| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CDK8 (Kd = 2 nM by SPR [2]; Kd = 36 nM by competition binding [2]; IC50 for GSK3α = 0.462 μM, GSK3β = 0.690 μM [1])
CDK19 (Kd = 14-102 nM by competition binding [2]; IC50 for TNKS2 = 15.0 ± 0 μM [1]) TNKS1 (IC50 >10 μM [1]) |
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| 体外研究 (In Vitro) |
CCT251545 能显著抑制 COLO205-F1756 克隆 4（一种 APC 突变型人结直肠癌细胞系，该细胞系设计用于表达基于荧光素酶的 WNT 报告基因构建体）中的 WNT 通路活性，其 IC50 值为 0.035 μM [1]。CCT251545 对 Tankyrase 的抑制作用较弱（TNKS1 IC50 > 10 μM，TNKS2 IC50 = 15.0 μM）[1]。CCT251545 对其他 291 种激酶的选择性超过 100 倍，是一种高效且特异的化学探针，可用于鉴定人介导复合物相关蛋白激酶 CDK8 和 CDK19 [2]。除了调节 CDK8 和 CDK19 的其他靶向效应（例如 STAT1 调控的基因表达）外，CCT251545 还能改变 WNT 通路调控基因的表达 [2]。此外，CCT251545 的 IC50 为 9 nM，可降低 SW620 细胞中磷酸化 STAT1SER727 的水平 [2]。 CCT251545 的细胞活性很强 [2]。
抑制 7dF3 细胞中的 WNT 通路荧光素酶报告基因：IC50 = 0.005 ± 0.002 μM [1] 抑制 LS174T（β-catenin 突变体）细胞中的基础 WNT 通路活性：IC50 = 0.023 ± 0.011 μM [1] 抑制 SW480（APC 突变体）细胞：IC50 = 0.190 ± 0.030 μM [1] 抑制 PA-1 细胞中 WNT3a 配体依赖性报告基因：IC50 = 0.007 μM [1] 抑制 COLO205-F1756 克隆 4 细胞（带有 WNT 报告基因的 APC 突变体）：IC50 = 0.035 ± 0.003 μM [1] 抑制 7dF3 细胞中内源性 cMYC 转录（RT-PCR）：降低 12 倍，IC50 = 2.3 nM [1] 未抑制 RKO-F1522 细胞中 EF1-α 启动子驱动的荧光素酶活性（IC50 >10 μM）[1] 降低 SW620 细胞中磷酸化 STAT1 Ser727 水平：基于微珠的 ELISA 和免疫印迹法测得 IC50 = 9 nM [2] 在 Colo205 细胞中，使用针对 CDK8 或 CDK19 的诱导型 shRNA 抑制 TCF 依赖性报告基因活性，其表型与化合物处理相似 [2] 在 7dF3 细胞中，使用 esiRNA 敲低 CDK8 或 CDK19 可降低 TCF 依赖性转录，其效果与化合物相似 [2] 野生型过表达CDK8（而非激酶失活的D173A）可增加HEK293细胞中TCF报告基因的基础表达，该作用可被化合物[2]阻断。 用类似物2或6处理的小鼠β-catenin依赖性肠道类器官的基因表达微阵列分析显示，WNT靶基因（Axin2、Ascl2、Myc）和应激反应/STAT调节基因的表达发生改变，而无活性类似物8则无影响[2]。 对291种非突变激酶的抑制作用极小（仅对GSK3α/β有影响），且对CDK1-7或CDK9及其细胞周期蛋白伴侣无显著抑制作用[1][2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在携带已建立的SW620人结直肠癌异种移植瘤的NCr无胸腺小鼠中，CCT251545（70 mg/kg；口服；每日两次）可抑制肿瘤生长[2]。
在Tet-O-ΔN-β-catenin小鼠肠道增生模型中：口服CCT-251545（75、37.5、18.75 mg/kg，每日两次，连续2天）可剂量依赖性地降低增生隐窝长度，减少BrdU阳性增殖细胞，并增加Alcian Blue染色杯状细胞（Kruskal-Wallis检验P < 0.0003，Dunn事后检验P < 0.01）[1][2]。 在CD1(nu/nu)小鼠的MMTV-WNT-1乳腺癌同种异体移植模型中：用CCT-251545（每日两次，每次 75 mg/kg 或每日两次，每次 37.5 mg/kg，持续 10 天）降低了肿瘤生长速度和最终肿瘤重量（P < 0.01），降低了 WNT 靶基因 Axin2 和 Lbh 的表达，并诱导了消退标志物 Igfbp5 的表达（Igfbp5 的 Dunn 事后检验 P < 0.05）[2] 在无胸腺小鼠的 SW620 人结直肠癌异种移植模型中：口服 CCT-251545（每日一次，每次 70 mg/kg，持续 14 天）抑制了肿瘤生长，与载体相比，最终肿瘤重量减少了 70%；在肿瘤组织中观察到磷酸化 STAT1 Ser727 的减少 [2] 在 COLO205-F1756 克隆 4 人结直肠癌异种移植模型中：用 CCT-251545（70 mg/kg，每日两次，持续 9 天）治疗可显著抑制 WNT 驱动的荧光素酶报告基因活性（按肿瘤重量标准化后降低 80%，P = 0.0003），并使肿瘤重量降低 37.5%（P = 0.0379，Mann-Whitney U 检验）[1] |
| 酶活实验 |
CDK8-cyclin C SPR：将全长 CDK8-cyclin C 复合物通过标准胺偶联法固定在传感器芯片上。化合物用运行缓冲液（20 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、5 mM MgCl2、1 mM DTT、0.05% P20、0.1 mM EGTA、2% DMSO）稀释，并使用 Biacore S51 进行两倍稀释系列分析。相互作用循环包括 120 秒的样品注入（30 μL/min），随后是 350 秒的缓冲液流动。数据拟合到 1:1 相互作用模型，得到 CCT-251545 的 Kd = 2 nM [2]
CDK8/19 的报告分子置换分析：使用一种靶向 CDK8 或 CDK19 ATP 结合位点且具有快速结合动力学的探针。探针与靶标结合产生光学信号。测试化合物对探针的竞争性置换导致信号强度降低，且信号强度随化合物浓度增加而降低。测定了IC50值和动力学参数。对于CCT-251545，其对CDK8和CDK19的Kd值是通过与类似物4和6的竞争实验获得的[2] TNKS自磷酸化分析：将GST标记的TNKS1或TNKS2（250 nM）和生物素标记的NAD（5 μM）与测试化合物在50 mM HEPES、4 mM MgCl2、0.05% Pluronic F-68、1.4 mM DTT、0.5% DMSO、pH 7.7的缓冲液中于30°C孵育90分钟。用EDTA终止反应，并加入含有SA-Xlent和抗GST-K抗体的检测溶液。 1 小时后，在 615 和 665 nm 处测量 HTRF 信号。CCT-251545 的 IC50 值：TNKS1 >10 μM，TNKS2 = 15.0 ± 0 μM [1] |
| 细胞实验 |
7dF3 荧光素酶报告基因检测：将 7dF3 细胞（表达 ER-DSH 和 TCF-荧光素酶-IRES-GFP 的 HEK293 细胞）以 5000 个细胞/孔的密度接种于 384 孔板中。过夜培养后，加入化合物（终浓度范围为 90 μM 至 0.3 nM）。2 小时后，加入 β-雌二醇 (10 μM) 以诱导 DSH 表达。24 小时培养后，加入 SteadyGlo 荧光素酶试剂并读取发光值。IC50 值采用曲线拟合计算 [1]。
Tet-O-WNT 报告基因细胞系：使用表达 TCF-荧光素酶报告基因和四环素诱导型 cDNA（ΔN-LRP6、Dvl2、Axin-GID、ΔN-β-catenin、VP16-TCF4）的 HEK293 Tet-O 细胞。细胞接种后，24 小时后加入化合物。2 小时后，加入强力霉素 (0.05 μg/mL) 以诱导表达。24 小时后，加入 BrightGlo 并测量发光值 [1] cMYC 的定量 RT-PCR (Taqman)：用 CCT-251545 (9.1 μM 至 0.068 nM) 处理 7dF3 细胞 2 小时或 6 小时。裂解细胞，用 DNase 处理，并使用高容量 cDNA 反转录试剂盒合成 cDNA。Taqman 反应使用 FAM 标记的 cMYC 引物/探针和 VIC 标记的 LRP0 引物/探针作为内参。 Ct 值以 LRP0 为内参进行标准化，并以载体对照组为基准进行表达 [1] 磷酸化 STAT1 Ser727 和其他蛋白的免疫印迹分析：将细胞铺板，用化合物处理，在 RIPA 缓冲液中裂解，并进行超声破碎。取 20 μg 蛋白进行 SDS-PAGE 电泳分离，转移至硝酸纤维素膜，用 5% BSA 封闭，并与一抗（抗磷酸化 STAT1 Ser727、抗总 STAT1、抗 GAPDH 等）于 4°C 孵育过夜，随后与 HRP 标记的二抗孵育，并进行 ECL 化学发光检测 [2] 细胞热位移分析 (CETSA)：将 SW620 细胞用化合物处理 2 小时，然后裂解。将裂解液分成两份：一份置于 4°C，另一份在 50°C 加热 3 分钟。离心后，采用基于微珠的ELISA法测定上清液中CDK8和CDK19的水平。CCT-251545在0.30 μM浓度下表现出稳定性[2] shRNA/esiRNA敲低：使用转染了针对CDK8的强力霉素诱导型shRNA或针对CDK19的稳定型shRNA的Colo205细胞。使用Hiperfect试剂将针对CDK8、CDK19或对照的esiRNA混合物（每种10 ng）转染至7dF3细胞。24小时后，加入雌二醇激活WNT通路，再过24小时后测定荧光素酶活性[2] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 6-8 周龄雌性 NCr 无胸腺小鼠，已建立 SW620 异种移植瘤 [2]
剂量： 70mg/kg 给药途径： 口服； 给药途径： 每日两次；第 0-7 天。第 10-14 天的结果：肿瘤生长受到抑制，最终肿瘤重量较对照组减少了 70%。 Tet-O-ΔN-β-catenin 小鼠肠道增生模型：携带强力霉素诱导型突变 β-catenin 转基因的雌性小鼠，在饮用水中添加强力霉素 (2 mg/mL) 6-9 天，以诱导肠道隐窝增生。 CCT-251545以75、37.5或18.75 mg/kg的剂量，每日两次灌胃给药，连续2天（制剂：10% DMSO，5% Tween 20，85%生理盐水）。在安乐死前2小时，腹腔注射BrdU（2 mg/mL，溶于PBS）。十二指肠切片进行BrdU和阿利新蓝染色。对隐窝长度、BrdU阳性细胞百分比和杯状细胞百分比进行定量分析[1][2] MMTV-WNT-1乳腺癌同种异体移植模型：将MMTV-WNT-1肿瘤碎片（<1 mm3）皮下移植到CD1(nu/nu)小鼠体内。当肿瘤体积大于 5 mm³ 时，小鼠每日两次口服 CCT-251545（37.5 或 75 mg/kg），持续 10 天（制剂：10% DMSO、5% Tween 20、85% 生理盐水）。每日使用游标卡尺测量肿瘤尺寸，体积 = (宽度² × 长度)/2。收集肿瘤用于 RNA 提取和 qRT-PCR 分析 [2]。SW620 人结直肠癌异种移植模型：将 300 万个 SW620 细胞皮下注射到雌性无胸腺小鼠体内。当肿瘤体积达到约 60 mm³（第 13 天）时，小鼠每日一次口服 CCT-251545（70 mg/kg），持续 14 天（制剂：10% DMSO、5% Tween 20、85% 生理盐水）。每周测量三次肿瘤体积和体重。收集血浆和肿瘤样本用于PK和p-STAT1 Ser727分析[2] COLO205-F1756 克隆4异种移植模型：将300万个COLO205-F1756克隆4细胞（APC突变体，带有TCF-荧光素酶报告基因）皮下注射到雌性无胸腺小鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时，小鼠每天两次口服CCT-251545（70 mg/kg），持续9天（制剂：10% DMSO，5% Tween 20，85%生理盐水）。注射D-荧光素后，通过全身生物发光成像测量WNT通路活性。切除肿瘤并称重[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
小鼠单次静脉注射（0.2 mg/kg）和口服（0.5 mg/kg）给药后的药代动力学：静脉注射清除率 = 31 mL/min/kg，稳态分布容积 (Vss) = 1.1 L/kg，半衰期 (t1/2) = 0.55 h；口服达峰时间 (Tmax) = 0.25 h，AUC0-inf = 143 h·ng/mL，生物利用度 = 54% [1]
大鼠单次静脉注射（0.2 mg/kg）和口服（0.5 mg/kg）给药后的药代动力学：静脉注射清除率 = 26 mL/min/kg，稳态分布容积 (Vss) = 1.8 L/kg，半衰期 (t1/2) = 0.97 h；口服达峰时间 (Tmax) = 0.25 小时，AUC0-inf = 287.6 小时·ng/mL，生物利用度 = 88% [1] 体外代谢稳定性（固有清除率 Clint）：小鼠肝微粒体 = 141 μL/min/mg，大鼠肝微粒体 = 54 μL/min/mg，人肝微粒体 = 84 μL/min/mg [1] Caco-2 细胞渗透性：Papp = 24 × 10-6 cm/s，外排比 = 2.5 [1] 溶解度：动力学溶解度 = 94 μM，热力学溶解度 = 0.006 mg/mL（pH 7.4 磷酸盐缓冲液）[1] 血浆稳定性：未观察到血浆不稳定性 [1] SW620 异种移植瘤模型体内血浆和肿瘤浓度（70 mg/kg 口服，末次给药后）： 2 小时时，血浆 = 2525 ± 921 nM，肿瘤 = 1598 ± 324 nM；6 小时时，血浆 = 188 ± 64 nM，肿瘤 = 639 ± 115 nM [2] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
hERG钾通道抑制：IC50 >10 μM [1]
对CYP2C8、2C9和3A4观察到弱的CYP450抑制（未报告具体的IC50值）[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
CCT251545 是一种氯吡啶化合物，其结构为 3-氯吡啶，4 位和 5 位分别被 1-氧代-2,8-二氮杂螺[4.5]癸烷-8-基和 4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基取代。它是一种高生物利用度、口服生物利用度高的 Wnt 信号通路抑制剂（IC50 = 5 nM），也是一种高效且选择性的细胞周期蛋白依赖性激酶 CDK8 和 CDK19 的化学探针。它具有 Wnt 信号通路抑制剂、抗肿瘤药物和 EC 2.7.11.22（细胞周期蛋白依赖性激酶）抑制剂的活性。 CCT-251545 是一种氯吡啶类化合物，属于吡唑类和氮杂螺环化合物。它是一种选择性 CDK8 和 CDK19 化学探针，对其他 291 种激酶的选择性超过 100 倍。它作用于经典 WNT 通路中的 TCF 或其下游，抑制 β-catenin 介导的转录。CDK8-cyclin C 复合物与该化合物的 X 射线晶体学分析表明，其结合模式为 I 型，CDK8 C 端 Arg356 插入铰链区。该化合物已被用于确定磷酸化 STAT1 Ser727 作为 CDK8/19 抑制的药效学生物标志物。它表现出对 WNT 和 STAT 调控基因表达的上下文依赖性调节。潜在的治疗应用包括 WNT 通路激活的癌症（例如结直肠癌、乳腺癌）以及其他涉及 CDK8/19 的疾病。[1][2]
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| 分子式 |
C23H24CLN5O
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|---|---|
| 分子量 |
421.9226
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| 精确质量 |
421.166
|
| CAS号 |
1661839-45-7
|
| PubChem CID |
77050682
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
709.7±60.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
383.0±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.3 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.701
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| LogP |
2.53
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| tPSA |
63
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
30
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| 分子复杂度/Complexity |
617
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CN1C=C(C=N1)C2=CC=C(C=C2)C3=CN=CC(=C3N4CCC5(CCNC5=O)CC4)Cl
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| InChi Key |
LBFYQISQYCGDDW-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H24ClN5O/c1-28-15-18(12-27-28)16-2-4-17(5-3-16)19-13-25-14-20(24)21(19)29-10-7-23(8-11-29)6-9-26-22(23)30/h2-5,12-15H,6-11H2,1H3,(H,26,30)
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| 化学名 |
8-(3-chloro-5-(4-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)phenyl)pyridin-4-yl)-2,8-diazaspiro[4.5]decan-1-one
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| 别名 |
CCT251545; CCT 251545; CCT-251545;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 50 mg/mL (~118.51 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3701 mL | 11.8506 mL | 23.7012 mL | |
| 5 mM | 0.4740 mL | 2.3701 mL | 4.7402 mL | |
| 10 mM | 0.2370 mL | 1.1851 mL | 2.3701 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Identification of the molecular targets of CCT251545.
Altered CDK8/19 expression affects WNT-regulated transcription.Nat Chem Biol.2015 Dec;11(12):973-980. |
|---|
 X-ray crystal structural analysis of compound 1 bound to CDK8/cyclin C.
Characterisation of the interaction between CDK8/19 and the 3,4,5-trisubstituted pyridine series.Nat Chem Biol.2015 Dec;11(12):973-980. |
 Gene transcript profiling following inhibition of WNT signalling resulting from loss of β-Catenin or following treatment with 3,4,5-trisubstituted pyridines.
Biomarker modulation and therapeutic effects of compound 1 in human cancer cell lines andin vivoanimal models.Nat Chem Biol.2015 Dec;11(12):973-980. |
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