BMS-986278

human LPA1 (Kb = 6.9 nM), mouse LPA (Kb = 4.0 nM)[1]
BMS-986278 targets lysophosphatidic acid receptor 1 (LPA1), a G protein-coupled receptor that mediates the effects of lysophosphatidic acid (LPA), a bioactive lipid involved in inflammation, fibrosis, and cell proliferation. BMS-986278 is a potent and orally active LPA1 antagonist with Kb values of 6.9 nM for human LPA1 and 4.0 nM for mouse LPA1. It is selective for LPA1 over a panel of 44 receptors and ion channels.

在过表达LPA1的CHO细胞中，BMS-986278是一种高亲和力LPA1拮抗剂，对人LPA1的Kb值为6.9 nM，对小鼠LPA1的Kb值为4.0 nM [1]。BMS-986278的Kb值为5.8 nM，能够抑制溶血磷脂酸（LPA）刺激的正常人肺成纤维细胞中的钙离子内流 [1]。体外实验表明，BMS-986278是一种强效的LPA1拮抗剂，对人LPA1的Kb值为6.9 nM，对小鼠LPA1的Kb值为4.0 nM。它对LPA1具有选择性，优于44种受体和离子通道。该化合物是一种潜在的首创小分子LPA1拮抗剂。

BMS-986278（0.1-10 mg/kg；单次口服）以浓度依赖的方式完全抑制CD1小鼠中LPA刺激的全身组胺释放[1]。BMS-986278（3-30 mg/kg；每日两次口服，持续14天）可减少博来霉素诱导的大鼠胶原沉积/肺纤维化[1]。 BMS-986278 在临床前动物模型中的药代动力学[1] 血浆清除率 ((mL/min)/kg) 稳态分布容积 (L/kg) 口服生物利用度 (%) 半衰期 (h) 血浆蛋白结合率 (% 游离) 小鼠 37 5.5 70 2.5 31.4 大鼠 15 3.5 100 4.5 12.6 猴 2.0 1.6 79 11 0.8
现有资料中关于 BMS-986278 的体内活性数据不够详尽。该化合物广泛用于肺纤维化疾病的研究，也可用于肺损伤和肺纤维化相关研究。目前尚未有动物模型中具体的体内疗效数据报道。

体外生物学测定[1]
化合物作为LPA1抑制剂的有效性可通过LPA1功能拮抗剂测定法进行测定，具体步骤如下：
将过表达人LPA1、小鼠LPA1受体或正常人肺成纤维细胞（NHLF，Lonza，MD，USA）的CHO细胞分别以每孔20,000或10,000个细胞的密度接种于聚赖氨酸包被的384孔微孔板中，每孔0.02 mL培养液，并在37℃、5% CO2条件下培养过夜。次日，将细胞与钙指示剂在37℃孵育30分钟，然后在室温下平衡30分钟，之后进行测定。将溶解于 100% DMSO 并进行系列稀释的测试化合物，使用 Labcyte Echo 声波分液器转移至 384 孔非结合表面板中，并用检测缓冲液（含钙镁的 1× HBSS（汉克斯平衡盐溶液）、20 mM HEPES（4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸）缓冲液和 0.1% 无脂肪酸 BSA）进一步稀释至 0.5% DMSO，然后加入细胞中，最终浓度范围为 0.08 nM 至 5 μM。细胞在室温下孵育 20 分钟后，用 LPA 刺激，LPA 的最终浓度为 10 nM（EC50）。加入 LPA 后，监测 90 秒内 LPA 刺激的钙离子内流的抑制情况。采用四参数逻辑方程测定IC50值（定义为抑制50% LPA反应的测试化合物浓度）。功能亲和力Kb由IC50值通过Cheng-Prusoff功能方程计算得出：
其中[A]为拮抗剂测定中使用的LPA浓度，EC50为引起LPA激动剂对照曲线最大活性50%的LPA浓度，h为LPA激动剂数据拟合得到的斜率值。

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体外代谢物鉴定[1]
将化合物33（10 μM）与小鼠和人肝微粒体（1 mg/mL）在NADPH（1 mM）和GSH（1 mM）存在下于37 °C孵育0、20和60分钟。样品经等体积乙腈脱蛋白处理后，以21000g离心10分钟。上清液浓缩至原体积的一半，并注入LC/UV/MS系统进行分析。化合物33在人、猴、狗、大鼠和小鼠肝细胞中的代谢情况进行了评估。将冷冻保存的小鼠、大鼠、狗、猴和人肝细胞悬浮于Krebs-Henseleit缓冲液（约1 × 10⁶个细胞/mL）中，并在37 °C、5% CO₂的加湿培养箱中与化合物33（10 μM）孵育2小时。反应结束后，样品按上述相同方法进行处理。化合物25的代谢情况也以相同方式进行评估。
BMS-986278的体外受体结合试验包括测定其与LPA1受体的亲和力。使用表达人或小鼠 LPA1 的细胞进行放射性配体结合试验或功能试验（例如，钙动员）。根据剂量反应曲线确定人 LPA1 的 Kb 值为 6.9 nM，小鼠 LPA1 的 Kb 值为 4.0 nM。

血清蛋白结合试验[1]
化合物33在一系列多物种血清蛋白结合试验中进行了测试，以确定该化合物与不同物种血清蛋白的结合程度。在单次试验中，将化合物33的六个独立样品分别与目标物种（人、大鼠、小鼠或食蟹猴血清）的血清混合，最终浓度为10 μM，每个样品重复三次。使用Thermo Fisher公司的双室快速平衡透析（RED）板，在37 °C、10% CO₂气氛下，以磷酸钠缓冲液为透析介质进行透析5小时。分别在零时点（T0[血清]和T0[缓冲液]）和孵育后5小时（平衡后，T5 h[血清]和T5 h[缓冲液]）收集缓冲液室和血清室的试验样品。采用液相色谱-串联质谱法 (LC-MS/MS) 分析样品，以评估化合物在透析装置中可在缓冲液室和血清室之间扩散并达到平衡的游离比例（百分比）。在进行 LC-MS/MS 分析之前，将待测样品用缓冲液或血清稀释，使每个样品的最终血清浓度相同。随后，在含有分析内标的乙腈溶液中，通过蛋白质沉淀法提取这些样品。使用 LC-MS/MS 分析样品，并通过计算每个样品中化合物 33 与内标的峰面积比来确定化合物 33 的相对含量。结果以化合物 33 的游离（未结合）百分比、结合百分比和孵育后回收百分比表示。其他化合物的血清蛋白结合结果以类似方式获得。
使用表达 LPA1 的细胞进行 BMS-986278 的细胞测定。用 BMS-986278 处理细胞，并用 LPA 刺激细胞。受体激活通过测量下游信号事件（例如钙动员或 cAMP 积累）来评估。化合物的拮抗活性取决于其阻断 LPA 诱导反应的能力。

动物/疾病模型： 雄性 SD（SD（Sprague-Dawley））大鼠（10 周龄）给予博来霉素[1]
剂量： 3、10 和 30 mg/kg
给药方式： 口服，每日两次，持续 14 天
实验结果： 3 mg/kg (48%) 和 10 mg/kg (56%) 剂量组的肺组织纤维化面积百分比显著降低。

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LPA 刺激和血浆组胺评估（急性药效学分析）[1]
在 10 周龄雌性 (Hsd:ICR) CD-1 小鼠中评估了化合物对 LPA 刺激的组胺释放的影响。 (9c,19) 化合物以10 mL/kg的剂量体积，溶于含有40% PEG400、10% Cremophor和50%磷酸盐缓冲液(PBS)的溶剂中，经口(PO)给药。给药两小时后，对动物（每剂量组10只小鼠）进行尾静脉注射，注射液为PBS或PBS加300 μg溶血磷脂酸(LPA，1-油酰-2-羟基-sn-甘油-3-磷酸钠盐)。LPA用0.1%无脂肪酸BSA/PBS配制，浓度为2 μg/μL。注射LPA两分钟后，断头处死小鼠，并将血液收集于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，离心(800×g，10分钟)。分离血浆后，将其冷冻保存于−80 °C，直至进行化合物浓度和组胺水平的测定。组胺水平采用竞争性酶联免疫吸附试验 (ELISA) 测定，操作步骤按照制造商说明进行（组胺 EIA，牛津生物医学研究公司）。组胺释放百分比的计算方法为：将 PBS 加 LPA 组的平均值设为 100% 组胺释放，PBS 减去 LPA 组的平均值设为 0% 组胺释放。[1]

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大鼠博来霉素慢性疗效研究[1]
在参考文献 (9c) 改进的 21 天博来霉素诱导肺纤维化模型中评估化合物。10 周龄雄性 Sprague-Dawley 大鼠购自 Charles River Laboratories 公司。经过10天的适应期后，大鼠用异氟烷（4%异氟烷，100%氧气）麻醉，并通过口咽滴注法给予博来霉素（3.5 U/kg，溶于2 μL/g无菌生理盐水中），该方法参考文献(20a)并进行了改进。随后将大鼠放回笼中，直至其完全从麻醉中恢复，并在整个实验期间每日进行监测。在博来霉素滴注后第7天，根据滴注后体重减轻情况，将动物随机分为10-12只一组，并在第8天开始给药。在第21天，处死大鼠，取出左肺叶，充气后用福尔马林固定，制成石蜡包埋块，切片后分别用Picrosirius Red (PSR) (20c)或Masson三色染色(MT)进行染色。 （20d）染色切片经数字化处理后，使用半自动组织学评分系统HALO软件进行分析。PSR染色通过分析整个肺切片中红色染色的组织比例（%PSR阳性）进行评分，该比例指示胶原蛋白的存在。MT染色切片通过分析光密度增高区域（%纤维化区域）进行评分，以此作为肺组织中博来霉素诱导损伤/炎症比例的替代指标。[1]

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小鼠药代动力学研究[1]
在雄性CD-1小鼠中进行了BMS-986278（化合物33）的小鼠药代动力学研究。动物（N = 4）禁食过夜（仅用于口服给药），然后通过尾静脉注射（1 mg/kg）或灌胃（3 mg/kg）给予化合物33。分别于给药后0.05小时（口服给药为0.25小时）、0.5小时、1小时、4小时、7小时和24小时，通过眼眶后静脉丛取血（约0.2 mL）。每组动物中，一半分别于给药后0.05小时（口服给药为0.25小时）、0.5小时、1小时、3小时、5小时、7小时和24小时取血。血液样本静置凝固后，于4℃下以1500–2000倍重力离心，分离血清。血清样本保存于-20℃，直至进行LC-MS/MS分析（化合物25的表征）。化合物33配制于5%二甲基乙酰胺和95% Tris缓冲液中，用于静脉注射。化合物 33 以 3 mg/kg 的剂量口服给药，配制成 10% Cremophor-EL、40% PEG400 和 50% 磷酸盐缓冲液的溶液。采集血样；制备血清并按上述方法保存，直至进行 LC-MS/MS 分析。化合物 25 的小鼠药代动力学研究也采用了类似的方案。[1]

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大鼠药代动力学研究[1]
BMS-986278（化合物 33）的大鼠药代动力学研究在雄性 Sprague-Dawley 大鼠（300–350 g）中进行。仅口服给药时，大鼠需禁食过夜。给药后 0.17（仅限静脉注射）、0.25、0.5、0.75、1、2、3、5、7 和 24 小时，从颈静脉采集血样（约 0.3 mL）到含有三钾乙二胺四乙酸 (K3EDTA) 的试管中，然后在 4 °C (1500–2000g) 下离心以获得血浆，并将血浆储存在 −20 °C 下，直到通过 LC-MS/MS 分析（表征 25）。在化合物 25 和本文中描述大鼠药代动力学数据的其他化合物的大鼠药代动力学研究中，采用了类似的方案。[1]

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食蟹猴药代动力学研究[1]
在雄性食蟹猴中，采用交叉设计研究评估了化合物 BMS-986278（化合物 33）的猴药代动力学特征。禁食过夜后，3 只动物（5-8 kg）分别通过股静脉静脉输注（1 mg/kg，10 分钟）和灌胃（5 mg/kg）接受化合物 33，两次给药之间间隔 1 周的洗脱期。在给药前以及给药后0.17小时（仅限静脉注射）、0.25小时、0.5小时、0.75小时、1小时、2小时、3小时、5小时、7小时和24小时，从股动脉采集系列血样（约0.3 mL），置于含K3EDTA的试管中，并在4℃下以1500-2000g离心，获得血浆。样品储存于-20℃，直至进行LC-MS/MS分析（化合物25的表征）。对化合物25的食蟹猴药代动力学研究也采用了类似的方案。
现有资料中未详细列出BMS-986278的体内动物研究。该化合物用于肺纤维化疾病的研究。供应商提供的资料中未报告具体的动物模型、给药方案和疗效数据。

BMS-986278 是一种口服活性化合物，分子量约为 478.55 g/mol。现有资料中未详细列出其具体的药代动力学参数，例如半衰期、生物利用度和清除率。

目前尚无关于BMS-986278毒性数据的报道。作为一种研究化合物，它不用于治疗用途。该化合物正在被研究用于治疗肺纤维化疾病。其具体的毒理学特征尚未明确。

[1]. Discovery of an Oxycyclohexyl Acid Lysophosphatidic Acid Receptor 1 (LPA1) Antagonist BMS-986278 for the Treatment of Pulmonary Fibrotic Diseases. J Med Chem. 2021 Nov 11;64(21):15549-15581.

氧环己酸BMS-986278 (33) 是一种强效的溶血磷脂酰丝氨酸受体1 (LPA1) 拮抗剂，对人LPA1的Kb值为6.9 nM。本文探讨了从临床LPA1拮抗剂化合物BMS-986020 (1) 开始的构效关系(SAR)研究，最终发现了化合物33。文中详细描述了化合物33的体外和体内临床前药理学及药代动力学/代谢特征。基于其在慢性肺纤维化啮齿动物模型中的体内疗效以及在多种临床前动物模型中优异的ADME（吸收、分布、代谢和排泄）特性，化合物33已进入临床试验阶段，包括一项正在进行的针对肺纤维化患者的II期临床试验(NCT04308681)。 [1]化合物33是一种强效的体外LPA1拮抗剂（在过表达人LPA1的CHO细胞中LPA1Kb = 6.9 nM，在正常人肺成纤维细胞中LPA1Kb = 5.9 nM）。在一项为期21天的博来霉素慢性大鼠肺纤维化研究中，化合物33表现出显著的抗纤维化疗效；研究结束时，组织学分析（Masson三色染色）证实，化合物33在每日两次（BID）以3 mg/kg和10 mg/kg的剂量给药时，显著减少了博来霉素治疗大鼠的肺纤维化面积。总体而言，化合物33具有优异的体外安全性，包括：（1）它不抑制任何关键的CYP450酶或离子通道（hERG通道、钠离子通道和L型钙离子通道），因此不存在安全风险； (2) 它不会诱导人肝细胞中的CYP450酶。重要的是，化合物33对关键的肝脏转运蛋白，特别是肝胆胆汁酸转运蛋白（如BSEP、MDR3、MRP3和MRP4）的活性可忽略不计。在三种临床前动物模型（小鼠、大鼠和猴子）中观察到化合物33具有优异的药代动力学特征。化合物33的发现实现了我们显著改进化合物1（肝脏/DDI转运蛋白抑制、水溶性和在人肝细胞中的代谢稳定性）的目标，从而验证了我们降低cLogP值和增加C(sp3)分数的策略。总之，化合物33是一种新型LPA1受体拮抗剂，具有优异的生物学特性和安全性，有望用于治疗纤维化疾病。化合物33已进入临床试验；单剂量和多剂量递增研究均已完成。针对特发性肺纤维化 (IPF) 和肺纤维化相关间质性肺病 (PF-ILD) 患者的化合物 33 的 II 期临床试验已启动（ClinicalTrials.gov 注册号：NCT04308681）。[1]

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BMS-986278 (33) 迄今已完成多项早期临床试验，包括一项单剂量递增 (SAD) 研究和一项在健康志愿者中进行的为期 14 天的多剂量递增 (MAD) 研究。化合物 33 在每日两次、每次 125 mg 的剂量下总体耐受性良好。化合物 33 的药代动力学呈线性且与剂量成正比，每日一次或两次给药后药物蓄积量极低。在每日两次，每次 125 mg 的最高剂量下，化合物 33 的每日暴露量（定义为 AUC）约为化合物 1 每日两次，每次 600 mg 剂量下的 17 倍。在健康志愿者中，化合物 33 口服吸收迅速，达峰时间 (Tmax) 为 1.5 小时，半衰期约为 12 小时。一项针对特发性肺纤维化 (IPF) 或肺纤维化相关间质性肺病 (PF-ILD) 患者的全球 II 期临床试验已启动（ClinicalTrials.gov 注册号：NCT04308681）[1]。
BMS-986278 是一种正在研究用于治疗包括特发性肺纤维化 (IPF) 在内的肺纤维化疾病的研究化合物。它是一种强效且口服有效的LPA1拮抗剂，对人LPA1的Kb值为6.9 nM，对小鼠LPA1的Kb值为4.0 nM。该化合物仅供科研使用，可从商业供应商处购买。

C22H31N5O5

445.5120

445.23

C, 59.31; H, 7.01; N, 15.72; O, 17.96

2170126-74-4

132232205

White to light yellow solid powder

2.1

120

1

8

9

32

638

2

O(C1C([H])=C([H])C(C2=C(C([H])([H])OC(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H])=O)N(C([H])([H])[H])N=N2)=NC=1C([H])([H])[H])[C@@]1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@]([H])(C(=O)O[H])C1([H])[H]

UEUNDURNLYLSNB-HOTGVXAUSA-N

InChI=1S/C22H31N5O5/c1-5-11-26(3)22(30)31-13-18-20(24-25-27(18)4)17-9-10-19(14(2)23-17)32-16-8-6-7-15(12-16)21(28)29/h9-10,15-16H,5-8,11-13H2,1-4H3,(H,28,29)/t15-,16-/m0/s1

(1S,3S)-3-[2-methyl-6-[1-methyl-5-[[methyl(propyl)carbamoyl]oxymethyl]triazol-4-yl]pyridin-3-yl]oxycyclohexane-1-carboxylic acid

BMS-986278; 2170126-74-4; Admilparant; 4UN9AOU6G8; UNII-4UN9AOU6G8; BMS986278; (1S,3S)-3-((2-Methyl-6-(1-methyl-5-(((methyl(propyl)carbamoyl)oxy)methyl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)pyridin-3-yl)oxy)cyclohexane-1-carboxylic acid; Cyclohexanecarboxylic acid, 3-((2-methyl-6-(1-methyl-5-((((methylpropylamino)carbonyl)oxy)methyl)-1H-1,2,3-triazol-4-yl)-3-pyridinyl)oxy)-, (1S,3S)-;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~224.46 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。