CY 09

NLRP3
CY-09 targets the NLRP3 inflammasome, a multi-protein complex that plays a critical role in the innate immune response. It binds directly to the ATP-binding motif of the NLRP3 NACHT domain and inhibits NLRP3 ATPase activity. By inhibiting NLRP3 ATPase activity, it blocks NLRP3 oligomerization and inflammasome assembly, thereby suppressing NLRP3 inflammasome activation.

CY-09 在 1 至 10 μM 的浓度下，可对单钠尿酸盐 (MSU)、MSU、ATP 诱导的 caspase-1 激活以及 IL-1β 在脂多糖 (LPS) 刺激的骨髓来源巨噬细胞 (BMDM) 中的迁移产生反应。CY-09 具有细胞死亡依赖性抑制作用。CY-09 给药也可抑制 BMDM 中胞质 LPS 诱导的非经典 NLRP3 激活。CY-09 缓冲液可激活 NLRP3 炎症小体，但对 LPS 诱导的启动效应无影响。 CY-09 可抑制多种主要抑制因子，并发现 CY-09 可抑制 HEK-293T 细胞中 Flag-NLRP3 和 mCherry-NLRP3 的相互作用，表明 CY-09 可阻止 NLRP3 寡聚化 [1]。

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CY-09 特异性阻断巨噬细胞中 NLRP3 的激活。CY-09 可阻断 NLRP3 炎症小体的激活。CY-09 可抑制 NLRP3 寡聚化和炎症小体的组装。CY-09 可直接与 NLRP3 结合并抑制其 ATPase 活性。CY-09 可与 NLRP3 NACHT 结构域的 ATP 结合位点结合。 CY-09抑制NLRP3 ATPase活性[1]。
在浓度为1至10 μM时，CY-09可抑制LPS刺激的骨髓来源巨噬细胞（BMDM）中单钠尿酸盐（MSU）和ATP诱导的caspase-1活化以及IL-1β的产生。CY-09还可抑制BMDM中胞质LPS诱导的非经典NLRP3活化。CY-09不影响LPS诱导的启动效应。它可阻止HEK-293T细胞中NLRP3的寡聚化。

在用CY-09处理的腔室中，单钠尿酸盐（MSU）注射诱导的IL-1β生成和中性粒细胞浸润显著受到抑制，表明CY-09可以阻止腔室内MSU诱导的NLRP3炎症小体激活。即使在第25天停止治疗，CY-09治疗仍可将NLRP3突变的发生率提高到30至48天。CY-09还能抑制caspase-1通道的正常加工，这在高脂饮食（HFD）喂养的小鼠脂肪组织中已得到证实[1]。CY-09在体内抑制NLRP3激活，并能预防CAPS小鼠模型的新生儿死亡。CY-09抑制MSU诱导的腹膜炎和MWS小鼠模型中的NLRP3激活。CY-09通过抑制NLRP3依赖性炎症逆转糖尿病小鼠的代谢紊乱。 CY-09 可用于治疗高脂饮食诱导的糖尿病小鼠的代谢紊乱。CY-09 可抑制糖尿病小鼠体内 NLRP3 依赖性代谢炎症。CY-09 对健康人或痛风患者的细胞具有体外活性。CY-09 对健康人或痛风患者的细胞均具有活性[1]。
CY-09 可特异性阻断巨噬细胞中 NLRP3 的激活，并在体内抑制 NLRP3 炎症小体的激活。在 CY-09 处理的小鼠模型中，MSU 注射诱导的 IL-1β 生成和中性粒细胞浸润显著减少。CY-09 在 CAPS 和 2 型糖尿病小鼠模型中均显示出治疗效果。

MST 检测 [1]
KD 值使用 Monolith NT.115 仪器测定。将一系列浓度的 CY-09（0.025 mM 至 1.2 nM）与 200 nM 纯化的 His-GFP-NLRP3 蛋白在检测缓冲液（50 mM Hepes、10 mM MgCl2、100 mM NaCl、pH 7.5 和 0.05% Tween 20）中孵育 40 分钟。将样品加载到 NanoTemper 玻璃毛细管中，并使用 100% LED 功率和 80% MST 功率进行 MST 检测。KD 值通过 NanoTemper 软件，利用质量作用方程，根据实验的重复读数计算得出。

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微粒体稳定性 [1]
微粒体稳定性由一家 CRO 公司测定。将 CY-09 或对照化合物的 DMSO 储备液 (10 mM) 用 50% 甲醇稀释至 100 µM。取 6 µl 100 µM 化合物溶液与 534 µl 肝微粒体溶液（0.7 mg 蛋白/ml 磷酸钾缓冲液）混合，制备化合物工作液。取 90 µl 该工作液于 37°C 孵育 10 分钟，然后加入 10 µl NADPH 再生系统启动反应。分别在 0、10、30 和 60 分钟时，加入 300 µl 冷乙腈（含 500 nM 甲苯磺丁脲内标）终止反应，并以 4,000 rpm 离心 20 分钟。将上清液 (100 µl) 加入水 (300 µl) 中，并用液相色谱/串联质谱法进行分析。通过剩余测试化合物峰面积与内标峰面积的比值来确定测试化合物浓度随时间的变化。然后计算半衰期 (t1/2) 和肝清除率 (CLhep)。

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NLRP3 ATPase 活性和 ATP 结合测定 [1]
对于 ATPase 活性测定，将纯化的重组人蛋白 (1.4 ng/µl) 与指定浓度的 CY-09 在反应缓冲液中于 37°C 孵育 15 分钟。然后加入 ATP (25 µM，超纯 ATP)，并将混合物在 37°C 下继续孵育 40 分钟。根据制造商的说明，使用 ADP-Glo 激酶检测试剂盒（Promega，美国密歇根州麦迪逊）通过发光 ADP 检测法测定 ATP 转化为二磷酸腺苷 (ADP) 的量。结果以残余酶活性占溶剂处理酶的百分比表示。对于 ATP 结合实验，将纯化的 NLRP3 蛋白 (0.1 ng/µl) 与 ATP 结合琼脂糖孵育 1 小时，然后加入不同浓度的 CY-09，并在 4°C 下振荡孵育 2 小时。洗涤磁珠并在上样缓冲液中煮沸。对样品进行免疫印迹分析。ASC 寡聚化实验 [1] 将 BMDM 以 1 × 10⁶/ml 的密度接种于 6 孔板中。第二天，更换培养基，并用 50 ng/ml LPS 预处理细胞 3 小时。细胞用CY-09处理30分钟，然后用尼日利亚菌素刺激30分钟。去除上清液，用冰冷的PBS洗涤细胞，然后用NP-40裂解细胞30分钟。裂解液在4℃下以330 g离心10分钟。沉淀物用1 ml冰冷的PBS洗涤两次，并重悬于500 µl PBS中。向重悬的沉淀物中加入2 mM二琥珀酰亚胺辛二酸酯，在室温下旋转孵育30分钟。然后将样品在4℃下以330 g离心10分钟。将交联沉淀物重悬于 30 µl 样品缓冲液中，煮沸后进行免疫印迹分析。

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细胞色素 P450 抑制 [1]
在无锡爱普生科技有限公司测定了 CY-09 对五种主要 CYP 同工酶（1A2、2C9、2C19、2D6 和 3A4）的抑制作用。将 CY-09 的工作储备液（10 mM，溶于 DMSO）用磷酸盐缓冲液稀释至 100 µM。配制五种抑制剂的储备液，浓度均为 3 mM，溶于 DMSO：α-萘黄酮、磺胺苯唑、N-3-苄基尼伐诺、奎尼丁和酮康唑。将抑制剂储备液用磷酸盐缓冲液稀释至 30 µM。用磷酸盐缓冲液稀释甲醇储备液，制备了针对五种主要CYP同工酶（1A2、2C9、2C19、2D6和3A4）的底物混合物（非那西汀、双氯芬酸、S-美芬妥英、右美沙芬和咪达唑仑）。将已知抑制剂CY-09或空白溶液（20 µl工作储备液）和底物混合物溶液（20 µl）与人肝微粒体（158 µl，0.253 mg/ml，溶于磷酸盐缓冲液）在37°C下孵育10分钟，然后加入辅因子NADPH（20 µl，10 mM，溶于33 mM MgCl2）。继续孵育，分别于 0、5、10、20、30 和 60 分钟时取样，与冷乙腈（含 200 ng/ml 甲苯磺丁脲作为质谱内标）混合，并在 4000 rpm 下离心 20 分钟。取上清液，采用液相色谱-串联质谱法分析代谢物和内标的峰面积。分别在有无测试化合物存在的情况下测定峰面积，用于计算抑制率。使用 SigmaPlot v.11 软件绘制对照活性百分比与测试化合物浓度的关系图，并对数据进行非线性回归分析。采用三参数逻辑方程计算 IC50 值。当最高浓度 (50 µM) 下的抑制率低于 50% 时，IC50 值报告为“>50 µM”。

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hERG 通道检测 [1]
在一家 CRO 公司使用手动膜片钳技术 (QPatchHTX) 评估了 CY-09 对 hERG 钾通道的影响。使用了来自 Aviva Biosciences 的稳定表达 hERG 钾通道的 CHO 细胞。测定了 CY-09 和阿米替林（作为阳性对照）对全细胞 hERG 电流的抑制作用。
使用纯化的 NLRP3 蛋白在无细胞酶活性测定中评估 CY-09。将该化合物与 NLRP3 和 ATP 孵育，并测量 ATPase 活性的抑制情况。使用生化测定评估其与 NLRP3 NACHT 结构域的结合亲和力。测定 IC50 值以量化 NLRP3 ATPase 抑制的效力。

为诱导NLRP3炎症小体激活，将5 × 10⁵/ml的BMDM和6 × 10⁶/ml的PBMC接种于12孔板中。次日早晨更换培养基，并用50 ng/ml的LPS或400 ng/ml的Pam3CSK4（用于非经典炎症小体激活）刺激细胞3小时。之后，向培养基中加入CY-09或其他抑制剂，继续培养30分钟。随后，用MSU（150 µg/ml）、鼠伤寒沙门氏菌（感染复数）刺激细胞4小时，或用ATP（2.5 mM）或尼日利亚菌素（10 µM）刺激细胞30分钟。使用 Lipofectamine 2000 将细胞用 poly(dA:dT) (0.5 µg/ml) 转染 4 小时，或用 LPS (500 ng/ml) 转染过夜。通过免疫印迹分析细胞提取物和沉淀的上清液。

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共聚焦显微镜[1]
共聚焦分析按先前描述的方法进行 (Yan et al., 2015)。简而言之，将 2 × 10⁵/ml 的 BMDM 接种于盖玻片上。第二天，将培养基更换为含 LPS (50 ng/ml) 的 Opti-MEM (1% FBS)，孵育 3 小时，然后加入指定剂量的 CY-09，再孵育 30 分钟。之后，用 MitoTracker Red (50 nM) 或 MitoSOX (5 µM) 刺激和染色 BMDM。用冰冷的PBS洗涤三次后，将细胞用4% PFA/PBS溶液在室温下固定15分钟，然后用含Tween 20的PBS洗涤三次。使用蔡司LSM700共聚焦显微镜进行分析。

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细胞内钾或氯离子检测[1]
为了准确测量细胞内钾离子浓度，将BMDM细胞接种于6孔板中过夜，然后用50 ng/ml LPS预处理3小时。之后，用CY-09处理细胞30分钟，再用尼日利亚菌素刺激30分钟。彻底吸出培养基，并用65%超纯硝酸裂解细胞。采用PerkinElmer Optima 2000 DV电感耦合等离子体发射光谱仪，以钇为内标，测定细胞内K+浓度。
为准确测定细胞内氯离子浓度，将BMDM细胞接种于12孔板中过夜，然后用50 ng/ml LPS预处理3小时。之后，用CY-09或MCC950处理细胞30分钟，再用尼日利亚菌素刺激15分钟。移除12孔板的上清液，加入ddH2O（200 µl/孔），并将上清液在37°C下孵育15分钟。将裂解液转移至1.5 ml EP管中，并在10,000 g下离心5分钟。将 160 µl 上清液转移至新的 1.5 ml EP 管中，并与 40 µl MQAE (10 µM) 混合。使用 BioTek 多功能微孔板读数仪 (Synergy2) 检测吸光度。每个实验均设置对照，以确定吸取后剩余的细胞外氯离子量，并从中扣除该值。

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免疫沉淀 (IP) 和 pull-down 实验 [1]
对于内源性 IP 实验，用含有完全蛋白酶抑制剂的 NP-40 裂解缓冲液刺激并裂解 BMDM 细胞。将细胞裂解液与一抗和 Protein G Mag Sepharose (GE Healthcare) 在 4°C 下孵育过夜。用 Protein G 珠沉淀抗体结合的蛋白质，并进行免疫印迹分析。对于外源性免疫沉淀（IP）实验，将HEK-293T细胞（3 × 10⁵/ml）接种于6孔板中，并用聚乙烯亚胺（PEI）转染质粒。24小时后，收集细胞并用NP-40裂解缓冲液裂解。提取的蛋白用抗Flag抗体包被的磁珠进行免疫沉淀，然后通过免疫印迹分析进行检测。对于下拉实验，收集BMDM或293T细胞裂解液，并以8,000 rpm离心。将上清液转移至另一离心管中，并彻底弃去细胞碎片。将预洗的链霉亲和素磁珠加入上清液中，在4°C下振荡预孵育2小时，然后以8,000 rpm离心。将上清液转移至另一离心管中，弃去链霉亲和素磁珠以去除非特异性结合的蛋白。将预处理后的上清液和纯化的人重组NLRP3蛋白（溶于裂解缓冲液）与指定剂量的游离CY-09孵育，随后与指定剂量的生物素标记的CY-09孵育1小时。之后，将样品与预洗过的链霉亲和素磁珠孵育过夜。磁珠分别用0.1% Tween 20的PBS溶液和1% NP-40的PBS溶液洗涤两次，以去除非特异性结合蛋白，并在SDS缓冲液中煮沸。
使用LPS刺激的骨髓来源巨噬细胞（BMDM）和HEK-293T细胞进行基于细胞的检测，以评估CY-09的作用。细胞用浓度为1至10 μM的CY-09处理，并检测caspase-1活化、IL-1β生成和NLRP3寡聚化。

采用 DMA:EL:HP-β-CD (10%, wt/vol) = 5:5:90 (vol/vol/v) 的配方，CY-09 在 pH 7.4 时浓度达到 1 mg/ml。采用 DMSO:Solutol HS 15:生理盐水 = 10%:10%:80% (vol/vol/v) 的配方，CY-09 在 pH 9.0 时浓度达到 5 mg/ml。在体内实验中，CY-09配制于含有10% DMSO、10% Solutol HS 15和80%生理盐水的溶剂中。[1]

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MSU诱导的腹膜炎[1]
在腹腔注射MSU（1 mg MSU晶体溶于0.5 ml无菌PBS）前30分钟，腹腔注射40 mg/kg CY-09或溶剂。6小时后，处死小鼠，并用10 ml冰冷的PBS灌洗腹腔。采用流式细胞术检测腹腔灌洗液中中性粒细胞标志物Ly6G和CD11b，以分析多形核中性粒细胞的募集情况。采用ELISA法测定血清或腹腔灌洗液中IL-1β的产生。

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CY-09 在小鼠体内的药代动力学特性测定 [1]
在 C57BL/6J 小鼠中，分别以 5 mg/kg 和 10 mg/kg 的剂量，单次静脉注射和口服给药 CY-09 后，测定了其药代动力学（每个时间点 n = 3）。分别于给药后 0.08、0.25、0.5、1、2、4、8、10 和 24 小时（静脉注射）以及 0.25、0.5、1、2、4、8、10 和 24 小时（口服）采集血样。然后采用液相色谱/串联质谱法对样品进行定量分析，并使用 WinNonlin v.6.3 软件进行数据分析。

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MWS 小鼠模型 [1]
将 Nlrp3A350VneoR 小鼠与 LysM-Cre 小鼠 (B6.129P2-Lyz2tm1(cre)Ifo/J) 杂交。从出生后第 4 天开始，每天口服给予 CY-09 (20 mg/kg) 或 MCC950 (20 mg/kg)。每天监测小鼠的体重和存活率。

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高脂饮食 (HFD) 和 CY-09 治疗 [1]
将 6 周龄的野生型 (WT) 或 Nlrp3−/− 小鼠（血糖水平和体重相近）随机分为不同组。为了构建 HFD 诱导的糖尿病小鼠模型，小鼠喂食 HFD 14 周。糖尿病小鼠每天腹腔注射 CY-09 2.5 mg/kg，持续 6 周。在进行CY-09治疗及后续实验时，小鼠均饲喂高脂饮食（HFD）。
在小鼠模型中，使用CY-09评估其对CAPS和2型糖尿病的治疗效果。在CY-09治疗组中，MSU注射诱导的IL-1β生成和中性粒细胞浸润显著受到抑制。通过测量炎症标志物和疾病症状来评估疗效。

接下来，我们研究了该化合物的药代动力学特征，并评估了CY-09在体内的治疗潜力。首先，我们使用人肝微粒体和鼠肝微粒体评估了CY-09的代谢稳定性，结果显示其稳定性良好，在两种微粒体中的半衰期均大于145分钟（表S1）。我们测试了CY-09对五种主要细胞色素P450酶（1A2、2C9、2C19、2D6和3A4）的抑制活性，其半数抑制浓度（IC50）分别为18.9、8.18、>50、>50和26.0 µM（表S2），表明其药物相互作用风险较低。为了评估其潜在的心脏毒性，我们采用自动膜片钳技术（QPatchHTX）检测了CY-09对人醚-a-go-go (hERG)钾通道的影响，结果表明，CY-09在10 µM浓度下对hERG通道无活性（表S3）。随后，我们进一步评估了CY-09在C57BL/6J小鼠体内的药代动力学特征，小鼠分别通过单次静脉注射或口服给药。CY-09表现出良好的药代动力学特征，半衰期为2.4 h，曲线下面积为8,232 (h·ng)/ml，生物利用度为72%（表S4）。基于这些数据，我们进一步评估了CY-09的体内疗效。[1]
CY-09的分子量为423.42，分子式为C19H12F3NO3S2。该化合物的CAS号为1073612-91-5，为纯度≥98%的粉末，应在推荐条件下储存。

CY-09 是一种选择性 NLRP3 抑制剂。除临床前研究外，目前尚无详细的毒性数据。该化合物仅供研究使用，不可用于人体治疗。

[1]. Identification of a selective and direct NLRP3 inhibitor to treat inflammatory disorders. J Exp Med. 2017 Nov 6;214(11):3219-3238.

NLRP3炎症小体与多种人类疾病的发病机制密切相关。尽管一些化合物已被开发用于抑制NLRP3炎症小体的激活，但目前尚无直接且特异性靶向NLRP3的化合物，因此NLRP3本身是否可作为疾病预防或治疗的靶点尚不明确。本研究表明，化合物CY-09能够特异性阻断NLRP3炎症小体的激活。CY-09直接结合NLRP3 NACHT结构域的ATP结合基序，抑制NLRP3的ATPase活性，从而抑制NLRP3炎症小体的组装和激活。重要的是，CY-09治疗在寒冷吡啶相关自身炎症综合征（CAPS）和2型糖尿病小鼠模型中显示出显著的治疗效果。此外，CY-09在体外对健康个体的单核细胞和痛风患者的滑膜细胞也显示出活性。因此，我们的研究结果提供了一种高选择性、直接作用的小分子NLRP3抑制剂，并表明NLRP3可作为体内治疗NLRP3相关疾病的靶点。[1]

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在本研究中，我们描述了一种高效、选择性、直接作用的NLRP3抑制剂，该抑制剂在小鼠和人细胞中均表现出显著的NLRP3炎症小体抑制活性。CY-09将成为研究NLRP3生物学及其在炎症性疾病中作用的药理学研究的多功能工具。
一些化合物已显示出对NLRP3炎症小体的强效抑制活性，并在动物模型中进行了测试，但它们的非特异性作用限制了其临床应用潜力。萝卜硫素对AIM2或NLRC4炎症小体的抑制作用表明，它可能减弱这些炎症小体在宿主防御中的作用（Greaney等，2016）。萝卜硫素、异甘草素、β-羟基丁酸 (BHB)、小白菊内酯、BAY 11-7082 和 INF39 的广泛抗炎活性（Heiss 等，2001；Yip 等，2004；Honda 等，2012；Strickson 等，2013；Fu 等，2015；Cocco 等，2017）提示这些化合物可能引起免疫抑制副作用并增加感染风险。氟芬那酸和甲芬那酸对氯离子外排的影响以及 BHB 对钾离子外排的影响表明，这些化合物靶向 NLRP3 的上游信号通路，并具有其他不可避免的生物活性（Youm 等，2015；Daniels 等，2016）。 MCC950在多种NLRP3相关疾病的小鼠模型中均显示出强效的抑制活性和有益作用（Coll等，2015；Dempsey等，2017），但其机制尚不明确。本研究表明，MCC950能够阻断NLRP3激动剂诱导的氯离子外流，而氯离子外流被认为是NLRP3激活的上游信号事件（Daniels等，2016）。这提示MCC950可能靶向调节细胞容量的阴离子通道或其他氯离子通道，从而抑制NLRP3炎症小体的激活，并可能具有非特异性作用。本研究还描述了CY-09，一种直接靶向NLRP3本身的特异性NLRP3炎症小体抑制剂。我们发现CY-09在CAPS、2型糖尿病和痛风的小鼠模型中具有显著的预防或治疗作用。因此，本研究描述了一种具有治疗NLRP3相关疾病潜力的直接且特异性的NLRP3抑制剂。我们的研究结果表明，药理学抑制NLRP3 ATPase活性可以有效治疗NLRP3相关疾病。既往研究报道，MNS、patennoside、BAY 11-7082和INF39能够抑制NLRP3 ATPase活性，并在体外显示出对NLRP3炎症小体的抑制活性。然而，这些化合物并非NLRP3特异性抑制剂，且具有多种生物活性，例如对酪氨酸激酶或NF-κB信号通路的抑制活性（Yip et al., 2004; Wang et al., 2006; Strickson et al., 2013; Cocco et al., 2017）。此外，MNS、patennoside和BAY 11-7082尚未在NLRP3驱动疾病的动物模型中进行体内试验。 CY-09 直接与 NLRP3 的 NACHT 结构域结合，抑制其 ATPase 活性，而 ATPase 活性对于 NLRP3 寡聚化和炎症小体组装至关重要（Duncan 等，2007）。此外，NACHT 结构域中 Walker A 基序（对 ATP 与 NLRP3 的结合至关重要）的突变（MacDonald 等，2013）会削弱 CY-09 与 NLRP3 的结合能力。我们的研究结果清楚地表明，CY-09 与 ATP 竞争性地结合 NLRP3，抑制其 ATPase 活性，进而抑制 NLRP3 寡聚化和炎症小体的组装。重要的是，我们的研究结果表明，CY-09 对 NLRP3 ATPase 活性的抑制显著降低了 2 型糖尿病 (T2D) 和 CAPS 小鼠模型中 NLRP3 炎症小体的激活和相关症状。因此，我们的研究结果表明，ATPase活性可作为筛选NLRP3相关疾病候选药物的靶点。目前，NLRP3相关疾病的临床治疗主要采用靶向IL-1β的药物，但使用高特异性小分子抑制剂（如CY-09）直接靶向NLRP3本身可能具有一定的优势。在CAPS小鼠模型中，CY-09能有效预防死亡，但单独阻断IL-1β却无法达到相同的效果（Brydges等，2009）。一个可能的原因是，炎症小体激活诱导的IL-18产生或细胞焦亡也可能参与了病理过程。此外，IL-1β还可以由其他炎症小体产生，或以非炎症小体依赖的方式产生（Davis等，2011；Netea等，2015），因此，抑制NLRP3本身可能比阻断IL-1β的免疫抑制副作用更少。事实上，我们的研究结果表明，CY-09 对 AIM2 或 NLRC4 炎症小体没有影响，提示 CY-09 可能不会损害这些炎症小体在宿主防御中的作用。此外，小分子化合物通常比生物制剂更具成本效益（Fautrel，2012）。2 型糖尿病的特征是胰岛素抵抗和高血糖，并可引起多种并发症，包括神经系统和肾脏损伤。然而，目前可用的药物无法有效纠正胰岛素抵抗的根本原因，大多数患者需要终身服药（Nathan 等，2009；Qaseem 等，2012）。我们的研究表明，CY-09 对 NLRP3 依赖性代谢炎症的抑制作用可以有效逆转糖尿病小鼠的代谢紊乱。CY-09 治疗显著改善了糖尿病小鼠的代谢炎症、高血糖和胰岛素抵抗。因此，本研究提示，纠正 NLRP3 依赖性代谢炎症可能是治疗 2 型糖尿病的有效方法。鉴于NLRP3依赖性炎症在痛风、阿尔茨海默病和动脉粥样硬化进展中的作用，CY-09或其衍生物可用于开发针对这些疾病的新型NLRP3靶向疗法。[1]
CY-09是一种新型、高效、选择性强且直接的NLRP3抑制剂。其CAS号为1073612-91-5。它也被称为CY 09和CY09。在CAPS和2型糖尿病小鼠模型中显示出治疗效果。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于临床。

C19H12F3NO3S2

423.43

423.021

C, 53.90; H, 2.86; F, 13.46; N, 3.31; O, 11.34; S, 15.14

1073612-91-5

44561595

Light yellow to yellow solid powder

4.9

115

1

8

4

28

672

0

S1C(N(C(/C/1=C\C1C=CC(C(=O)O)=CC=1)=O)CC1C=CC=C(C(F)(F)F)C=1)=S

DJTINRHPPGAPLD-DHDCSXOGSA-N

InChI=1S/C19H12F3NO3S2/c20-19(21,22)14-3-1-2-12(8-14)10-23-16(24)15(28-18(23)27)9-11-4-6-13(7-5-11)17(25)26/h1-9H,10H2,(H,25,26)/b15-9-

4-[[4-Oxo-2-thioxo-3-[[3-(trifluoromethyl)phenyl]methyl]-5-thiazolidinylidene]methyl]benzoic acid

CY 09; CY-09; 1073612-91-5; CY 09; 4-[[4-Oxo-2-thioxo-3-[3-(trifluoromethyl)benzyl]thiazolidin-5-ylidene]methyl]benzoic Acid; 4-[[4-oxo-2-sulfanylidene-3-[[3-(trifluoromethyl)phenyl]methyl]-1,3-thiazolidin-5-ylidene]methyl]benzoic acid; MFCD31619349; CY09; DJTINRHPPGAPLD-UHFFFAOYSA-N; (Z)-4-((4-Oxo-2-thioxo-3-(3- (trifluoromethyl)benzyl)thiazolidin-5- ylidene)methyl)benzoic acid; CY09

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 150 mg/mL (~354.25 mM)
H2O : ~1.1 mg/mL (~2.60 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.90 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。