| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
- Binds directly to the DNA-binding domain of p53 (Kd = 60 ± 20 nM), near Ser240 and Ser241, disrupting the p53-MDM2 interaction and preventing p53 ubiquitination and degradation. [1]
- Upregulates Btf (Bcl-2-associated transcription factor), which represses MDM2 transcription and modulates p53, BAX, and Bcl-2 pathways. [2] C16 ceramide targets cellular membranes and signaling pathways involved in apoptosis and stress responses. As a lipid second messenger, it activates ceramide-activated protein kinase and induces phosphorylation of epidermal growth factor receptor. It also activates a cytosolic serine/threonine protein phosphatase. C16 ceramide incorporates into the mitochondrial outer membrane and forms channels that increase its permeability, promoting apoptosis. Its levels are correlated with increased apoptosis. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
C16-神经酰胺（水溶性吡啶衍生物PC16，1-5 μM）在A549、HCT116和HepG2细胞中以剂量依赖的方式诱导p53表达上调、核转位以及下游靶基因p21和PUMA的激活。[1] - 纯化的重组p53在下拉实验中与生物素标记的C16-神经酰胺结合。荧光滴定显示其具有高亲和力结合，Kd = 60 ± 20 nM。PC6（C6-吡啶神经酰胺）不结合。[1] - 膜结合实验表明，p53对C16-神经酰胺的亲和力远高于其他酰基链长度（C12、C18、C20、C22、C24）、C16-二氢神经酰胺或PC6。 [1]
- 光活化神经酰胺 (PAC) 可共价修饰 p53 的 Ser240 和 Ser241 位点（AScore 1000）。在这些残基上引入庞大侧链的突变（S240K、S241K、S241E）可消除神经酰胺的结合；而 S240E 或 S241A 突变则不影响神经酰胺的结合。[1] - 神经酰胺的结合提高了 p53 DNA 结合域的热稳定性（Tm 从 41.6°C 升高至 43.2°C）。[1] - PC16 (5 μM) 可破坏活 PC-3 细胞中的 p53-MDM2 复合物（双分子荧光互补实验），其作用与 Nutlin 3 (50 μM) 类似。ELISA 实验表明，p53-MDM2 相互作用的丧失呈浓度依赖性（PC16 浓度为 0–100 nM）。 [1] - PC16 (60–100 nM) 在体外泛素化实验中抑制 p53 泛素化，其效果与 Nutlin 3 (80 nM) 相当。[1] - 在 HCT116 细胞中，C16-神经酰胺 (12 μM，6 小时) 以时间和浓度依赖的方式降低细胞活力（6 小时后存活率约为 60%）。PARP 裂解、pro-caspase 3 减少和 Annexin V/PI 染色证实了细胞凋亡。 [2] - 2D-DIGE蛋白质组学分析鉴定出C16-神经酰胺（12 μM，6 h）处理后51种差异表达蛋白，包括Btf（1.24～1.85倍）和prohibitin（1.48倍）上调，以及stratifin（2.77倍）和stathmin（1.11倍）下调。Western blot实验证实了这些变化。[2] - C16-神经酰胺（12 μM）可增加p53表达（15～30 min内），上调BAX，并降低Mdm2和磷酸化Bcl-2水平。[2] - Btf过表达（GFP-Btf转染）可使细胞活力降低约20%，增加p53和BAX，并降低磷酸化Bcl-2水平。 Btf 敲低（siRNA）可增强细胞对神经酰胺诱导的细胞死亡的抵抗力，并使 caspase 3/7 活性降低高达 60%。[2] - C16-神经酰胺可降低 MDM2 启动子活性（6 小时降低约 40%）和 Mdm2 蛋白水平（降低 1.85 倍）。Btf 过表达也可降低 MDM2 启动子活性（约 40%）和 Mdm2 蛋白水平（降低 1.30 倍）。神经酰胺处理后，Btf 沉默可增加 MDM2 启动子活性。[2] p53 和 C16-神经酰胺在其核心结构域内相互作用。在细胞中，p53 与天然 C16-神经酰胺结合形成复合物 [1]。C16-神经酰胺（2.5–50 μM；0-48 小时）以浓度和时间依赖的方式显著降低 HCT116 细胞的活力 [2]。 Btf（Bcl-2相关转录因子）是C16-神经酰胺（12 μM；48小时）诱导HCT116细胞凋亡的机制[2]。C16-神经酰胺（12 μM；0-6小时）和Btf的表达均上调p53和BAX的表达。C16-神经酰胺通过Btf抑制Mdm2的表达[2]。体外实验表明，C16-神经酰胺是一种内源性神经酰胺，可作为脂质第二信使调节细胞凋亡和应激信号通路。它能激活神经酰胺活化蛋白激酶，诱导表皮生长因子磷酸化，并激活胞质丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶。在分离的人中性粒细胞中，PPMP或MAPP可增加C16-神经酰胺的水平，且C16-神经酰胺水平的升高与细胞凋亡的增加相关。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
所提供的文献中未报告C16神经酰胺的直接体内数据。然而，细胞中CerS6（神经酰胺合成酶6）的表达可提高内源性C16神经酰胺水平并激活p53。[1] 在体内，C16神经酰胺是一种天然存在的鞘脂，在细胞信号传导和膜结构中发挥着关键作用。神经酰胺水平可用作炎症或特定疾病的生物标志物。C16神经酰胺在细胞凋亡、应激反应和疾病中的作用已被广泛研究。然而，现有文献中尚未详细描述C16神经酰胺作为治疗药物的具体体内疗效数据。
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| 酶活实验 |
荧光猝灭：在 270 nm 激发波长下记录纯化的 p53 核心结构域 (1.0 μM) 的稳态荧光光谱。通过增加 PC16 或 PC6 (10–2000 nM) 的浓度来测量荧光猝灭。Kd 值通过对 304 nm 处的发射光谱进行非线性拟合来确定。[1]
- 膜结合实验：将神经酰胺 (0.5–4 μg) 点样于 PVDF 膜上，用 3% BSA 封闭，与纯化的 p53 或细胞裂解液在 4°C 下孵育过夜，并用 p53 特异性抗体检测结合的 p53。[1] - 热变性实验：将 p53 DBD (100–300 aa) 与 PAC 或不与 PAC 孵育，并测量熔解温度 (Tm)。 [1] - 体外泛素化实验：反应体系包含 p53、E1、E2、MDM2、Mg²⁺-ATP 和泛素，并添加或不添加 PC16（60、80、100 nM）或 Nutlin 3（80 nM），于 37°C 孵育 1 小时，然后进行 SDS-PAGE/WB 分析。[1] - 夹心 ELISA：将 p53 多克隆抗体包被的 96 孔板与 p53/MDM2 混合物孵育，并添加或不添加 PC16 或 Nutlin 3。使用 MDM2 单克隆抗体和 HRP 标记的二抗检测结合的复合物。 [1] - 鞘脂的液相色谱-串联质谱分析：使用异丙醇/水/乙酸乙酯 (30:10:60) 提取脂质。样品根据蛋白质水平或脂质磷酸盐含量进行标准化。[1] - 二维差异凝胶电泳 (2D-DIGE)：将对照组和 C16 神经酰胺处理组 (12 μM，6 h) 的细胞中的蛋白质 (25 μg) 用 Cy3/Cy5 标记，与 Cy2 标记的内标混合，在 pH 3–10 NL IPG 胶条和 12% 丙烯酰胺凝胶上进行分离，扫描后用 DeCyder 软件进行分析。[2] 对于体外生化分析，将 C16 神经酰胺溶解于合适的溶剂中，用于处理细胞或细胞裂解液。神经酰胺激活蛋白激酶活性可通过在ATP存在下，将细胞裂解液与C16神经酰胺和底物（例如髓鞘碱性蛋白）孵育来测定。磷酸化可通过放射自显影或蛋白质印迹法检测。细胞凋亡可通过测定caspase活性或Annexin V染色来评估。 |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[2]
细胞类型： HCT116 细胞 测试浓度： 2.5、5、10、12、20、50 µM 孵育时间： 0-48 小时 实验结果： 细胞活力随时间和浓度的增加而显著降低。 蛋白质印迹分析[2] 细胞类型： HCT116 细胞 测试浓度： 12 μM 孵育时间： 1、3 和 6 小时 实验结果： PARP 裂解增加，pro-caspase 3 减少。stratifin 和 stathmin 水平降低，抑制素和 Btw 水平升高。处理后，RNAi 介导的 Btf 耗竭也部分抑制了 BAX 的表达。荧光素酶活性和 Mdm2 蛋白表达水平显著降低。 细胞活力（MTS 法）：将 HCT116 细胞接种于 96 孔板中，用 C16-神经酰胺（2.5–50 μM，1.5–48 小时）处理，然后加入 MTS/PMS，于 37°C 孵育 2 小时。在 492 nm 处测量吸光度。[2] - 细胞凋亡检测（Annexin V/PI）：用 Annexin V-FLUOS 和碘化丙啶染色 15 分钟，并通过共聚焦显微镜观察。 [2] - 蛋白质印迹：用 1% SDS 或 RIPA 缓冲液裂解细胞，经 SDS-PAGE 电泳分离后转移至 PVDF 膜，用针对 p53、PARP、caspase-3、Btf、Mdm2、BAX、磷酸化 Bcl-2、stratifin、stathmin、prohibitin 和 α-微管蛋白的抗体进行检测。[1][2] - 双分子荧光互补 (BiFC)：将共转染 p53-V1 和 MDM2-V2 的 PC-3 细胞用 PC16 (5 μM) 或 Nutlin 3 (50 μM) 处理 18 小时，并进行荧光成像。[1] - siRNA 沉默：使用特异性 siRNA 沉默 CerS6 或 p53；使用随机序列 siRNA 作为对照。使用 ON-TARGETplus SMARTpool siRNA 沉默 Btf 基因。转染采用脂质体转染试剂进行。[1][2] - 瞬时转染和荧光素酶活性检测：将 HCT116 细胞转染 MDM2-LUC 或 TP53-LUC 报告基因构建体和 GFP-Btf 表达载体。转染 24 小时后检测荧光素酶活性，并以蛋白浓度进行标准化。[2] - Caspase 3/7 活性检测：将转染 GFP siRNA 或 Btf siRNA 的细胞用 C16-神经酰胺处理，并使用发光法 Caspase-Glo 3/7 检测试剂盒检测 caspase 3/7 活性。[2] 对于基于细胞的检测，细胞用浓度范围为 1-100 µM 的 C16-神经酰胺处理。细胞凋亡可通过检测半胱天冬酶活性、Annexin V染色或DNA片段化来评估。线粒体通透性可通过使用JC-1等荧光染料测量线粒体膜电位或检测细胞色素c释放来评估。神经酰胺水平可通过液相色谱-质谱联用（LC-MS）法测定。 |
| 动物实验 |
对于体内研究，通常会使用炎症、细胞凋亡或代谢性疾病的动物模型。组织中C16神经酰胺的水平可以通过液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术作为生物标志物进行测定。然而，C16神经酰胺通常不作为体内治疗药物使用。它的主要用途是用于研究鞘脂信号传导和细胞凋亡。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
C16神经酰胺可溶于乙醇（5 mg/ml，温热）和DMF（约0.15 mg/ml）。建议在-20°C下储存以保证长期稳定性。该化合物仅供研究使用，不得用于人类或兽医用途。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全操作规程。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在HCT116细胞中，C16-神经酰胺（12 μM，6 h）可使细胞活力降低约40%。更高浓度（20–50 μM）则导致更大的毒性。[2] p53缺陷细胞（PC-3）和p53沉默细胞对C16-神经酰胺的毒性不敏感。[1] 由于C16-神经酰胺是一种内源性脂质和研究试剂，而非治疗药物，因此其毒理学数据尚未得到广泛报道。高浓度神经酰胺可诱导细胞凋亡，并可能具有细胞毒性。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全预防措施。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
C16-神经酰胺是一种由神经酰胺合成酶6 (CerS6) 生成的天然鞘脂。它能直接与p53 DNA结合域结合（Kd ∼60 nM），这是此前未知的生理代谢物激活p53的机制。这种相互作用会破坏p53-MDM2复合物，阻止p53的泛素化和降解，从而导致p53的积累并激活下游靶点。[1] 神经酰胺的结合位点位于p53的Box V基序附近，Box V是MDM2的二级接触区域。神经酰胺酰基链的C10原子靠近Ser240和Ser241。[1] 在表达CerS6的细胞中检测到了与p53结合的内源性C16-神经酰胺，但在对照细胞中未检测到。仅发现C16-神经酰胺（而非其他神经酰胺种类，如C18、C20、C22、C24和dhC16）与p53形成复合物。[1] 血清饥饿或叶酸应激可提高CerS6和C16-神经酰胺的水平，进而激活p53。CerS6的沉默可阻止这种反应。[1] Btf（BCLAF1）是一种核蛋白，可与Bcl-2和Bcl-xL相互作用。它作为转录抑制因子和促凋亡因子发挥作用。在神经酰胺通路中，Btf表达上调并抑制MDM2的转录，从而促进p53的稳定。 [2] N-十六烷酰鞘氨醇是一种N-酰基鞘氨醇，其中神经酰胺的N-酰基被指定为十六烷酰基（棕榈酰基）。它是生殖支原体和人血清的代谢产物。它是一种N-酰基鞘氨醇、Cer(d34:1)和N-棕榈酰鞘氨醇碱基。它在功能上与十六烷酸相关。据报道，N-棕榈酰鞘氨醇存在于日本锥虫和布氏锥虫中，并且有相关数据。C16神经酰胺（N-棕榈酰鞘氨醇）是一种丰富的内源性鞘脂，在细胞凋亡和应激信号传导中作为脂质第二信使发挥作用。它由神经酰胺合成酶6生成，并在线粒体外膜上形成通道。C16神经酰胺是一种用于研究鞘脂信号传导和细胞凋亡的研究工具，尚未获准用于临床。
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| 分子式 |
C34H67NO3
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|---|---|
| 分子量 |
537.900691270828
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| 精确质量 |
537.512
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| CAS号 |
24696-26-2
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| 相关CAS号 |
C16-Ceramide-d31;852043-41-5;C16-Ceramide-13C16;C16-Ceramide-d9;2260669-51-8
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| PubChem CID |
5283564
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
0.919g/cm3
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| 沸点 |
675.396ºC at 760 mmHg
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| 熔点 |
94-95ºC
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| 闪点 |
362.267ºC
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| 蒸汽压 |
0mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.48
|
| LogP |
9.953
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| tPSA |
69.56
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
30
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| 重原子数目 |
38
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| 分子复杂度/Complexity |
508
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@@H](/C=C/CCCCCCCCCCCCC)O
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| InChi Key |
YDNKGFDKKRUKPY-TURZORIXSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C34H67NO3/c1-3-5-7-9-11-13-15-17-19-21-23-25-27-29-33(37)32(31-36)35-34(38)30-28-26-24-22-20-18-16-14-12-10-8-6-4-2/h27,29,32-33,36-37H,3-26,28,30-31H2,1-2H3,(H,35,38)/b29-27+/t32-,33+/m0/s1
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| 化学名 |
N-[(E,2S,3R)-1,3-dihydroxyoctadec-4-en-2-yl]hexadecanamide
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| 别名 |
C16 Ceramide; C16-ceramide; DTXSID301317974; RefChem:573083; ...; 24696-26-2;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Ethanol : ~20 mg/mL (~37.18 mM; warming and heat to 60°C)
DMSO: < 1 mg/mL DMF : 20 mg/mL (~37.18 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (3.72 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.0 mg/mL 澄清 EtOH + 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8591 mL | 9.2954 mL | 18.5908 mL | |
| 5 mM | 0.3718 mL | 1.8591 mL | 3.7182 mL | |
| 10 mM | 0.1859 mL | 0.9295 mL | 1.8591 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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