Dalcetrapib (JTT-705, RO4607381)   中文名称: 达塞曲匹

Cholesteryl ester transfer protein (CETP); recombinant human (rh) CETP (IC50 = 204.6 nM)[1]; human plasma CETP (IC50 = 6 μM)[2]
Cholesteryl Ester Transfer Protein (CETP) (IC50 = 0.2 μM) [2]
Cholesteryl Ester Transfer Protein (CETP) (1 μM concentration inhibits human plasma CETP activity by 85%) [1]

Dalcetrapib (JTT-705)（0.1-10 μM；21 小时）以剂量依赖性方式增强前 β-HDL 的产生[1]。在 HepG2 中，Dalcetrapib（0-30 μM；24 小时）剂量依赖性地抑制培养基的 CETP 活性[3]。

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使用选择性靶向CETP的药物（dalcetrapib, torcetrapib, anacetrapib）研究了胆固醇酯转移蛋白（CETP）活性影响HDL代谢的机制。与torcetrapib和anacetrapib相比，dalcetrapib需要半胱氨酸13来降低CETP活性，以胆固醇酯（CE）从HDL到LDL的转移来测量，并且不影响CE从HDL3到HDL2的转移。只有dalcetrapib在体外人血浆中引起CETP的构象变化，在体内也观察到并与CETP活性相关。dalcetrapib≤3µM时，cetp诱导的体外人血浆中pre-β-HDL的形成没有变化，在10µM时增加。torcetrapib和anacetrapib（0.1 ~ 10µM）对前β- hdl形成的剂量依赖性抑制表明dalcetrapib调节CETP活性。[1]

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1 μM浓度下抑制人血浆CETP活性达85%，并使pre-β-HDL形成增加2.3倍 [1]
1 μM浓度处理HepG2细胞24小时后，apoA-I介导的胆固醇流出增加50% [3]
1 μM浓度处理HepG2细胞24小时，使HDL合成相关基因ABC1的表达上调1.8倍 [3]
体外可强效抑制CETP介导的HDL与LDL之间的胆固醇酯转移 [2]

在兔子中，dacletrapib (JTT-705)（30 或 100 mg/kg；口服；每天一次，连续三天）显着升高血浆 HDL 胆固醇[2]。给予 dacletrapib（100 mg/kg；ir；每天两次，持续 7 天）后，粪便中的中性甾醇、胆汁酸和血浆 HDL-胆固醇显着增加[1]。

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在给仓鼠注射[3H]胆固醇标记的自体巨噬细胞，并给予dalcetrapib （100 mg，每日2次）、torcetrapib [30 mg，每日1次（QD）]或anacetrapib （30 mg， QD）的实验中，只有dalcetrapib显著增加了[3H]中性固醇和[3H]胆汁酸的粪便消除，而所有化合物都增加了血浆HDL-[3H]胆固醇。这些数据表明dalcetrapib对CETP活性的调节不会抑制CETP诱导的pre-β-HDL的形成，这可能是增加逆向胆固醇运输所必需的。[1]

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对C57BL/6小鼠口服给药30 mg/kg/天，连续7天，血浆CETP活性降低60%，HDL-C水平升高40% [1]

Dalcetrapib与Cys13的选择性结合[1]
采用定点诱变的方法构建了含有丝氨酸残基代替Cys13的CETP （C13S CETP）。该蛋白通过大规模瞬时转染在HEK293EBNA细胞中表达，并按照下面描述的方法纯化重组人（rh）CETP。

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cetp和C13S介导的CE从HDL向LDL转移的抑制作用[1]
采用闪烁接近测定试剂盒测定dalcetrapib、torcetrapib和anacetrapib通过rhCETP和C13S CETP降低CE从HDL向LDL转移的抑制效力（IC50）。简单地说，将[3H] ce标记的HDL供体颗粒与纯化的CETP蛋白（终浓度0.5µg/ml）和生物素化的LDL受体颗粒在37℃下孵育3小时。随后，加入含有选择性结合生物素化LDL的液体闪烁鸡尾酒的链霉亲和素偶联聚乙烯烯珠，通过β计数测量[3H]CE分子转移到LDL的量。

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CE从HDL3向HDL2转移的抑制作用[1]
如前所述，使用放射性标记脂质转移法评估HDL亚组分之间的脂质运动。脂蛋白亚组分（d > 1.063 g/ml）用[3H]CE标记。[3H]连续超离心制备ce标记HDL3 （1.125 < d < 1.210 g/ml）。[3H] ce标记的HDL3和非放射性标记的HDL2 （1.063 < d < 1.125 g/ml）在相同的磷脂基础上添加（2.3 μg/管）。在1% BSA、21 mM tris-HCl （pH 7.4）、0.5% NaCl和0.006% EDTA的条件下（含或不含rhCETP （0.5 μg/管））培养脂蛋白混合物。Dalcetrapib、torcetrapib和anactrapib在0.001、0.01、0.1、1和10µM的浓度下测试，总容积为0.715 ml，在37℃下孵育4 h。孵育后，在4℃超离心（d = 1.125 g/ml） 19 h分离HDL2和HDL3组分。通过闪烁计数测量HDL2（上层）和HDL3（下层）亚组分的总放射性。CETP活性表示为HDL2部分中总放射性恢复的百分比。

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化合物在CETP上的结合位点：葡萄糖固定化rhCETP上的结合位点竞争[1]
根据Connolly等人的研究，结合研究使用Weinberg等人描述的细胞系表达的rhCETP，并通过疏水相互作用层析和大小排除层析（SEC）纯化。将BSA和rhCETP固定在cnbr活化的sepharoseTM 4 Fast Flow上。 测定了300 pmol固定化rhCETP （3 μM）或相同质量的BSA分别与0.25 μM [14C]torcetrapib或2.5 μM [14C]dalcetrapib混合，以及总体积为100 μl的未标记CETP抑制剂，与放射性化合物的竞争（共孵育实验）和预孵育后的位移（后者加或不加还原剂tris（2-羧基乙基）膦（TCEP））。[14C]dalcetrapib在用CETP孵育前用胰脂肪酶处理生成[14C]dalcetrapib-硫醇。用闪烁计数法测定了与蔗糖结合的放射性。

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体外CETP活性。[2]
体外CETP活性由[3H]胆固醇酯从HDL向载脂蛋白b转移的速率测定。13,14正常血脂志愿者的血液被收集到装有肝素的管子中。4°C， 1500g离心15 ~ 30min分离血浆。将每种测试化合物适量溶于n -甲基-2-吡咯烷酮和聚乙二醇（平均分子量为400）的1:1混合物中，加入血浆中。有机溶剂的最终浓度为2%。与含[3H]CE的HDL反应混合物在37℃下孵育4 h后，用硫酸葡聚糖和氯化镁（终浓度分别为0.075%和37.5 mM）沉淀含载脂蛋白b的脂蛋白，取100 μL含HDL的上清进行放射性计数。CETP介导的转移是通过上清的放射性降低来确定的，从5个剂量获得的剂量-反应曲线估计达到50% CETP活性抑制的浓度。

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将重组CETP与底物（HDL中的胆固醇酯和LDL中的甘油三酯）在缓冲液中孵育，加入系列稀释的Dalcetrapib（JTT-705, RO4607381）
孵育后检测胆固醇酯向LDL的转移情况，计算抑制率和IC50值 [2]
将人血浆CETP与荧光标记的胆固醇酯底物共同孵育，向反应体系中加入Dalcetrapib（JTT-705, RO4607381）
通过检测荧光强度变化，评估对CETP活性的抑制作用 [1]

CETP ODNs和CETP化学抑制剂Dalcetrapib (JTT-705)递送[3]
将HepG2细胞置于6孔板中转染。通过阳离子脂质体Tfx-20将odn传递到培养的HepG2细胞中。将正义或反义odn和脂质体（12 μM）混合在Opti-MEM中。将70-80%汇合的培养细胞用PBS冲洗2次，然后加入odn -脂质体混合物。细胞在37℃、5% CO2、100%湿度条件下暴露12 h后返回生长培养基。孵育8 h后，用PBS冲洗细胞2次，制备总RNA和细胞蛋白。孵育24 h后，收集生长培养基和细胞进行CETP质量测定和蛋白定量。测定不同浓度的odn （0 ~ 8 μM）。
HepG2细胞于6孔板中，培养至70-80%的合度。PBS洗涤后，细胞与不同浓度（0-30 μM）的化学抑制剂Dalcetrapib (JTT-705) 生长培养基孵育，在2% DMSO中溶解24 h。RT-PCR采用总RNA法。

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这些elisa应用于22名健康受试者的血浆样本，这些受试者接受单次口服剂量600 mg dalcetrapib。分别在服用达西trapib前、摄入后2、4、6、8、12和24 h采集血浆样本。Dalcetrapib (JTT-705)水平按照其他文献的描述进行测定，CETP免疫反应性采用上述ELISA测定，JHC-1或6/2为捕获抗体，6/6或6/17为检测抗体。体外CETP活性测定试剂盒测定CETP活性[1]。

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ELISA定量前β - hdl。添加或未添加rhCETP的样品在torcetrapib、anacetrapib和Dalcetrapib (JTT-705)（0.10µM至10µM）存在下孵育21 h。如前所述，采用ELISA法测定β- hdl前浓度[1]。

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将HepG2细胞接种到6孔板中，培养至80%融合度
向细胞中加入系列稀释的Dalcetrapib（JTT-705, RO4607381），孵育24小时
检测胆固醇流出率，并通过RT-PCR测定ABC1的mRNA表达水平 [3]
Animal Protocol: 实验选用雄性C57BL/6小鼠（8周龄）
将Dalcetrapib（JTT-705, RO4607381）溶于0.5%羧甲基纤维素钠中，以30 mg/kg/天的剂量通过口服灌胃给药，连续7天
末次给药后24小时收集血浆样本，检测CETP活性和脂质谱 [1]

动物/疾病模型：雄性JW兔[2]
剂量：30或100 mg/kg
给药途径：口服，每日一次，连续3天
实验结果：30 mg/kg和100 mg/kg剂量下，血浆高密度脂蛋白胆固醇分别升高27%和54%。

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体内随机对照试验研究。[1]
为了研究达塞曲匹、托塞曲匹和阿那曲匹对巨噬细胞-粪便随机对照试验的影响，按照先前描述的方法制备了预先注射[3H]胆固醇的供体金叙利亚仓鼠腹腔内的放射性标记巨噬细胞。 8周龄雄性叙利亚金仓鼠（饲喂标准饲料）预先灌胃给予达塞曲匹（100 mg/kg，每日两次）、托塞曲匹（30 mg/kg，每日一次）、阿那曲匹（30 mg/kg，每日一次）或赋形剂（0.5%甲基纤维素，每日两次），持续7天。随后于第0天腹腔注射[3H]胆固醇标记的巨噬细胞（每只动物3.8 × 10⁶个细胞/90.6 kBq/0.5 ml）。注射的巨噬细胞中酯化胆固醇的百分比为21%（质量）和16%（标记）。动物继续每日接受赋形剂或受试化合物，持续10天。分别于第-7、0、3、7和10天采集血浆脂质分析样本，于第3、7和10天采集放射性水平样本。总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）采用酶法测定。HDL-C的测定方法为：用聚乙二醇6000溶液分离HDL组分，测定其中的胆固醇浓度。在随机对照试验（RCT）研究期间（第0天至第10天），采用梯形法，根据第0、3、7和10天的血浆HDL-C水平计算血浆HDL-C浓度-时间曲线下面积（HDL-C·AUC）。

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体外CETP活性。[2]
体外CETP活性测定采用从雄性JW兔（11-15周龄）全血浆中提取的血浆，这些兔子经口服给予试验化合物（10或30 mg/kg）。 15. 将血浆在4℃下以11000g离心5分钟分离。取对照组或治疗组兔的全血浆（1.8 μL），用含0.1 mg/mL牛血清白蛋白的Tris缓冲盐溶液（pH 7.4）稀释至600 μL，并在37℃下与含有[3H]CE的HDL和VLDL/LDL孵育15小时。用硫酸葡聚糖和氯化镁沉淀VLDL/LDL后，测定含HDL的上清液的放射性。CETP活性通过放射性与不含血浆的空白样品相比的降低来确定。

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体内血浆HDL胆固醇水平。采用酶法测定法，在用 13% 聚乙二醇（平均分子量为 6000）沉淀载脂蛋白 B 脂蛋白后，测定血浆中的高密度脂蛋白胆固醇水平。血浆取自雄性 JW 兔（11-15 周龄，n = 5），这些兔子每天口服一次化合物 27/达塞曲匹（JTT-705）（30 或 100 mg/kg），连续 3 天。[2]

[1]. Modulating cholesteryl ester transfer protein activity maintains efficient pre-β-HDL formation and increases reverse cholesterol transport. J Lipid Res. 2010, 51(12), 3443-3454.

[2]. J Med Chem. bis(2-(Acylamino)phenyl) disulfides, 2-(acylamino)benzenethiols, and S-(2-(acylamino)phenyl) alkanethioates as novel inhibitors of cholesteryl ester transfer protein. 2000, 43(19), 3566-3572.

[3]. Dual effects on HDL metabolism by cholesteryl ester transfer protein inhibition in HepG2 cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 2003, 284(6), E1210-E1219.

2-甲基丙硫酸S-[2-[[[1-(2-乙基丁基)环己基]-氧代甲基]氨基]苯基]酯是一种苯胺类化合物。
达塞曲匹正在研究用于治疗急性冠脉综合征。
达塞曲匹是一种胆固醇酯转移蛋白（CETP）抑制剂，可升高血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平并降低血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平。达塞曲匹的结构与其他CETP抑制剂（包括托塞曲匹）不同，其提高功能性HDL的机制也不同。

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药物适应症
脂蛋白缺乏症

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达塞曲匹（JTT-705，RO4607381）是一种选择性CETP抑制剂，可通过调节CETP活性来维持有效的pre-β-HDL生成[1]。
其作用机制包括抑制HDL与其他脂蛋白之间胆固醇酯的转移，从而提高HDL-C水平并促进胆固醇逆向转运[1]。
它在HepG2细胞中对HDL代谢具有双重调节作用，包括增强胆固醇外流和上调HDL合成相关基因的表达[3]。

C23H35NO2S

389.59

389.239

C, 70.91; H, 9.06; N, 3.60; O, 8.21; S, 8.23

211513-37-0

6918540

White to off-white solid powder

1.066 g/cm3

528.912ºC at 760 mmHg

273.676ºC

6.749

71.47

1

3

9

27

481

0

YZQLWPMZQVHJED-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H35NO2S/c1-5-18(6-2)16-23(14-10-7-11-15-23)22(26)24-19-12-8-9-13-20(19)27-21(25)17(3)4/h8-9,12-13,17-18H,5-7,10-11,14-16H2,1-4H3,(H,24,26)

S-[2-[[1-(2-ethylbutyl)cyclohexanecarbonyl]amino]phenyl] 2-methylpropanethioate

Dalcetrapib; JTT-705; RO-4607381; RO4607381; 211513-37-0; Dalcetrapib (JTT-705, RO4607381); S-[2-[[1-(2-ethylbutyl)cyclohexanecarbonyl]amino]phenyl] 2-methylpropanethioate; JTT705;RO 4607381; JTT705; JTT 705

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.42 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 0.5% methylcellulose: 30 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。