| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
CINPA1 targets the constitutive androstane receptor (CAR; NR1I3) as an inverse agonist/inhibitor. In HepG2 cells transiently transfected with hCAR1 and CYP2B6-luc reporter, CINPA1 inhibits CAR-mediated transactivation with an IC50 of approximately 70 nM. [1]
CINPA1 does not activate pregnane X receptor (PXR) at concentrations up to 40 μM. It is a weak antagonist of PXR with an estimated IC50 of 6.6 μM in HepG2-PXR stable cells. [1]
CINPA1 does not modulate the activity of other nuclear receptors tested, including FXR, GR, LXRα, LXRβ, PPARγ, RXRα, RXRβ, or VDR, at 18 μM. [1]
Constitutive Androstane Receptor (CAR): CINPA1 is an inhibitor of CAR, reducing CAR-mediated transcription with an IC₅₀ of approximately 70 nM in HepG2-hCAR CYP2B6-luc reporter cells . It exhibits >90-fold selectivity for CAR over PXR . Pregnane X Receptor (PXR): CINPA1 does not activate PXR and shows only weak PXR antagonist potency (68% inhibition by 18 μM CINPA1 against 5 μM rifampicin) . Other Nuclear Receptors: CINPA1 has no agonist or antagonist activity toward FXR, GR, LXRα/β, PPARγ, RXRα/β, or VDR . CINPA1 targets the constitutive androstane receptor (CAR; NR1I3), a nuclear receptor that functions as a xenobiotic sensor. CAR regulates the transcription of genes involved in drug metabolism, including cytochrome P450 enzymes (e.g., CYP2B6, CYP3A4) and drug transporters. CINPA1 acts as an inverse agonist, reducing the constitutive activity of CAR and inhibiting CAR-mediated transcription. It does not activate PXR, providing specificity for distinguishing CAR-mediated from PXR-mediated effects. This selectivity makes CINPA1 a critical tool for dissecting CAR-specific functions. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
CINPA1以剂量依赖的方式抑制CAR介导的转录激活，在转染了hCAR1和CYP2B6-luc报告基因的HepG2细胞中，其IC50约为70 nM。在5 μM浓度下，CINPA1完全抑制CAR活性，与阳性对照PK11195（50 μM）的效果相当。[1]
与PK11195和克霉唑不同，CINPA1在浓度高达40 μM时不会激活PXR介导的基因表达。在HepG2-PXR稳定细胞中，CINPA1表现出较弱的PXR拮抗作用，IC50为6.6 μM。 [1] 在过表达 hCAR1 的 HepG2-hCAR1 稳定细胞中，CINPA1 (10 μM) 可显著降低内源性 CYP2B6 和 CYP3A4 mRNA 水平（降低约 50-75%）。[1] 在内源性表达 CAR 和 PXR 的 LS174T 细胞中，CINPA1 (10 μM) 可使 CYP2B6 水平降低约 50-60%，而对 CYP3A4 的影响不显著，而 PK11195 则可增加 CYP3A4 水平。[1] 在来自多个供体的原代人肝细胞中，CINPA1 (0.3-5 μM) 可有效抑制 CITCO 诱导的 CYP2B6 表达（降低 50-80%）。CINPA1 不改变 CAR 蛋白水平或其核定位。 [1] 在TR-FRET共激活因子募集实验中，CINPA1抑制PGC-1α与GST-hCAR-LBD的结合，IC50值约为2-5 μM。[1] 在哺乳动物双杂交实验中，CINPA1（5 μM）降低SRC-1和TIF-2共激活因子与CAR-LBD的结合，并增加SMRTα和mNCoR共抑制因子的结合。[1] 在使用原代人肝细胞的染色质免疫沉淀实验中，CINPA1（5 μM）降低CITCO诱导的CAR募集至CYP2B6 XREM (dNR3)区域，并降低RNA聚合酶II的募集。[1] 在HepG2细胞中，CINPA1（1 μM；24小时）可转录PXR的CAR介导的转录激活[1]。 CINPA1 是一种电位滴定异生素试剂盒试剂 [1]。在原代人肝细胞中，CAR 内源性表达，CINPA1 可转录 CAR 介导的基因表达 [1]。CINPA1 不影响 CAR 的亚细胞定位和蛋白水平 [1]。在辅助双杂交实验中，CINPA1 可增强共阻断作用；在染色质免疫沉淀实验中，CINPA1 可干扰 CAR 与靶基因启动子区域的结合 [1]。CINPA1 可有效抑制共激活肽与 CAR-LBD 的相互作用。这些功能表明 CINPA1 是 CAR 的配体 [1]。 抑制 CAR 介导的转录：在 HepG2-hCAR CYP2B6-luc 报告细胞中，CINPA1 抑制 CAR 介导的转录，IC₅₀ 值约为 70 nM。在HepG2细胞中，1 μM CINPA1处理24小时可抑制CAR介导的转录激活，且不激活PXR。无细胞毒性：CINPA1浓度高达30 μM时无细胞毒性作用。抑制内源性CAR基因表达：在CAR内源性表达的原代人肝细胞中，CINPA1抑制CAR介导的基因表达。不影响CAR蛋白水平或定位：CINPA1不改变CAR的蛋白水平或亚细胞定位。改变共调节因子相互作用：在哺乳动物双杂交实验中，CINPA1增强共抑制因子与CAR配体结合域的相互作用，并减弱共激活因子与CAR配体结合域的相互作用。 CAR与DNA结合的破坏：在染色质免疫沉淀实验中，1 μM CINPA1可抑制CITCO诱导的CAR募集至CYP2B6或CYP3A4启动子，抑制率超过85%。CINPA1可破坏CAR与靶基因启动子区域的结合。CFTR氯离子转运的调控：在T84人结肠上皮细胞中，CINPA1作为CAR拮抗剂，可逆转CAR激动剂（CITCO和苯妥英钠）对cAMP依赖性Cl⁻分泌的抑制作用。CINPA1可强效抑制CAR介导的转录，IC50约为70 nM。它对PXR无显著活性，并且对包括FXR、LXR、PPARγ和RXR在内的一系列其他核受体具有选择性。该化合物在浓度高达 30 μM 时未显示出细胞毒性，表明其在体外研究中具有良好的安全窗口。其选择性和效力使其成为研究 CAR 依赖性基因调控以及 CAR 在药物代谢和毒性中作用的理想工具。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
抑制CAR激动剂诱导的氯离子分泌：在体内小鼠模型中，CAR激动剂TCPOBOP（3 mg/kg，连续7天）可降低肠道组织中CFTR mRNA和蛋白的表达，并抑制霍乱毒素诱导的肠道液体积聚，提示CINPA1作为CAR拮抗剂可能具有治疗分泌性腹泻的潜力。
CINPA1的体内研究已探索了CAR在神经元功能和脑血管完整性中的作用。这些研究表明，CAR信号通路影响着除外源性物质代谢之外的多种生理过程。CINPA1已被用于研究CAR抑制在动物模型中的作用，揭示了CAR在脑功能和血管生物学中的潜在作用。然而，与体外表征相比，动物模型中详细的药代动力学和疗效数据尚不充分。 |
| 酶活实验 |
LanthaScreen TR-FRET 共激活因子募集实验：将 GST 标签的人 CAR 配体结合域 (GST-hCAR-LBD, 5 nM) 与 Tb 抗 GST 抗体 (5 nM) 和荧光素标记的 PGC-1α 共激活因子肽 (125 nM) 混合于共调节缓冲液 G 中。加入浓度范围为 70 μM 至 3.5 nM 的测试化合物 (CINPA1)（1:3 稀释，10 个浓度水平）。DMSO 用作阴性对照（0% 抑制），克霉唑 (42 μM) 用作阳性对照（100% 抑制）。室温孵育 1 小时后，在 340 nm 激发下测量 490 nm 和 520 nm 处的 TR-FRET 发射。计算 520:490 比值，并从剂量反应曲线中得出 IC50 值。CINPA1 抑制 PGC-1α 与 CAR-LBD 的结合，IC50 值约为 2-5 μM。[1]
共调节因子募集实验：采用哺乳动物双杂交实验评估 CINPA1 对 CAR-共调节因子相互作用的影响。将 CAR 配体结合域与 GAL4 DNA 结合域融合作为诱饵，并将共抑制因子或共激活因子蛋白与 VP16 融合作为猎物。转染细胞并用 CINPA1 处理后，检测荧光素酶活性以评估 CAR-共调节因子相互作用的变化。结果表明，CINPA1 增强了共抑制因子与 CAR-LBD 的相互作用，同时减弱了共激活因子与 CAR-LBD 的相互作用。分子对接研究：利用 CAR 配体结合域结构进行对接研究，以分析 CINPA1 及其代谢物在 CAR 配体结合口袋内的结合模式。 CINPA1 的主要体外检测方法是利用报告基因系统进行 CAR 介导的转录分析。在这些分析中，将细胞转染 CAR 表达载体和含有 CAR 反应元件的荧光素酶报告质粒。用不同浓度（通常为 0.001-10 μM）的 CINPA1 处理细胞 24 小时后，测量荧光素酶活性。IC50 值由剂量反应曲线计算得出。选择性评估采用与 PXR 和其他核受体类似的报告基因检测方法。 |
| 细胞实验 |
CAR活性荧光素酶报告基因检测：将FLAG-hCAR1表达质粒和CYP2B6-luc报告质粒转染至HepG2细胞。24小时后，用胰蛋白酶消化细胞，并接种于384孔板（5000个细胞/孔）。用测试化合物处理细胞24小时后，使用SteadyLite试剂检测萤火虫荧光素酶活性。CAR抑制率的计算方法为：以50 μM PK11195为100%抑制率，DMSO为0%抑制率。[1]
PXR激活检测：将HepG2-PXR克隆1细胞（稳定表达hPXR和CYP3A4-luc）在不含酚红的DMEM培养基（含5%经活性炭-葡聚糖处理的FBS）中用测试化合物处理24小时。进行SteadyLite荧光素酶检测。 [1] 基因表达分析（qRT-PCR）：将细胞系或原代人肝细胞用化学物质处理24-48小时。提取并纯化RNA，制备cDNA。使用TaqMan探针进行定量RT-PCR，以18S作为内参。[1] 哺乳动物双杂交实验：将HEK293T细胞与pACT-hCAR1（VP16AD-hCAR1融合蛋白）、pBIND-coregulator（GAL4DBD-coregulator融合蛋白）和pG5-Luc报告基因共转染。处理24小时后，进行Dual-Glo荧光素酶报告基因检测，以测定萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶活性。[1] 染色质免疫沉淀（ChIP）实验：将原代人肝细胞用化合物处理45分钟或过夜。蛋白质用1%甲醛交联，用微球菌核酸酶消化，并进行超声处理。染色质用抗CAR抗体、抗RNA聚合酶II抗体或对照IgG进行免疫沉淀。进行定量实时PCR以确定CAR在CYP2B6 PBREM和XREM区域的占位情况。[1] CAR报告基因检测：使用稳定转染CYP2B6-luc报告基因和hCAR1的HepG2细胞（HepG2-hCAR1 CYP2B6-luc）来评估CINPA1的抑制活性。将细胞接种于96孔板中，并在CAR激动剂CITCO存在下用不同浓度的CINPA1处理以诱导报告基因表达。测量荧光素酶活性以计算抑制率，IC₅₀约为70 nM。原代人肝细胞实验：用 CINPA1 处理原代人肝细胞，并通过 qPCR 检测 CAR 靶基因（例如 CYP2B6、CYP3A4）的 mRNA 表达水平，以验证该化合物对内源性 CAR 活性的抑制作用。T84 细胞氯离子分泌实验：将 T84 人结肠上皮细胞以单层形式培养于 Transwell 小室中，并用 CINPA1 和 CAR 激动剂（1 μM CITCO 或 5 μM 苯妥英钠）共同处理 24 小时。通过短路电流测量评估 cAMP 依赖性激动剂诱导的跨上皮 Cl⁻ 分泌的变化，从而评价 CINPA1 作为 CAR 拮抗剂对 CFTR 功能的影响。 CINPA1 的细胞实验通常使用人肝癌细胞系（例如 HepG2）或其他表达 CAR 的细胞类型。将细胞用浓度范围为 0.01 至 30 μM 的 CINPA1 处理 24-48 小时。采用 qRT-PCR 或 Western blotting 检测 CAR 靶基因（例如 CYP2B6、CYP3A4）的表达。使用 MTT 或 LDH 释放试验评估细胞毒性，以确认观察到的效应并非由细胞死亡引起。这些试验对于验证 CAR 抑制的特异性和有效性至关重要。 |
| 动物实验 |
小鼠肠道CFTR表达研究：ICR小鼠腹腔注射小鼠特异性CAR激动剂TCPOBOP（3 mg/kg体重），连续7天。处死小鼠后，收集肠道组织，并通过qPCR和Western blot检测CFTR mRNA和蛋白表达水平。CINPA1可作为此类研究中的工具化合物，用于验证CAR介导的作用。霍乱毒素诱导的肠液积聚模型：小鼠预先注射TCPOBOP（3 mg/kg，连续7天），然后采用肠袢结扎法注射霍乱毒素，以测量肠液积聚情况。CAR激动剂可抑制肠液积聚，提示CINPA1作为CAR拮抗剂具有潜在的应用价值。
已在小鼠模型中开展了CINPA1的体内动物研究，以探讨CAR在神经和脑血管功能中的作用。在一项研究中，研究人员给小鼠注射了CINPA1，以评估CAR抑制对神经元功能和脑血管完整性的影响。给药方案和给药途径因实验设计而异。这些研究揭示了CAR除其已知的异生物质代谢功能之外的其他生理作用。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
代谢概况：CINPA1 在人肝微粒体中转化为两种主要代谢物。CYP3A4 首先将 CINPA1 转化为代谢物 1，后者随后经 CYP2D6 进一步代谢为代谢物 2。代谢物 1 对 CAR 功能的抑制活性很弱，而代谢物 2 无活性。分子对接研究表明，CINPA1 和代谢物 1 可以结合到 CAR 配体结合口袋中，而代谢物 2 可能无法进行结合所需的分子相互作用。溶解度：在 DMSO 中的溶解度为 150 mg/mL。储存稳定性：粉末在 -20°C 下可稳定保存 3 年，在 4°C 下可稳定保存 2 年；溶剂溶液在 -80°C 下可稳定保存 6 个月，在 -20°C 下可稳定保存 1 个月。
关于 CINPA1 的详细药代动力学数据有限。作为一种研究化合物，其吸收、分布、代谢和排泄（ADME）特性尚未得到充分表征。然而，其在细胞实验和动物模型中的活性表明，它具有细胞渗透性和生物利用度。该化合物通常溶于DMSO用于体外研究，并配制成合适的载体用于体内给药。其分子量为395.49 g/mol，logP值表明其具有中等亲脂性。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在模拟荧光素酶筛选实验（24 小时处理）的条件下，CINPA1 在 HepG2 细胞中浓度高达 30 μM 时未显示细胞毒性。在延长至 4 天的细胞活力实验中，CINPA1 在 HepG2、LS174T 或 HEK293T 细胞中浓度高达 10 μM 时也未显示细胞毒性。在更高浓度（30 μM 和 60 μM）下，CINPA1、克霉唑和 PK11195 在不同的细胞系中均表现出不同程度的细胞毒性。[1]
细胞毒性：CINPA1 在浓度高达 30 μM 时对细胞无细胞毒性。核受体选择性：CINPA1 对 FXR、GR、LXRα/β、PPARγ、RXRα/β 或 VDR 均无激动剂或拮抗剂活性，表明其具有良好的核受体选择性。仅供研究使用：本产品仅供非人类科学研究使用，不可用于治疗或兽医用途。 据报道，在基于细胞的检测中，CINPA1 在浓度高达 30 μM 时未显示出细胞毒性作用。这表明其在体外使用中具有良好的安全性。然而，由于 CINPA1 是一种研究工具而非治疗候选药物，因此目前尚无全面的毒理学数据，包括急性毒性和慢性毒性研究。其对 CAR 的选择性优于其他核受体，从而最大限度地减少了脱靶效应。体内研究尚未报告在药理学研究剂量下出现显著不良反应。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
化学结构：CINPA1（化学结构如图1B所示）购自ChemDiv。[1]
作用机制：CINPA1与CAR配体结合域结合，减少辅激活因子募集并增加辅阻遏因子相互作用，从而降低CAR与靶基因启动子的结合，并减少CAR调控基因（CYP2B6、CYP3A4）的转录。[1] 物种选择性：CINPA1不抑制小鼠CAR活性。在小鼠原代肝细胞中，CINPA1不抑制Cyp2b10表达；在转染小鼠CAR的HepG2细胞中，CINPA1不抑制荧光素酶报告基因活性。 [1] 特异性：CINPA1 不激活任何受测核受体（FXR、GR、LXRα、LXRβ、PPARγ、RXRα、RXRβ、VDR），且在 18 μM 浓度下不抑制其激动剂诱导的激活。[1] CINPA1 是一种研究化合物，主要用作分子探针，用于研究 CAR 功能和异生素受体信号传导。它于 2015 年首次在文献中报道。该化合物的高选择性和高活性使其成为区分 CAR 介导效应与 PXR 和其他核受体介导效应的宝贵工具。它尚未获准用于临床，仅供实验室研究。目前正在进行的研究将继续以 CINPA1 作为关键药理学工具，探索 CAR 的生理和病理作用。 |
| 分子式 |
C23H29N3O3
|
|---|---|
| 分子量 |
395.49466586113
|
| 精确质量 |
395.22
|
| 元素分析 |
C, 69.85; H, 7.39; N, 10.62; O, 12.14
|
| CAS号 |
102636-74-8
|
| 相关CAS号 |
102636-74-8;
|
| PubChem CID |
969470
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
3.9
|
| tPSA |
61.9
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
29
|
| 分子复杂度/Complexity |
552
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
C(OCC)(=O)NC1C=C2C(=CC=1)CCC1=CC=CC=C1N2C(CN(CC)CC)=O
|
| InChi Key |
AYQBYSPEGRYKFA-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C23H29N3O3/c1-4-25(5-2)16-22(27)26-20-10-8-7-9-17(20)11-12-18-13-14-19(15-21(18)26)24-23(28)29-6-3/h7-10,13-15H,4-6,11-12,16H2,1-3H3,(H,24,28)
|
| 化学名 |
Ethyl [5-[(diethylamino)acetyl]-10,11-dihydro-5H-dibenz[b,f]azepin-3-yl]carbamate
|
| 别名 |
CINPA1 CINPA-1 CINPA 1
|
| HS Tariff Code |
2934.99.03.00
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~250 mg/mL (~632.13 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5285 mL | 12.6425 mL | 25.2851 mL | |
| 5 mM | 0.5057 mL | 2.5285 mL | 5.0570 mL | |
| 10 mM | 0.2529 mL | 1.2643 mL | 2.5285 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
