本研究使用雄性Sprague-Dawley大鼠（12-14周龄，体重200-240克）。动物饲养于温度22-24℃、相对湿度60%的环境中，光照/黑暗周期为12小时，并可自由摄取食物和水。收集动物样本前，动物禁食过夜，但可饮用去离子水。[1]

将200克生药材用75%乙醇回流提取，然后浓缩至2克生药材/毫升，以10毫升/公斤体重的剂量进行灌胃给药。该提取物含有九种香豆素，浓度（μg/mL）分别为：东莨菪素 101、黄毒醇 32.3、黄毒素 162、补骨脂素 77.8、异欧前胡素 43.0、佛手柑内酯 110、氧代欧前胡素 19.0、欧前胡素 92.7、异欧前胡素 85.6。[1]

尿液采样：将八只大鼠分为两组（六只处理组，两只空白对照组）。处理组大鼠口服给予提取物；对照组大鼠口服给予去离子水。大鼠饲养于代谢笼中。分别在给药后 0-4、4-8、8-12、12-24、24-36、36-48、48-60 和 60-72 小时采集尿液样本。 [1]

胆汁取样：8只大鼠用氨基甲酸乙酯麻醉，并用PE-10管插入总胆管。6只大鼠麻醉后口服提取物；2只大鼠口服去离子水作为空白对照。用加热灯维持体温。分别在给药后0-1、1-3、3-5、5-8、8-12、12-20和20-24小时采集胆汁样本。所有样本均储存于-20℃直至分析。[1]

吸收、分布和排泄
据报道，口服¹⁴C-香豆素的排泄情况因物种而异。4天内，大鼠尿液中排泄了47%的标记物，粪便中排泄了39%；而兔子尿液中排泄了92%，粪便中几乎检测不到。雌兔口服50 mg/kg 3-¹⁴C-香豆素后，24小时内超过80%的标记物经尿液排出。呼出气体中未检测到标记物，粪便中也仅检测到少量标记物。大鼠口服¹⁴C-香豆素后粪便中¹⁴C的大量排出可能是由于未吸收的物质所致。
大鼠腹腔注射¹⁴C-香豆素24小时后，38%经尿液排出，13%经粪便排出，30%以¹⁴C-二氧化碳的形式排出，剩余的9%主要存在于盲肠中。
有关¹⁴C-香豆素的吸收、分布和排泄的更完整数据，请访问HSDB记录页面。
代谢/代谢物
…重组人CYP1A和重组人CYP2E1能有效催化香豆素-3,4-环氧化物（CE）的生成。在小鼠、大鼠和人肝微粒体中，CYP1A1/2和CYP2E1抗体的共同抑制分别阻断了CE的生成38%、84%和67%至92%（n=3个独立样本）。尽管CYP1A和2E似乎是肝脏中CE生成的最活跃催化剂，但使用基于机制的抑制剂5-苯基戊炔的研究表明，CYP2F2在小鼠肺微粒体中负责高达67%的CE生成。与CE途径不同，香豆素3-羟基化是小鼠、大鼠和人肝微粒体中一种次要的香豆素产物，主要由CYP3A和CYP1A催化，这证实了CE和3-羟基香豆素是通过不同的代谢途径形成的。为了研究CYP2A功能的物种差异，我们检测了来自九种哺乳动物（大鼠、小鼠、仓鼠、兔、豚鼠、猫、狗、食蟹猴和人）的肝微粒体催化睾酮7α-和15α-羟基化以及香豆素7-羟基化的能力。针对大鼠CYP2A1的抗体能够识别所有受检哺乳动物肝微粒体中的一种或多种蛋白质。然而，猫、狗、食蟹猴和人类肝微粒体催化的睾酮7α-和/或15α-羟基化反应速率极低。15α-羟基化反应在人类肝微粒体中最为活跃，而大鼠和猫肝微粒体催化的香豆素7-羟基化反应速率极低。肝微粒体产生的香豆素代谢物中，7-羟基香豆素的比例在不同物种间存在差异。在人类和猴子中，7-羟基香豆素是主要代谢物（>70%），但在大鼠中仅为次要代谢物（<1%）。人肝微粒体中香豆素的7-羟基化反应由一种高亲和力酶催化（Km 0.2–0.6 μM，该酶可被抗大鼠CYP2A1抗体显著抑制（>95%））。22名受试者肝微粒体中香豆素7-羟基化的速率差异约为17倍。这种差异与CYP2A6水平的个体间差异高度相关（r² = 0.956）。这些结果表明，CYP2A6是人肝微粒体中香豆素7-羟基化反应的主要或全部催化酶。用苯巴比妥或地塞米松治疗猴子可增加香豆素7-羟化酶的活性，而用β-萘基黄酮类化合物治疗则导致其活性略有下降。与大鼠和小鼠不同，食蟹猴和人类的CYP2A6表达没有性别差异。虽然抗凝血剂双香豆素和华法林在结构上与香豆素相似，但它们似乎并非CYP2A6的底物。……大鼠可以羟基化香豆素的3位。兔子也可以……肝脏酶系统香豆素-7-羟化酶负责猫、豚鼠、仓鼠、兔子，尤其是……体内大多数香豆素的羟基化。在人类中，雪貂、小鼠和大鼠的肝脏中不存在香豆素。大鼠肝脏中含有该酶的抑制剂。有关香豆素代谢/代谢产物（共15种代谢产物）的更完整数据，请访问HSDB记录页面。已知香豆素的人体代谢产物包括 3-羟基香豆素、7-羟基香豆素和香豆素 3,4-环氧化物。

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给大鼠口服根茎提取物后，尿液中未代谢香豆素的累积排泄量占给药剂量的百分比为：东莨菪素 14.93%，黄毒酚 9.66%，补骨脂素 0.016%，氧代香豆素 0.034%，其他香豆素小于 0.01%。 [1]

以给药剂量百分比表示的未代谢香豆素的累积胆汁排泄量分别为：东莨菪素 0.16%，黄毒醇 0.015%，黄毒素 0.045%，补骨脂素 0.027%，异欧前胡素 0.019%，佛手柑内酯 0.024%，氧代欧前胡素 0.039%；化合物异欧前胡素和异欧前胡素的排泄量均低于 0.01%。[1]

不到 15% 的分析物以未代谢药物的形式经尿液排泄，不到 1% 的分析物经胆汁排泄，表明这九种香豆素在体内经历了显著的代谢。[1]

毒性概述
鉴定：香豆素存在于多种植物的果实、根、树皮、茎、叶和枝条中，包括零陵香豆、决明子、薰衣草、当归、苜蓿、鹿舌草和三叶草。它被用作食品调味剂；香水中精油的定香剂和增味剂；肥皂、牙膏和护发产品中的成分；烟草制品中用于增强和固定其天然味道、风味和香气；以及工业产品中用于掩盖难闻的气味。人体暴露：四名男性和四名女性志愿者每人服用200毫克香豆素胶囊。大部分剂量在24小时内排出体外，主要以7-羟基香豆素和另一种代谢物邻羟基苯乙酸的形式排出。对四名男性和两名女性成年人口服或静脉注射香豆素后计算的血药浓度-时间曲线显示符合开放式二室模型。香豆素的主要代谢场所是肝脏，其代谢产物的葡萄糖醛酸化可在多个部位发生，包括肝脏、肠壁和其他组织。动物实验：给雌性白化大鼠服用香豆素可诱发持续约24小时的高血糖症。连续7天给未交配的雌性Wistar大鼠口服花生油可溶性香豆素，导致血清孕酮水平降低。将6只雄性大鼠分为几组，连续7天灌胃给予花生油可溶性香豆素。低剂量组未观察到肝脏相对重量增加；然而，最高剂量组观察到肝脏相对重量呈剂量依赖性增加。最高剂量组的组织学变化包括中央小叶肝细胞的脂肪变性和空泡变性。两个最高剂量组均导致中央小叶葡萄糖-6-磷酸（G6P）和苯胺羟化酶的丢失。在两个最高剂量组中均观察到溶酶体和超微结构变化；后者表现为中央小叶肝细胞粗面内质网肥大和扩张、溶酶体体积增大以及自噬空泡数量增加。在两个最高剂量组中，细胞色素P-450和氨基吡啶脱甲基酶活性也呈剂量依赖性降低。在DBA/2和CH3/HeJ小鼠的饲料中添加香豆素，喂养32周。观察到血清天冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰转移酶和山梨醇脱氢酶活性略有升高，但未观察到肉眼或显微镜下的肝脏病变。该研究发现香豆素可以抑制紫外线诱导的大肠杆菌修复。在妊娠第6至17天，在妊娠小鼠的饲料中添加香豆素。尽管高剂量组观察到骨化延迟和死胎率升高，但所有剂量组均未观察到畸形率升高。将三只雄性和三只雌性奥斯本-门德尔大鼠随机分为几组，喂食含香豆素的饲料四周。观察到明显的生长迟缓、睾丸萎缩和轻度至中度肝损伤。肝损伤表现为细胞死亡和濒死状态、中央小叶细胞嗜酸性粒细胞和胞质减少以及胆管增生。一只雄性犬和一只雌性犬连续16天，每周6天服用香豆素胶囊。雄性犬因病情危重于第9天实施安乐死，雌性犬于第16天死亡。肝脏呈黄色，外观类似肉豆蔻。显微镜检查显示肝小叶结构明显紊乱，肝细胞中度增大并伴有空泡化，大量脂肪弥漫分布，局灶性坏死，纤维化，以及轻至中度胆管增生。脾脏苍白，骨髓变薄并伴有脂肪沉积，胆囊中度扩张。将4至8只不同品种的雄性狒狒分组，喂食添加香豆素的饲料，持续两年。未观察到体重变化。高剂量组的相对肝脏重量增加。在6至10个月时，未观察到与治疗相关的肝脏组织学变化。所有剂量组均未观察到胆管增生或纤维化。在高剂量组的三只动物的肝脏超微结构中观察到内质网明显扩张。 [

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相互作用
香豆素是7,12-二甲基苯并[a]蒽诱导的大鼠乳腺肿瘤的中等抑制剂。它还能抑制苯并[a]芘诱导的小鼠前胃肿瘤。
本研究探讨了香豆素预处理抑制苯并[a]芘在ICR小鼠中遗传毒性的潜力。体重21-24克的雄性和雌性小鼠分别灌胃给予溶于橄榄油的香豆素，剂量分别为65克/千克和139毫克/千克体重。对照组仅给予橄榄油。动物每天给药，持续一周，休息一天。六次给药后，动物注射苯并[a]芘（150毫克/千克，溶于橄榄油）。在注射苯并[a]芘后不同时间点（12-72小时），对骨髓涂片中多染性红细胞的微核进行了检测。单独使用香豆素预处理并不能诱导雄性和雌性小鼠多染性红细胞中微核的形成。在接受苯并[a]芘处理前用香豆素预处理的雄性小鼠中，多染性红细胞中的微核数量显著减少。为了明确这种减少并非由于微核形成起始时间的相位偏移所致，我们在注射苯并[a]芘后的不同时间间隔进行了检测。结果表明，单独使用香豆素并不能诱导微核的产生，而预先用香豆素预处理的雄性小鼠中，苯并[a]芘诱导的微核数量显著减少。这种香豆素预处理的保护作用在雌性小鼠中未观察到。以下药物可能增强香豆素或茚二酮衍生物的反应：酒精（急性中毒）、别嘌醇、氨基水杨酸、胺碘酮、合成代谢类固醇、水合氯醛、氯霉素、西咪替丁、氯贝特、甲氧苄啶-磺胺甲噁唑、达那唑、右旋氨苄西林钠、二氮嗪、二氟尼柳、双硫仑、红霉素、依他尼酸、非诺洛芬钙、胰高血糖素、布洛芬、吲哚美辛、流感疫苗、异烟肼、甲氯芬那酸、甲芬那酸、甲基硫氧嘧啶、甲硝唑、咪康唑、萘啶酸、新霉素（口服）、己酮可可碱、保泰松、丙氧芬、丙基硫氧嘧啶、奎尼丁、奎宁、水杨酸盐、链激酶。磺吡酮、磺胺类药物、舒林酸、四环素类药物、噻嗪类利尿剂、甲状腺药物、三环类抗抑郁药、尿激酶、维生素E。/香豆素和茚二酮衍生物/
以下药物……可能……降低……对香豆素或茚二酮衍生物的反应：酒精（慢性酒精中毒）、巴比妥类药物、卡马西平、皮质类固醇、促肾上腺皮质激素、乙基氯芬酸、谷氨酰胺、灰黄霉素、巯嘌呤、甲基醌、含雌激素的口服避孕药、利福平、螺内酯、维生素K。/香豆素和茚二酮衍生物/

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非人类毒性值
大鼠口服LD50：293 mg/kg
小鼠口服LD50： 196 mg/kg
小鼠腹腔注射LD50：220 mg/kg
小鼠皮下注射LD50：242 mg/kg
豚鼠口服LD50：202 mg/kg

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[1]. Biomed Chromatogr. 2011 Jul;25(7):7

香豆素是一种无色晶体、片状物或无色至白色粉末，具有令人愉悦的香草香气和苦涩、芳香、辛辣的味道。(NTP, 1992)
香豆素是一种色酮化合物，其酮基位于2位。它可以用作荧光染料、植物代谢物和人体代谢物。
据报道，香豆素存在于锦鸡儿(Caragana frutex)、泽兰(Eupatorium japonicum)和其他一些具有相关数据的生物体中。
香豆素是一种羟基肉桂酸。它是一种存在于许多植物中的芳香化合物，在植物萎蔫时释放。它通过与维生素K竞争而具有抗凝血活性。
香豆素是一种存在于许多植物中的化学化合物/毒素，尤其是在零陵香豆、鼠尾草和野牛草中。它具有甜美的香气，很容易被识别为新鲜干草的气味。它具有临床价值，是多种抗凝血剂（尤其是华法林）的前体。——维基百科 香豆素类化合物是一类天然存在的苯并-α-吡喃酮类化合物，具有重要且多样的生理活性。其母体化合物香豆素天然存在于许多植物、天然香料和食物中，例如零陵香豆、肉桂（又称中国肉桂）、桂皮、甜三叶草、绿茶、薄荷、芹菜、蓝莓、薰衣草、蜂蜜（源自甜三叶草和薰衣草）和胡萝卜，以及啤酒、烟草、葡萄酒和其他食品中。这些植物、香料和食物中香豆素的浓度范围很广，从芹菜中的<1 mg/kg到肉桂中的7000 mg/kg，再到桂皮中的87000 mg/kg。据估计，人类每天通过饮食摄入0.02 mg/kg的香豆素。香豆素常用作香水和香精的添加剂，其浓度范围从高档香水中的<0.5%至6.4%到洗涤剂中的<0.01%。假设香豆素能被皮肤完全吸收，那么人类通过香水和化妆品摄入的香豆素总量估计为0.04毫克/公斤体重/天。1954年，美国食品药品监督管理局（FDA）基于大鼠肝毒性报告，禁止将香豆素用作食品添加剂。鉴于香豆素对人类的潜在肝毒性，欧盟委员会将香豆素直接添加到天然食品中的量限制在2毫克/公斤食物/天，但允许在酒精饮料、焦糖、口香糖和某些“常规食品”中添加更高含量的香豆素。除了膳食和消费品摄入外，香豆素在临床上还用作抗肿瘤药物，并用于治疗淋巴水肿和静脉功能不全。香豆素的摄入范围很广，从天然食物成分中的每日11毫克到临床给药后的每日7克不等。尽管人类接触香豆素后出现不良反应的情况很少见，且仅与临床剂量相关，但近期证据表明，香豆素可导致大鼠和小鼠出现肝脏肿瘤，并可导致小鼠出现克拉拉细胞毒性和肺部肿瘤。香豆素的多重效应以及人类持续接触香豆素的情况，促使人们投入大量研究，以了解香豆素诱导毒性/致癌性的机制及其与人类的相关性。这些研究揭示了香豆素代谢和毒性的显著物种差异，从而加深了人们对香豆素在啮齿动物中的作用机制及其对人类香豆素暴露安全性评估意义的理解。2004年10月，欧洲食品安全局（EFSA，2004）对香豆素进行了审查，以确定其在食品中的每日耐受摄入量（TDI）。欧洲食品安全局 (EFSA) 发布意见称，香豆素不具有遗传毒性，阈值法最适合用于安全性评估。EFSA 建议的每日耐受摄入量 (TDI) 为 0 至 0.1 mg/kg 体重/天。考虑到膳食摄入量，估计的人体总暴露量为 0.06 mg/kg/天。作为一种药物，香豆素已被用于多种用途，并有多种给药方案。与华法林和其他香豆素衍生物不同，香豆素不具有抗凝血活性。然而，低剂量（通常为 7 至 10 mg/天）的香豆素可用作“静脉扩张剂”，以促进静脉健康和静脉血流。此外，香豆素在临床上用于治疗各种病因引起的高蛋白淋巴水肿 (A7913)。
另见：肉桂（部分）；中国肉桂（部分）；中国肉桂叶油（部分）……查看更多……

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作用机制
香豆素及其某些代谢物已被证实能抑制肝脏和肝微粒体中的葡萄糖-6-磷酸酶。它会干扰紫外线损伤DNA的切除修复过程，并干扰大肠杆菌WP2中紫外线照射的T1噬菌体的宿主细胞再激活。
4-羟基香豆素衍生物和茚二酮（也称为口服抗凝剂）均为维生素K拮抗剂。它们用作灭鼠剂的原理是抑制各种血液凝固因子合成过程中维生素K依赖的步骤。凝血级联反应中依赖于维生素K的蛋白质包括促凝血因子II（凝血酶原）、VII（凝血酶原转化酶）、IX（圣诞因子）和X（斯图尔特-普罗尔因子），以及凝血抑制蛋白C和S。所有这些蛋白质均在肝脏合成。在释放到血液之前，这些前体蛋白会经历多种（细胞内）翻译后修饰。维生素K在其中一种修饰中作为辅酶发挥作用，具体而言，它通过在特定位点将10-12个谷氨酸残基羧化为γ-羧基谷氨酸（Gla）。这些Gla残基的存在对于各种凝血因子的促凝活性至关重要。维生素K氢醌（KH2）是活性辅酶，其氧化为维生素K 2,3-环氧化物（KO）为羧化反应提供所需的能量。环氧化物随后通过KO还原酶催化的两步还原反应进行循环利用……KO还原酶是香豆素类抗凝剂的作用靶点。香豆素类抗凝剂抑制KO还原酶活性，导致KH2供应迅速耗竭，有效阻止Gla残基的形成。这导致未羧化凝血因子前体在肝脏中积累。在某些情况下，这些前体在未羧化的情况下进一步加工，并（取决于物种）可能出现在血液中。此时，未羧化的蛋白质被称为脱羧凝血因子。正常的凝血因子以酶原形式循环，只有在经过有限的蛋白水解降解激活后才能参与凝血级联反应。脱羧凝血因子缺乏促凝活性（即无法被激活），也不能在维生素K的作用下转化为活性酶原。接受抗凝治疗的人类体内可检测到高水平的循环脱羧凝血因子，而接受华法林治疗的大鼠和小鼠体内这些因子的水平则微乎其微。/抗凝血灭鼠剂/

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C9H6O2

146.15

146.036

C, 73.97; H, 4.14; O, 21.89

91-64-5

Coumarin-d4;185056-83-1

323

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

298.0±0.0 °C at 760 mmHg

68-73 °C(lit.)

118.3±16.1 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.595

1.39

30.21

0

2

0

11

196

0

O=C1C=CC2C(=CC=CC=2)O1

ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-NZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C9H6O2/c10-9-6-5-7-3-1-2-4-8(7)11-9/h1-6H

2H-1-Benzopyran-2-one

Coumarin; NSC 8774; NSC-8774; NSC8774

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 29 ~100 mg/mL (198.43 ~684.28 mM )
Ethanol : ~29 mg/mL
H2O : ~4 mg/mL (~27.37 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (20.53 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 30.0 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (20.53 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 30.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 3 mg/mL (20.53 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 30.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 8.33 mg/mL (57.00 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。