Copper tripeptide (GHK-Cu)   中文名称: [N2-(N-甘氨酰-L-组氨酰)-L-赖氨酸]铜

Tripeptide

暴露在光下的成纤维细胞受到GHK-Cu/铜三肽（1 nM；0-96 小时）的影响，其群体倍增时间与对照组相似[1]。在 24 个受辐射的成纤维细胞中，GHK-Cu/铜三肽（1 nM；0-120 小时）产生的碱性成纤维细胞生长因子比正常对照要多得多 [1]。

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辐照后的成纤维细胞在无血清培养基中存活并复制。暴露于GHK-Cu的正常和辐照成纤维细胞的种群倍增速度比未处理的对照组快。GHK-Cu处理的成纤维细胞的生长速率与未处理的对照组接近，并且在GHK-Cu暴露后早期产生的碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子明显多于未处理的对照组。 结论：受辐照的成纤维细胞在无血清培养基中存活和复制，建立了体外评价生长因子生成的理想模型。铜三肽加速正常和受辐照的成纤维细胞的生长，使受辐照的成纤维细胞接近正常对照的群体倍增时间。GHK-Cu-处理的成纤维细胞早期增加碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子的产生可能促进伤口愈合。［1］

Glycyl-L-histidyl-L-lysine（腹腔注射；1.5、5、50、150 和 450 mg/kg；10 次）可促进肝细胞的有丝分裂活性，并以剂量依赖性方式降低免疫反应性[2]。甘氨酰-L-组氨酰-L-赖氨酸（腹腔注射；0.5、5、50 μg/kg）在高架十字迷宫测试中发挥抗焦虑作用[3]。

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腹腔注射三肽Gly-His-Lys，剂量分别为1.5、5、50、150和450 mg/kg，可刺激肝细胞的有丝分裂活性，并剂量依赖性地抑制免疫反应性（产生抗体的细胞数量和延迟型超敏反应）。[2]

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在实验开始前12分钟，以0.5、5、50 μg/kg的剂量，腹腔注射三肽Gly-His-Lys，雄性大鼠在升高+迷宫试验中具有抗焦虑作用，表现为张开臂时间增加，闭合臂时间缩短。注射0.5 μg/kg多肽后抗焦虑作用最明显，随剂量的增加而减弱。在所有研究剂量中，用三肽分子中的d -赖氨酸代替l -赖氨酸都伴随着嗜神经效应的显著减弱。在所有剂量下，d -丙氨酸与Gly-His-Lys肽的N端或c端连接可使其抗焦虑作用趋于平衡；在给药剂量为50 μg/kg后，一些增加焦虑的指标发生了显著变化。[3]

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在所有指定剂量下给予Gly-His-Lys肽对大鼠所检查的行为反应有显著影响（表1）。以0.5 μg/kg剂量组效果最佳，小鼠张开臂时间增加136% (p<0.01)，进入张开臂次数增加208% (p<0.01)，中央平台停留时间增加109% （p<0.05）。将多肽剂量增加至5 μg/kg时，抗焦虑作用并未增强，大部分研究参数与前一组相似。进一步增加gly - hisys的注射剂量至50 μg/kg后，这些作用减弱，各实验组间各研究参数之间出现显著差异。因此，张开双臂的时间与控制值没有显著差异，显著低于低剂量和中剂量组（分别减少45%和39%，p<0.05）。此外，与0.5 μg/kg剂量肽组相比，该组小鼠的闭臂时间和进入闭臂次数分别减少28% （p<0.05）和37% （p<0.05）。只有肽剂量为50 μg/kg时，小鼠进入闭锁臂的数量显著增加(增加45%；P <0.05)。这种现象可以通过增加肽剂量引起的大鼠运动活动的增加来解释。Gly-His-Lys的嗜神经效应研究结果促使我们研究其修饰的行为效应。用d -赖氨酸替代l -赖氨酸可显著降低大鼠的行为活动，并使肽的抗焦虑作用基本持平（表2）。仅注射0.5 μg/kg多肽后在中央平台停留的时间(增加134%；P <0.01)和50 μg/kg(降低56%；P <0.05)，较小剂量时进入闭合臂的次数(59%；P <0.05)显著高于对照组。在0.5和5 μg/kg剂量下，d -丙氨酸附着在Gly-His-Lys分子的n端对肽的研究行为参数没有显著影响。以最大剂量（50 μg/kg）给予肽可显着减少张开臂的时间(66%；P <0.05)和中心平台(48%；p < 0.05);闭臂时间增加31% （p<0.05）。这些行为变化表明了大鼠的焦虑。d -丙氨酸附着在Gly-His-Lys分子的c端后，三肽的嗜神经作用与之前修饰时相当均匀，其个体表现具有相反的性质。特别是，注射5 μg/kg剂量的肽后，进入张开臂的动物数量减少了65%；P <0.05)和50 μg/kg(降低72%；P <0.05)，以及注射最高剂量后在中心平台停留的时间(增加42%；p < 0.05)。这些行为变化，类似于在d -丙氨酸n端定位的情况下观察到的，表明大鼠焦虑增加。由此可见，Gly-His-Lys肽在0.5 ~ 50 μg/kg的剂量范围内腹腔给药后具有抗焦虑作用，且以最低剂量最有效。在低剂量的典型调节肽中使用的肽的最大活性可能通过触发细胞内形成大量第二信使分子的级联扩增机制、超亲和受体的功能以及能够积累循环信号分子的受体分子的存在来实现。这些关于Gly-His-Lys肽抗焦虑作用的数据再次印证了调控肽作用的多功能化概念。[3]

实验在细胞的第一或第二代进行。实验时，用磷酸盐缓冲的生理盐水洗涤成纤维细胞，用0.05%胰蛋白酶将融合细胞从烧瓶壁上释放出来。胰酶大豆抑制剂（GIBCO）以1:1的比例灭活胰蛋白酶。通过台盼蓝染色排除法测定细胞培养活力，并使用血细胞计和相差显微镜进行重复细胞计数。然后使用市售无血清培养基，以5 × 103（正常）和3 × 103（辐照）细胞/孔的密度在无菌96孔板的每孔中接种细胞。该培养基已被证明能维持真皮成纤维细胞生长至少7天，存活率高于90%。
在0小时时，在治疗组中加入无血清培养基中的GHK-Cu溶液（1 × 10−9 M），在未处理的对照组中加入等体积的无血清普通培养基。将每个细胞系中未经处理的细胞作为对照。细胞计数使用细胞增殖试验系统，在启动24、48、72和96小时后使用试剂4-[3-（4-碘苯基）-2-（4-硝基苯基）- 2h -5-四氮唑]-1,3-苯二磺酸盐（WST-1）进行细胞计数，以生成生长曲线。WST-1测定法是一种定量测定细胞增殖和细胞活力的比色法，基于线粒体脱氢酶在活细胞中切割四氮唑盐WST-1。它是一种非放射性的替代氚胸腺嘧啶掺入试验。使用自动车牌阅读器读取化验结果。用市售软件分析光密度。细胞计数通过与标准曲线进行比较来确定，标准曲线是根据每种细胞类型和培养基计算的已知细胞数量得出的。
每隔24小时，从测试井中收集三份无细胞上清液。样品保存在- 80°C的微离心管中，用于随后的生长因子测定。采用固相酶联免疫吸附法每隔24小时检测各组bFGF、TGF-β1和VEGF的表达。我们从对数最佳拟合曲线中计算细胞群体加倍时间（PDT）。［1］

我们使用了由圣彼得堡国立大学化学研究所合成的Gly-His-Lys肽（实验系列I）及其修饰类似物Gly-His-D-Lys、D-Ala-GlyHis-Lys和Gly-His-Lys-D-Ala（实验系列II）。将这些肽溶解于生理盐水中，并在实验前12分钟以0.5、5和50 μg/kg的剂量进行腹腔注射。两组对照组均注射等体积的生理盐水（1 ml/kg体重）。采用高架十字迷宫（EPM）实验研究了这些肽的抗焦虑作用。迷宫由四个相互垂直的臂组成（两个相对的无壁开放臂和两个30厘米高的封闭臂），长50厘米，宽14厘米，离地50厘米。实验开始时，将大鼠置于迷宫中心，头部朝向一个开放臂；记录大鼠在5分钟内于开放臂、封闭臂和中心区域停留的时间以及进入开放臂和封闭臂的次数。肽类药物的抗焦虑作用通过大鼠进入开放臂的次数和停留时间的增加来评估。[3]

吸收、分布和排泄
普瑞扎肽（游离态和铜络合态）均可穿过角质层。其吸收受pH值影响，在生理pH值下吸收率最高。

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代谢/代谢物
普瑞扎肽被分解为组氨酰赖氨酸，后者可能进一步降解为其他蛋白水解代谢物。

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生物半衰期
普瑞扎肽在数分钟内迅速消除。

[1]. Effects of copper tripeptide on the growth and expression of growth factors by normal and irradiated fibroblasts. Arch Facial Plast Surg. 2005 Jan-Feb;7(1):27-31.

[2]. Tripeptide Gly-His-Lys is a hepatotropic immunosuppressor. Bull Exp Biol Med. 2002 Jun;133(6):586-7.

[3]. Anxiolytic effects of Gly-His-Lys peptide and its analogs. Bull Exp Biol Med. 2015 Apr;158(6):726-8.

[4]. Effect of Gly-Gly-His, Gly-His-Lys and their copper complexes on TNF-alpha-dependent IL-6 secretion in normal human dermal fibroblasts. Acta Pol Pharm. 2012 Nov-Dec;69(6):1303-6.

普瑞扎肽是一种由甘氨酸、组氨酸和赖氨酸组成的三肽，易与铜离子形成复合物。普瑞扎肽用于护肤和护发化妆品中。已知其有助于伤口愈合，目前正在研究其在慢性阻塞性肺病和转移性结肠癌中的潜在应用。

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药物适应症
常用于护肤和护发化妆品中。

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作用机制
普瑞扎肽与铜形成复合物后，可增加I型胶原蛋白和糖胺聚糖的合成和沉积。它还能增加基质金属蛋白酶-2以及基质金属蛋白酶-1和-2组织抑制剂的表达，表明其在组织重塑的调节中发挥作用。普瑞扎肽的抗氧化活性被认为与其为超氧化物歧化酶提供铜的能力有关，而其抗炎活性则归因于其在损伤过程中抑制铁离子（Fe2+）的释放。普瑞扎肽还能促进损伤部位的血管生成。这些作用的具体机制尚不清楚。普瑞扎肽的作用究竟是源于三肽本身的作用，还是源于其定位和转运铜的能力，目前也尚不明确。已知普瑞扎肽能与肝素和硫酸肝素结合。

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药效学
普瑞扎肽与铜形成的复合物可改善皮肤弹性、密度和紧致度，减少细纹和皱纹，减轻光损伤，并促进角质形成细胞增殖。普瑞扎肽还具有抗氧化和血管生成作用，并且似乎可以调节损伤后的组织重塑。

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目的：评估铜三肽 (GHK-Cu) 在无血清体外环境下对正常和受照射成纤维细胞的生长以及碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1 和血管内皮生长因子自分泌产生的影响。
方法：从接受头颈部肿瘤放射治疗患者的术中标本中分离出原代人真皮成纤维细胞系。将正常和受照射的成纤维细胞在无血清和无生长因子的培养基中培养。处理组暴露于GHK-Cu (1 x 10(-9) mol/L)。我们测量了细胞计数以及碱性成纤维细胞生长因子、转化生长因子β1 和血管内皮生长因子的产生。[1]

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结果显示了一些有趣的发现。首先，我们证实了在无血清培养基中，经辐射处理的成纤维细胞能够存活并增殖。据我们所知，本实验室是第一个利用经辐射处理的人类成纤维细胞记录到这一现象的实验室。我们实验室此前已证实，在无血清环境下，正常成纤维细胞、胎儿成纤维细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞均能存活并增殖。无血清细胞培养对于测量生长因子环境的变化至关重要，并且现在已成为未来研究经辐射处理的成纤维细胞的可行模型。其次，我们的数据通过直接比较模型，确定了正常成纤维细胞和经辐射处理的成纤维细胞在生长因子基线产生方面的差异。除72小时外，正常成纤维细胞产生的bFGF在所有时间点均显著高于经辐射处理的成纤维细胞。在24小时时，正常成纤维细胞产生的TGF-β1显著高于经辐射处理的成纤维细胞。最后，与照射后的成纤维细胞相比，正常成纤维细胞在24小时和48小时时VEGF的产生显著增加。可以合理推测，这些差异在临床上对这些伤口愈合特性的差异起着重要作用。
第三，数据表明，用GHK-Cu调节环境与生长因子环境的变化相关。经GHK-Cu处理的照射成纤维细胞在24小时和72小时时bFGF的产生显著高于对照组。事实上，经GHK-Cu处理的照射成纤维细胞在24小时时产生的bFGF显著高于正常对照组。此外，经GHK-Cu处理的照射成纤维细胞在24小时时产生的VEGF也显著高于正常对照组。鉴于这些生长因子早期存在于伤口愈合过程中具有已知益处，这一发现意义重大。
最后，数据显示，使用GHK-Cu调节环境与成纤维细胞光动力疗法(PDT)的显著增强相关。这在正常细胞系和受照射细胞系中均得到了证实。一个引人注目的发现是，经GHK-Cu处理的受照射成纤维细胞的群体增长与正常对照组相似。其临床意义尚不清楚。然而，鉴于成纤维细胞在伤口愈合中的重要作用，可以假设，受照射伤口床中成纤维细胞数量的增加将导致伤口愈合的整体改善。

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Gly-His-Lys是由甘氨酸、L-组氨酸和L-赖氨酸残基按顺序连接而成的三肽。它具有代谢物、螯合剂、伤口愈合剂和保肝剂的作用。
普瑞扎肽是一种由甘氨酸、组氨酸和赖氨酸组成的三肽，易与铜离子形成复合物。普瑞扎肽用于皮肤和头发的化妆品中。已知它有助于伤口愈合，目前正在研究其在慢性阻塞性肺病和转移性结肠癌中的潜在应用。

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药物适应症
常用于皮肤和头发的化妆品中。
FDA标签

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作用机制
普瑞扎肽与铜形成的复合物可增加I型胶原蛋白和糖胺聚糖的合成和沉积。它还能增加基质金属蛋白酶-2以及基质金属蛋白酶-1和-2组织抑制剂的表达，表明其在组织重塑的调节中发挥作用。人们认为普瑞扎肽的抗氧化活性源于其为超氧化物歧化酶提供铜的能力，而其抗炎作用则源于其在损伤过程中阻断铁离子（Fe2+）的释放。普瑞扎肽还能促进损伤部位的血管生成。这些作用的具体机制尚不清楚。普瑞扎肽的作用究竟是源于三肽本身的作用，还是源于其定位和转运铜的能力，目前也尚不明确。已知普瑞扎肽能与肝素和硫酸肝素结合。

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药效学
普瑞扎肽与铜形成复合物后，可改善皮肤弹性、密度和紧致度，减少细纹和皱纹，减轻光损伤，并促进角质形成细胞增殖。普瑞扎肽还具有抗氧化和促血管生成作用，并且似乎能调节损伤后的组织重塑。

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研究人员用D-赖氨酸取代L-赖氨酸，以研究该氨基酸在三肽分子中的作用。已知L-赖氨酸会影响神经系统的功能，特别是通过调节杏仁核中央核的血清素释放和下丘脑腹内侧核的去甲肾上腺素释放。修饰后，所研究的神经营养肽的作用显著减弱，这表明赖氨酸在该分子的功能活性中起着重要作用。使用D-丙氨酸修饰三肽的目的是提高其对破坏性蛋白酶的抵抗力，从而增强其预期效果。然而，分子结构的改变使抗焦虑作用减弱甚至逆转（焦虑加剧）。后者的观察结果也间接证实了该三肽参与了恐惧和焦虑的产生。修饰分子的受体改变可能是导致上述结果的机制之一；然而，这个问题需要进一步研究[3]。

C14H22CUN6O4

401.91

402.107

89030-95-5

72957-37-0 (monoacetate); 130120-57-9 (copper acetate salt/solvate); 89030-95-5 (copper salt)

71587328

Gly-His-Lys + Cu²⁺

GHK-Cu

Light blue to blue solid powder

1.045

186.03

5

7

10

25

428

2

C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)[O-])NC(=O)CN.[Cu+2]

NZWIFMYRRCMYMN-ACMTZBLWSA-M

InChI=1S/C14H24N6O4.Cu/c15-4-2-1-3-10(14(23)24)20-13(22)11(19-12(21)6-16)5-9-7-17-8-18-9;/h7-8,10-11H,1-6,15-16H2,(H,17,18)(H,19,21)(H,20,22)(H,23,24);/q;+2/p-1/t10-,11-;/m0./s1

copper;(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]hexanoate

Prezatide copper; GHK copper; 89030-95-5; CG-copper peptide; Copper tripeptide-1; Oristar Cu-GHK; UNII-6BJQ43T1I9; 6BJQ43T1I9;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~50 mg/mL (~124.41 mM)

GHK-Cu Formulation Tips

Avoid strong oxidizing ingredients.

 

Avoid ingredients that form complexes with Cu ions. For example:

 

Carnosine has a structure similar to GHK, so it may compete for copper ions and turn the solution purple.

 

Similarly, EDTA may chelate copper ions from GHK-Cu and turn the solution green.

 

GHK-Cu is water-soluble (1g GHK-Cu can easily dissolve in 20ml water). To prevent decomposition and color change due to excessively low or high pH:

 

Adjust the pH to near neutral.

 

Add all other ingredients (including preservatives) except GHK-Cu first.

 

Add GHK-Cu in the final step.

 

The process should be carried out below 40°C.

 

Troubleshooting color changes: To identify the problematic ingredient (often the optimal one):

 

Mix GHK-Cu with each individual ingredient and observe the reaction.

 

Consider removing or replacing any ingredient that causes a color change.

 

Usage & Dosage Recommendations

Based on conventional applications and efficacy studies, the suitable concentration range for GHK-Cu is typically between 500 ppm and 5,000 ppm.

 

To achieve a concentration of 2,000 ppm in the final product:

 

Add 0.2% GHK-Cu (Copper Tripeptide-1) powder, or

 

Add 10% of a GHK-Cu (Copper Tripeptide-1) 20,000 ppm solution.

 

Incompatibility List (Avoid Combining With)

Avoid mixing with Retinoids and Retinoid-like drugs (e.g., HPR).

 

Avoid mixing with Chelating Agents, such as:

 

Disodium EDTA

 

Capryloyl Hydroxamic Acid

 

Carnosine

 

Avoid mixing with Acids, such as:

 

Lactic Acid

 

Salicylic Acid

 

Fruit Acids (AHAs)

 

Mandelic Acid

 

Lactobionic Acid

 

Azelaic Acid

 

Avoid mixing with Vitamin C & Derivatives, Potassium Methoxysalicylate, Tranexamic Acid, Glabridin, Arbutin.

 

Avoid mixing with Sodium Polyglutamate (PGA Sodium), Carbomer, and other anionic polymers.

 

Avoid mixing with Niacinamide.

 

Avoid mixing with Color-changing and colored substances, such as:

 

Serine

 

Metabisulfite

 

Salicylic Acid

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。