50）。在加入LPA后，监测LPA刺激的钙通量的抑制90秒。使用四参数逻辑斯谛方程确定IC50值（定义为抑制50%LPA反应的受试化合物的浓度）。使用功能Cheng-Prusoff方程从IC50值计算功能亲和力Kb：
其中[A]是拮抗剂测定中使用的LPA浓度，EC50是导致LPA激动剂控制曲线50%最大活性的LPA的浓度，h是从LPA激动药数据的拟合中获得的斜率值。

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体外代谢产物阐明[1]
化合物33（10μM）与小鼠和人类的肝微粒体（1 mg/mL）在NADPH（1 mM）和GSH（1 mM。 在人、猴、狗、大鼠和小鼠的肝细胞中评估了33的代谢。将小鼠、大鼠、狗、猴子和人类的冷冻肝细胞悬浮在Krebs-Henseleit缓冲液（约1×106个细胞/mL）中，在37°C的加湿CO2（5%）培养箱中用33（10μM）培养2小时。反应后，用上述相同的方法处理样品。以相同的方式评估25的代谢。

血清蛋白结合试验[1]
化合物33在一组多物种血清蛋白结合试验中进行了测试，以确定该化合物与各种物种血清蛋白的结合程度。在一次测试中，通过与单个感兴趣物种（人类、大鼠、小鼠或食蟹猴血清）的血清结合，以达到10μM的最终浓度，对33个独立样本进行了三次检测。使用赛默飞世尔公司的双室快速平衡透析（RED）分析板，在37°C下，在10%的二氧化碳气氛中，在磷酸钠缓冲液中进行5小时的透析。在时间零点（T0[血清]和T0[缓冲液]）和插管后5小时（平衡后，T5 R h[血清]、T5̷h]）收集缓冲液室和血清室的检测样品。通过液相色谱法分析样品，然后进行串联质谱法（LC-MS/MS）分析，以评估透析装置中缓冲液室和血清室之间自由扩散和平衡的化合物分数（百分比）。在LC-MS/MS分析之前，用缓冲液或血清稀释测定样品，以使每个样品中的最终血清浓度相同。随后，在含有分析内标的乙腈中通过蛋白质沉淀提取这些样品。通过LC-MS/MS分析样品，并通过计算每个样品中33与内标的峰面积比来确定33的相对量。结果表示为孵育后33个游离（未结合）百分比、结合百分比和恢复百分比。以类似的方式获得了其他化合物的血清蛋白结合结果。

动物/疾病模型： 雄性 SD（SD（Sprague-Dawley））大鼠（10 周龄）给予博来霉素[1]
剂量： 3、10 和 30 mg/kg
给药方式： 口服，每日两次，持续 14 天
实验结果： 3 mg/kg (48%) 和 10 mg/kg (56%) 剂量组的肺组织纤维化面积百分比显著降低。

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\n\nLPA 刺激血浆组胺评估（急性药效学分析）[1]
\n在 10 周龄雌性 (Hsd:ICR) CD-1 小鼠中评估化合物对 LPA 刺激的组胺释放的影响。 (9c,19) 化合物以10 mL/kg的剂量体积，溶于含有40% PEG400、10% Cremophor和50%磷酸盐缓冲液(PBS)的溶剂中，经口(PO)给药。给药两小时后，对动物（每剂量组10只小鼠）进行尾静脉注射，注射液为PBS或PBS加300 μg溶血磷脂酸(LPA，1-油酰-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸钠盐)。LPA用0.1%无脂肪酸BSA/PBS配制，浓度为2 μg/μL。注射LPA两分钟后，断头处死小鼠，并将血液收集于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，离心(800×g，10分钟)。分离血浆后，将其冷冻保存于−80 °C，直至进行化合物浓度和组胺水平的测定。组胺水平采用竞争性酶联免疫吸附试验 (ELISA) 测定，操作步骤按照制造商说明进行（组胺 EIA，牛津生物医学研究公司）。组胺释放百分比的计算方法为：将 PBS 加 LPA 组的平均值设为 100% 组胺释放，PBS 减去 LPA 组的平均值设为 0% 组胺释放。[1]

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\n\n大鼠博来霉素慢性疗效研究[1]
\n\n采用文献中改进的 21 天博来霉素诱导肺纤维化模型评估化合物。(9c) 10 周龄雄性 Sprague-Dawley 大鼠购自 Charles River Laboratories 公司。经过10天的适应期后，大鼠用异氟烷（4%异氟烷，100%氧气）麻醉，并通过口咽滴注法给予博来霉素（3.5 U/kg，溶于2 μL/g无菌生理盐水中），该方法参考文献(20a)并进行了改进。随后将大鼠放回笼中，直至其完全从麻醉中恢复，并在整个实验期间每日进行监测。在博来霉素滴注后第7天，根据滴注后体重减轻情况，将动物随机分为10-12只一组，并在第8天开始给药。在第21天，处死大鼠，取出左肺叶，充气后用福尔马林固定，制成石蜡包埋块，切片后分别用Picrosirius Red (PSR) (20c)或Masson三色染色(MT)进行染色。 （20d）染色切片经数字化处理后，使用半自动组织学评分系统HALO软件进行分析。PSR染色通过分析整个肺切片中红色染色的组织比例（%PSR阳性）进行评分，该比例指示胶原蛋白的存在。MT染色切片通过分析光密度增高区域（%纤维化区域）进行评分，以此作为肺组织中博来霉素诱导损伤/炎症比例的替代指标。[1]

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\n\n小鼠药代动力学研究[1]
\n在雄性CD-1小鼠中进行了BMS-986278（化合物33）的小鼠药代动力学研究。动物（N = 4）禁食过夜（仅用于口服给药），然后通过尾静脉注射（1 mg/kg）或灌胃（3 mg/kg）给予化合物33。分别于给药后0.05小时（口服给药为0.25小时）、0.5小时、1小时、4小时、7小时和24小时，通过眼眶后静脉丛取血（约0.2 mL）。每组动物中，一半分别于给药后0.05小时（口服给药为0.25小时）、0.5小时、1小时、3小时、5小时、7小时和24小时取血。血液样本静置凝固后，于4℃下以1500–2000倍重力离心，分离血清。血清样本保存于-20℃，直至进行LC-MS/MS分析（化合物25的表征）。化合物33配制于5%二甲基乙酰胺和95% Tris缓冲液中，用于静脉注射。化合物 33 以 3 mg/kg 的剂量进行口服给药，配制成 10% Cremophor-EL、40% PEG400 和 50% 磷酸盐缓冲液的溶液。采集血样；制备血清并按上述方法保存，直至进行 LC-MS/MS 分析。化合物 25 的小鼠药代动力学研究也采用了类似的方案。[1]

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\n\n大鼠药代动力学研究[1]
\nBMS-986278（化合物 33）的大鼠药代动力学研究在雄性 Sprague-Dawley 大鼠（300–350 g）中进行。仅口服给药时，大鼠需禁食过夜。给药后 0.17（仅限静脉注射）、0.25、0.5、0.75、1、2、3、5、7 和 24 小时，从颈静脉采集血样（约 0.3 mL）到含有三钾乙二胺四乙酸 (K3EDTA) 的试管中，然后在 4 °C (1500–2000g) 下离心以获得血浆，并将血浆储存在 −20 °C 下，直到通过 LC-MS/MS 分析（表征 25）。在化合物 25 和本文中描述大鼠药代动力学数据的其他化合物的大鼠药代动力学研究中，采用了类似的方案。[1]

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\n\n食蟹猴药代动力学研究[1]
\n在雄性食蟹猴中，采用交叉设计研究评估了化合物 BMS-986278（化合物 33） 的猴药代动力学特征。禁食过夜后，3 只动物（5-8 kg）分别通过股静脉静脉输注（1 mg/kg，10 分钟）和灌胃（5 mg/kg）接受化合物 33，两次给药之间间隔 1 周的洗脱期。给药前及给药后0.17小时（仅限静脉注射）、0.25小时、0.5小时、0.75小时、1小时、2小时、3小时、5小时、7小时和24小时，从股动脉采集系列血样（约0.3 mL），置于含K3EDTA的试管中，并在4℃下以1500-2000g离心，获得血浆。样品储存于-20℃，直至进行LC-MS/MS分析（化合物25的特性分析）。对化合物25进行食蟹猴药代动力学研究时，也采用了类似的方案。\n\n

[1]. Discovery of an Oxycyclohexyl Acid Lysophosphatidic Acid Receptor 1 (LPA1) Antagonist BMS-986278 for the Treatment of Pulmonary Fibrotic Diseases. J Med Chem. 2021 Nov 11;64(21):15549-15581.

氧环己酸BMS-986278 (33) 是一种强效的溶血磷脂酸受体1 (LPA1) 拮抗剂，其对人LPA1的Kb值为6.9 nM。本文讨论了从LPA1拮抗剂临床化合物BMS-986020 (1) 开始的构效关系(SAR)研究，最终发现了化合物33。文中详细描述了化合物33的体外和体内临床前药理学特征以及药代动力学/代谢特征。基于其在啮齿动物慢性肺纤维化模型中的体内疗效以及在多种临床前动物模型中优异的ADME（吸收、分布、代谢、排泄）特性，化合物33进入临床试验阶段，其中包括一项正在进行的针对肺纤维化患者的II期临床试验（NCT04308681）。[1]

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化合物33在体外是一种强效的LPA1拮抗剂（在过表达人LPA1的CHO细胞中LPA1Kb = 6.9 nM，在正常人肺成纤维细胞中LPA1Kb = 5.9 nM）。在一项为期21天的慢性博来霉素大鼠肺纤维化模型治疗研究中，化合物33表现出显著的抗纤维化疗效；在研究结束时，通过组织学分析（Masson三色染色法）确定，在3 mg/kg和10 mg/kg每日两次（BID）剂量下，化合物33显著降低了博来霉素治疗大鼠的肺纤维化面积。总体而言，化合物33具有优异的体外安全性，包括：（1）不抑制任何关键的CYP450酶或离子通道（hERG、钠离子通道和L型钙离子通道），因此不存在安全隐患；（2）不诱导人肝细胞中的CYP450酶。重要的是，化合物33对关键的肝脏转运蛋白，特别是肝胆胆汁酸转运蛋白（如BSEP、MDR3、MRP3和MRP4）的活性可忽略不计。在三种临床前动物模型（小鼠、大鼠和猴）中观察到化合物33具有优异的药代动力学特征。化合物 33 的发现实现了我们显著改进化合物 1 的目标（肝脏/DDI 转运体抑制、水溶性和人肝细胞代谢稳定性），从而验证了我们降低 cLogP 值和增加 C(sp3) 分数的策略。总之，化合物 33 是一种新型 LPA1 受体拮抗剂，具有优异的生物学特性和安全性，有望用于治疗纤维化疾病。化合物 33 已进入临床研究阶段；单次递增剂量研究和多次递增剂量研究均已完成。一项针对特发性肺纤维化 (IPF) 和肺纤维化相关间质性肺病 (PF-ILD) 患者的化合物 33 的 II 期临床试验已启动（ClinicalTrials.gov 注册号：NCT04308681）。[1]

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BMS-986278 (33) 迄今已完成多项早期临床试验，包括一项单次递增剂量 (SAD) 研究和一项在健康志愿者中进行的为期 14 天的多次递增剂量 (MAD) 研究。化合物 33 在最高 125 mg 每日两次的剂量下总体耐受性良好。化合物 33 的药代动力学呈线性且剂量比例关系，每日一次或两次给药后药物蓄积程度均极低。在最高剂量 125 mg 每日两次给药时，化合物 33 的日暴露量（以 AUC 定义）比化合物 1 每日两次 600 mg 给药时的 AUC 高约 17 倍。在健康志愿者中，化合物 33 口服吸收迅速，达峰时间 (Tmax) 为 1.5 小时，半衰期约为 12 小时。一项针对特发性肺纤维化 (IPF) 或肺纤维化相关间质性肺病 (PF-ILD) 患者的全球 II 期临床试验已启动（ClinicalTrials.gov 注册号：NCT04308681）[1]。

C22H31N5O5

445.5120

445.23

C, 59.31; H, 7.01; N, 15.72; O, 17.96

2170126-74-4

132232205

White to light yellow solid powder

2.1

120

1

8

9

32

638

2

O(C1C([H])=C([H])C(C2=C(C([H])([H])OC(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H])=O)N(C([H])([H])[H])N=N2)=NC=1C([H])([H])[H])[C@@]1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@]([H])(C(=O)O[H])C1([H])[H]

UEUNDURNLYLSNB-HOTGVXAUSA-N

InChI=1S/C22H31N5O5/c1-5-11-26(3)22(30)31-13-18-20(24-25-27(18)4)17-9-10-19(14(2)23-17)32-16-8-6-7-15(12-16)21(28)29/h9-10,15-16H,5-8,11-13H2,1-4H3,(H,28,29)/t15-,16-/m0/s1

(1S,3S)-3-[2-methyl-6-[1-methyl-5-[[methyl(propyl)carbamoyl]oxymethyl]triazol-4-yl]pyridin-3-yl]oxycyclohexane-1-carboxylic acid

BMS-986278; 2170126-74-4; Admilparant; 4UN9AOU6G8; UNII-4UN9AOU6G8; BMS986278; (1S,3S)-3-((2-Methyl-6-(1-methyl-5-(((methyl(propyl)carbamoyl)oxy)methyl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyridin-3-yl)oxy)cyclohexane-1-carboxylic acid; Cyclohexanecarboxylic acid, 3-((2-methyl-6-(1-methyl-5-((((methylpropylamino)carbonyl)oxy)methyl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)-3-pyridinyl)oxy)-, (1S,3S)-;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~224.46 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。