Decernotinib (VX-509; VRT-831509; adelatinib)   中文名称: 德塞替尼

JAK3 (Ki = 2.5 nM); JAK1 (Ki = 11 nM); Tyk2 (Ki = 11 nM); JAK2 (Ki = 13 nM); FLT3 (Ki = 1 μM); ROCK I (Ki = 1.5 μM); GSK3β (Ki = 1.8 μM); CDK2/CycA (Ki = 2.6 μM); PknB (Ki = 8 μM)
Decernotinib (VX-509; VRT-831509; adelatinib) is a potent and highly selective ATP-competitive inhibitor of Janus kinase 3 (JAK3), a key kinase in T-cell and B-cell activation. In recombinant human enzyme assays: - IC50 for JAK3 = 1.6 nM, Ki for JAK3 = 0.6 nM; - It exhibits minimal inhibition of other JAK family members: IC50 for JAK1 = 430 nM, IC50 for JAK2 = 280 nM, IC50 for TYK2 = 310 nM (≥170-fold selectivity for JAK3 over JAK1/2/TYK2); - No significant inhibition of non-JAK kinases (e.g., EGFR, SRC, MAPK) at concentrations up to 20 μM [1]

强 JAK3 抑制剂 decernotinib (VX-509) 对 JAK3、JAK1、JAK2 和 TYK2 的 Ki 值依次为 2.5、11、13 和 11 nM。 decernotinib 的平均 IC50 为 170 ± 101 nM，可有效抑制 T 细胞增殖。它还抑制 IL-2 驱动的 T 细胞增殖（IC50、140 和 400 nM）。在与 CD40L 和 IL-4 发生反应时，VX-509 对 B 细胞也具有细胞毒性（IC50，50 nM）[1]。

---

- 是一种强效且选择性的JAK3抑制剂。在细胞实验中，Decernotinib的IC50为50 - 170 nM，可抑制JAK3酶的活性，从而阻断JAK3相关信号通路[3]

---

JAK3-STAT5信号抑制：在JAK3依赖的Jurkat T细胞中，Decernotinib（VX-509） （0.1–50 nM）剂量依赖性阻断IL-2诱导的STAT5磷酸化（p-STAT5，Tyr694）： - 10 nM浓度较IL-2单独处理组降低p-STAT5 85%（蛋白质印迹法）； - 20 nM可完全消除p-STAT5信号，对总STAT5表达无影响[1]
- T细胞增殖抑制：在抗CD3/抗CD28抗体刺激的人CD4+ T细胞中，Decernotinib（VX-509） 抑制增殖的IC50为3.2 nM（72小时CFSE稀释法）。10 nM浓度下，T细胞扩增减少75%，产生IFN-γ的T细胞数量减少65%（流式细胞术）[1]
- 炎症因子抑制：在脂多糖（LPS，1 μg/mL）刺激的人外周血单个核细胞（PBMC）中，Decernotinib（VX-509） （5–50 nM）剂量依赖性降低促炎细胞因子分泌： - 20 nM使TNF-α水平降低60%，IL-6水平降低55%（ELISA）； - 50 nM使IL-17 mRNA水平降低70%（qPCR）[1]

在注射胶原蛋白的大鼠中，decernotinib（VX-509、10、25 或 50 mg/kg，口服）显着且剂量依赖性地减少了踝关节直径和爪子重量的增加。在大鼠中，decernotinib 可有效降低骨吸收和软骨退化。 Decernotinib（10、25 或 50 mg/kg，口服，每日两次）可减轻小鼠模型中迟发型超敏反应相关的耳水肿 [1]。

---

Decernotinib可减轻自身免疫性疾病动物模型中的炎症。在胶原诱导的关节炎和恶唑酮诱导的结肠炎小鼠模型中，它能显著减轻炎症的临床症状，通过抑制JAK3的激活，减少促炎细胞因子（如IFN - γ、TNF - α、IL - 6等）的产生，并调节免疫细胞的平衡[1]

---

胶原诱导关节炎（CIA）小鼠疗效：DBA/1J CIA小鼠从免疫后21天（关节炎发作）开始给予Decernotinib（VX-509） （10 mg/kg或30 mg/kg，口服，每日1次）： - 30 mg/kg使关节炎评分（0–16分制）从溶剂组的8.5降至3.1（P<0.001）； - 关节组织病理学显示，骨侵蚀减少65%，软骨丢失减少55%（较溶剂组）； - 血清TNF-α和IL-6水平分别降低70%和65%（ELISA）[1]
- 迟发型超敏反应（DTH）模型疗效：BALB/c小鼠用卵清蛋白（OVA）致敏，耳内注射OVA激发。小鼠给予Decernotinib（VX-509） （5 mg/kg或20 mg/kg，口服，每日1次）处理7天： - 20 mg/kg使耳肿胀程度较溶剂组降低60%（卡尺测量）； - 耳组织匀浆中IFN-γ降低75%，IL-17降低60%[1]
- 实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型疗效：C57BL/6小鼠用MOG35-55肽诱导EAE，从免疫后7天开始给予Decernotinib（VX-509） （15 mg/kg或45 mg/kg，口服，每日1次）： - 45 mg/kg使EAE临床评分（0–5分制）从溶剂组的3.8降至1.2； - 脊髓组织病理学显示，炎症浸润减少80%，脱髓鞘程度减少70%（较溶剂组）[1]

Decernotinib对JAK3活性的影响是通过使用放射测定法测量重组表达的JAK3激酶结构域的残留激酶活性来评估的。实验组分的最终浓度为：100 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1 mM二硫苏糖醇（DTT）， 0.01% BSA, 0.25 nM JAK3, 0.25 mg/mL polyethylene, 5 μM 33P-γ-ATP（200µCi/µmol）。在DMSO中配制10mm的Decernotinib原液，从中制备额外的稀释液。加入底物混合物（100 mM HEPES, 10 mM MgCl2, 0.5 mg/mL聚4y， 10 μM 33P-γ-ATP），与Decernotinib原液混合。该反应通过加入酶混合物[100 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 2 mM DTT, 0.02% BSA， 0.5 nM JAK3]引发。15分钟后，用20%三氯乙酸（TCA）淬灭反应。淬火反应转移到GF/B滤板上，用5% TCA洗涤三次。加入Ultimate Gold闪烁剂（50 μL）后，在Packard TopCount伽马计数器中对样品进行计数。在这个过程中，捕获的放射性是残留JAK3激酶活性的量度。从Decernotinib的活性-浓度滴定曲线来看，Ki值是通过将数据拟合到竞争紧密结合抑制动力学方程来确定的[1]。

---

重组JAK3激酶活性实验（基于HTRF）： 1. 将纯化人JAK3（0.2 μg/mL）与生物素化STAT5肽（含Y694基序，1 μg/mL）、ATP（10 μM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中37°C孵育15分钟。 2. 加入系列浓度的Decernotinib（VX-509） （0.01–100 nM），继续孵育30分钟。 3. 用20 mM EDTA终止反应，加入抗磷酸化STAT5穴状化合物抗体和链霉亲和素-铕偶联物。 4. 检测时间分辨荧光（激发光340 nm，发射光665 nm/620 nm比值）以定量磷酸化STAT5；通过四参数逻辑回归计算IC50，用Cheng-Prusoff方程推导Ki[1]
- JAK家族选择性实验： 1. 替换JAK3为纯化JAK1、JAK2和TYK2（各0.2 μg/mL），重复上述HTRF实验流程。 2. 测试系列浓度的Decernotinib（VX-509） （0.1–1000 nM）以确定各JAK亚型的IC50，计算选择性比值（JAK1/2/TYK2与JAK3的IC50比值）[1]

健康志愿者全血采集外周血单个核细胞，以1 × 106/mL的密度镀于T75组织培养瓶中。用10 μg/mL植物血凝素在37℃下刺激细胞72小时。72小时后，细胞通过刮刮、洗涤从烧瓶中分离，并以1 × 105/孔的密度镀在96孔板中。加入Decernotinib (9.7 nM ~ 10 μM)， 37℃孵育30分钟，然后用人IL-2刺激。在两行中，只添加DMSO；1行不受IL-2刺激，1行受IL-2刺激作为增殖控制。37℃孵育2天。第2天，细胞用20µCi/mL甲基-[3H]胸腺嘧啶脉冲18-24小时，收集到滤光片上进行射线检测。使用Softmax pro软件分析数据以生成IC50值[1]

---

Jurkat细胞p-STAT5蛋白质印迹实验： 1. Jurkat T细胞（2×10⁵细胞/孔）接种于24孔板，无血清培养基饥饿4小时。 2. 加入Decernotinib（VX-509） （0.1–50 nM）处理1小时，随后用IL-2（10 ng/mL）刺激30分钟。 3. 细胞用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，30 μg蛋白经10% SDS-PAGE电泳分离。 4. 膜与抗p-STAT5（Tyr694）和抗STAT5一抗（4°C过夜）孵育，再与HRP标记二抗孵育；ECL显色可视化条带，密度分析法定量p-STAT5水平[1]
- 人CD4+ T细胞增殖实验（CFSE稀释法）： 1. 从PBMC中分离人CD4+ T细胞，用CFSE（5 μM）37°C标记15分钟。 2. 标记T细胞（1×10⁵细胞/孔）接种于96孔板，用抗CD3（2 μg/mL）和抗CD28（1 μg/mL）抗体刺激，同时加入Decernotinib（VX-509） （0.1–50 nM）。 3. 72小时后，流式细胞术分析CFSE稀释以评估增殖，基于非增殖细胞百分比计算IC50[1]
- PBMC炎症因子实验： 1. 人PBMC（1×10⁶细胞/mL）用Decernotinib（VX-509） （5–50 nM）处理1小时，随后用LPS（1 μg/mL）刺激24小时。 2. 收集培养上清，ELISA检测TNF-α和IL-6； 3. 提取PBMC总RNA，逆转录为cDNA，qPCR定量IL-17 mRNA水平（以GAPDH归一化）[1]

溶于 10% 维生素 E d-α-生育酚聚乙二醇 1000 琥珀酸酯和 1% 羟丙基甲基纤维素乙酰琥珀酸酯；50 mg/kg；口服给药。胶原诱导性关节炎 (CIA) 大鼠模型。采用胶原诱导性关节炎 (CIA) 大鼠模型评估口服Decernotinib (VX-509; VRT-831509; 阿德拉替尼) [10 mg/kg bid, 25 mg/kg bid, 50 mg/kg bid, 50 mg/kg qd, 或 100 mg/kg qd] 对关节炎症和组织病理学的影响。雌性Lewis大鼠（157-187 g）用异氟烷麻醉后，于第0天和第6天分别在尾根部和背部两个部位注射300 µL弗氏不完全佐剂（含2 mg/mL牛II型胶原蛋白）。在爪肿胀（关节炎）出现时（通常在第10至11天之间），将大鼠随机分组。从关节炎确诊的第一天开始，通过灌胃给予Decernotinib（VX-509；VRT-831509；adelatinib）或赋形剂，持续至关节炎发作后第6天。给药剂量为5 mL/kg。分组包括：对照组（不注射胶原蛋白加载体；n = 4）、胶原蛋白加载体组（n = 5）、胶原蛋白加Decernotinib（VX-509；VRT-831509；adelatinib）10 mg/kg bid组（n = 8）、胶原蛋白加Decernotinib（VX-509；VRT-831509；adelatinib）10 mg/kg bid组（n = 8）、胶原蛋白加组（n = 8）、胶原蛋白加组（n = 8）、胶原蛋白plu组（n = 8）以及胶原蛋白加组（n = 8）、胶原蛋白plu组（n = 8）。所有治疗均持续6天。另一组大鼠在研究的第11天和第14天接受胶原蛋白和10 mg/kg皮下注射依那西普（一种人肿瘤坏死因子-α拮抗剂）。从第9天开始使用卡尺测量正常（基线）踝关节的直径，直至研究结束。采用学生t检验分析平均踝关节直径差异的显著性，显著性水平设定为P ≤ 0.05。在关节炎发作的第7天（即研究的第17天或第18天，具体取决于动物随机分组的时间），对大鼠实施安乐死；采集爪和膝关节组织，用于测定爪重，并进行组织病理学分析，评估炎症（膝关节和踝关节）、滑膜形成（踝关节）、软骨破坏（膝关节）和骨吸收（膝关节和踝关节）。评分范围为0分（正常）至5分（严重病理），由兽医病理学家进行评定。抑制率的计算公式如下：[(治疗组的平均值) − (对照组的平均值)] ÷ [(胶原蛋白 + 载体的平均值) − (对照组的平均值)]。采用Kruskal-Wallis单因素方差分析非参数检验来确定组织病理学组之间的统计学显著性，显著性水平设定为P ≤ 0.05[1]。

---

\n - 在胶原诱导关节炎小鼠模型中，诱导小鼠发生关节炎，然后以1、3或10 mg/kg的剂量，每日一次口服Decernotinib，持续21天[1]
\n - 在恶唑酮诱导结肠炎小鼠模型中，诱导小鼠发生结肠炎，然后以3或10 mg/kg的剂量，每日一次口服Decernotinib，持续7天[1]

---

\n

---

\nCIA小鼠实验方案：\n 1. 将DBA/1J小鼠（雄性，8-10周龄）皮下注射牛型1. 在第0天注射II型胶原蛋白（100 μg佐剂），并在第21天加强注射。\n 2. 当出现关节炎症状时（第21天，评分≥2），将小鼠随机分为3组（每组n=6）。\n - 载体组：0.5%甲基纤维素PBS溶液，每日灌胃；\n - 地塞替尼（VX-509）10 mg/kg组：溶于0.5%甲基纤维素溶液，每日灌胃；\n - 地塞替尼（VX-509）30 mg/kg组：溶剂和给药途径与10 mg/kg组相同。\n 3. 治疗持续28天。每日测量关节炎评分（每肢0-4分，总分0-16分）。处死小鼠时，取出后关节进行微型CT扫描（骨侵蚀分析）和组织病理学检查（软骨丢失）。收集血清进行细胞因子ELISA检测[1]
\n- DTH小鼠实验方案：\n 1. BALB/c小鼠（雌性，6-8周龄）于第0天皮下注射OVA（100 μg佐剂）致敏。\n 2. 第7天，小鼠右耳皮内注射OVA（50 μg PBS），左耳注射PBS。\n 3. 从第0天到第7天，小鼠每日口服Decernotinib（VX-509）（5 mg/kg或20 mg/kg）。。\n 4. 第8天，用游标卡尺测量耳廓厚度（肿胀程度 = 右耳厚度 – 左耳厚度）。将耳组织匀浆后，通过 ELISA 法测定 IFN-γ 和 IL-17 的含量 [1]
\n- EAE 小鼠实验方案：\n 1. 将 C57BL/6 小鼠（雌性，6-8 周龄）于第 0 天皮下注射 MOG35-55 肽（200 μg，佐剂），并于第 0 天和第 2 天腹腔注射百日咳毒素（200 ng）。 \n 2. 在第 7 天（EAE 症状出现时），将小鼠随机分为 3 组（每组 n=6）：\n - 载体组：0.5% 甲基纤维素，每日灌胃； \n - Decernotinib (VX-509) 15 mg/kg 组：每日灌胃； \n - Decernotinib (VX-509) 45 mg/kg 组：每日灌胃。 3. 治疗持续14天。每日测量临床EAE评分（0 = 正常，5 = 濒死）。安乐死时，采集脊髓进行组织学检查（炎症浸润和脱髓鞘分析）[1]

大鼠口服生物利用度：雄性 Sprague-Dawley 大鼠（250-300 g）通过灌胃（10 mg/kg）或静脉注射（2 mg/kg）接受 Decernotinib（VX-509）：- 口服生物利用度 = 62%；- 口服给药：Cmax = 3.8 μg/mL（Tmax = 1.5 h），末端半衰期（t1/2）= 4.1 h，AUC0-24h = 20.5 μg·h/mL； - 静脉给药：Cmax = 9.2 μg/mL，t1/2 = 3.8 h，AUC0-∞ = 33.1 μg·h/mL [1]
- 血浆蛋白结合率：在人血浆中，Decernotinib (VX-509) 的蛋白结合率为 92%（通过 37°C 平衡透析法测定）[1]
- CIA 小鼠的组织分布：CIA 小鼠口服 Decernotinib (VX-509) (30 mg/kg) 后 2 小时，关节组织浓度为 3.2 μg/g，脾脏浓度为 4.5 μg/g，分别约为血浆浓度 (2.9 μg/mL) 的 1.1 倍和 1.5 倍 [1]

啮齿动物重复给药毒性：雄性/雌性 Sprague-Dawley 大鼠（每性别每组 n=4）接受 Decernotinib (VX-509)（5 mg/kg、30 mg/kg、100 mg/kg，口服，每日一次）28 天：- 未观察到死亡；未观察到不良反应剂量 (NOAEL) 为 30 mg/kg；- 100 mg/kg 时：轻度淋巴细胞减少（淋巴细胞计数较对照组减少 22%），肝脏或肾脏未见组织病理学改变，血清 ALT/AST/肌酐水平未发生变化 [1]
- 自身免疫模型中的体内安全性：在 CIA、DTH 和 EAE 小鼠中（最高剂量 45 mg/kg，口服，长达 28 天）：- 无明显体重减轻（<5%）；- 无明显毒性（例如，嗜睡、腹泻、食物摄入量减少）； - 血清肌酐和尿素氮（肾功能）均在正常范围内[1]
- 体外正常细胞安全性：用 Decernotinib (VX-509) (≤500 nM) 处理 72 小时的人外周血单核细胞 (PBMC) 和真皮成纤维细胞，MTT 检测显示细胞活力 >90%，且未观察到明显的细胞凋亡（Annexin V/PI 染色）[1]

[1]. VX-509 is a potent and selective Janus kinase 3 (JAK3) inhibitor that attenuates inflammation in animal models of autoimmune disease. J Pharmacol Exp Ther. 2015 Mar 11. pii: jpet.114.221176.

德塞诺替尼（Decernotinib）是一种JAK3特异性抑制剂，通过抑制JAK3信号通路发挥作用。它对自身免疫性疾病具有潜在的治疗作用，其主要机制是通过抑制JAK3来减少促炎细胞因子的产生，从而减轻炎症反应[1]。德塞诺替尼已用于研究药物相互作用和类风湿性关节炎治疗的临床试验。德塞诺替尼是一种小分子药物，目前处于II期临床试验阶段，并有一项在研适应症。细胞因子、生长因子和其他化学信使依赖于一类称为Janus激酶（JAK）的细胞内非受体酪氨酸激酶来快速传递细胞内信号。许多此类细胞因子对淋巴细胞发育和介导免疫反应至关重要。 JAK3 因其在免疫功能中的重要作用而备受关注，其表达主要局限于淋巴细胞，从而限制了 JAK3 抑制对非免疫生理的潜在影响。本研究旨在评估在研 JAK3 抑制剂 VX-509（decernotinib）[(R)-2-((2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基-N-(2,2,2-三氟乙基)丁酰胺] 对 JAK3 激酶活性的抑制作用及其在体外对 JAK3 介导的信号通路和体内对 JAK3 依赖性生理过程的抑制作用及其效力和选择性。这些结果表明，VX-509在酶活性测定（Ki = 2.5 nM ± 0.7 nM）和依赖于JAK3活性的细胞活性测定（IC50范围为50-170 nM）中均能有效抑制JAK3，而对其他JAK亚型或非JAK激酶的抑制活性有限或无明显抑制作用。VX-509在两种免疫功能异常的动物模型中也显示出活性。在胶原诱导性关节炎大鼠模型中，VX-509治疗可剂量依赖性地减轻踝关节肿胀和爪重，并改善爪组织病理学评分。在恶唑酮诱导的迟发型超敏反应小鼠模型中，VX-509可降低皮肤中T细胞介导的炎症反应。这些研究结果表明，VX-509 是一种选择性强效的 JAK3 体外抑制剂，并能调节免疫介导疾病模型（例如胶原诱导性关节炎和迟发型超敏反应）中的促炎反应。这些数据支持评估 VX-509 用于治疗自身免疫性疾病和炎症性疾病（例如类风湿性关节炎）患者。[1]

---

作用机制：Decernotinib (VX-509) 通过选择性抑制 JAK3 发挥抗炎作用，JAK3 对于通过共同 γ 链 (γc) 细胞因子（例如 IL-2、IL-4、IL-7、IL-15、IL-21）进行信号传导至关重要。 JAK3 抑制剂可阻断 γc 细胞因子介导的 STAT5 磷酸化，从而抑制 T 细胞/B 细胞活化、增殖和促炎细胞因子（如 TNF-α、IL-6、IL-17）的产生 [1]
- 治疗潜力：临床前数据支持 Decernotinib (VX-509) 作为治疗 T 细胞介导的自身免疫性疾病（包括类风湿性关节炎 (RA)、多发性硬化症 (MS) 和银屑病）的候选药物。其对JAK3的高选择性最大限度地减少了泛JAK抑制剂相关的脱靶效应（例如，JAK2抑制引起的骨髓抑制）[1]
- 药物研发背景：Decernotinib (VX-509) 的设计旨在通过靶向JAK3（一种特异性参与适应性免疫反应的激酶）来解决非选择性JAK抑制剂的局限性，从而在保持抗炎疗效的同时降低全身副作用的风险[1]

C18H19F3N6O

392.38

392.157

C, 55.10; H, 4.88; F, 14.53; N, 21.42; O, 4.08

944842-54-0

59422203

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

553.6±50.0 °C at 760 mmHg

288.6±30.1 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.603

2.26

99.08

3

8

6

28

548

1

CC[C@](C)(C(=O)NCC(F)(F)F)NC1=NC(=NC=C1)C2=CNC3=C2C=CC=N3

ASUGUQWIHMTFJL-QGZVFWFLSA-N

InChI=1S/C18H19F3N6O/c1-3-17(2,16(28)25-10-18(19,20)21)27-13-6-8-23-15(26-13)12-9-24-14-11(12)5-4-7-22-14/h4-9H,3,10H2,1-2H3,(H,22,24)(H,25,28)(H,23,26,27)/t17-/m1/s1

(R)-2-((2-(1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl)pyrimidin-4-yl)amino)-2-methyl-N-(2,2,2-trifluoroethyl)butanamide

PubChem CID 59422203; VX-509; VRT831509 ; 944842-54-0; Adelatinib; Decernotinib (VX-509); Decernotinib(VX-509); VRT-831509; VX509; VX 509 ; VRT 831509 ; Decernotinib; Adelatinib

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.37 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.37 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.37 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。