| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Sphingosine kinase (SPHK1)
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| 体外研究 (In Vitro) |
在角质形成细胞中，MHP (50-250 μM) 持续 24 小时会提高 CAMP mRNA 的水平 [1]。 MHP (100 μM) 可在 24 小时内提高角质形成细胞中 CAMP 蛋白的水平 [1]。
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| 酶活实验 |
鞘氨醇激酶1的酶活性测定[1]
如前所述，对SPHK1活性进行了评估。简而言之，将重组SPHK1（2μg）与样品反应缓冲液（10 mM ATP、200 mM MgCl2、200μM C17鞘氨醇、5 mM NaF、Na3VO4、5%Triton X-100）一起孵育30分钟。通过加入CHCl3/MeOH/HCl（8:4:3，v/v/v）终止反应，其中100 pmol C17-鞘氨醇-1-磷酸作为内标。通过加入CHCl3分离的有机噬菌体使用真空系统干燥。将干燥的残余物重新溶解在甲醇中，然后注入LC-ESI-MS/MS系统。将HPLC柱流出物引入API 3200三重四重质量（ABCIEX）中，并使用具有多重反应监测（MRM）的正模式电喷雾电离进行分析，以从单次注射中同时选择每种分析物所特有的母体离子和特征子离子。C17-S1P的366→250和C17-Sa1P的368→270的MS/MS转换（m/z）被用作MRM的定量器，停留时间为100毫秒。数据使用Analyst 1.4.2软件获取，SPHK1的活性表示为S1P pmol/mg蛋白质/min。 鞘氨醇-1-磷酸裂合酶的酶活性测定[1] 为了测定S1P裂解酶的活性，KC用Defensamide（MHP）处理24小时，然后用磷酸缓冲盐水洗涤。将细胞裂解物（50μg）与10 nmol C17-鞘氨醇-1-磷酸酯一起孵育20分钟。通过添加100 pmol的（2E）-d5十六烯醛作为内标进行脂质提取。如前所述，总脂质提取物在40°C下用5 mM盐酸氨基脲在含5%甲酸的甲醇中衍生化2小时，并通过LC-ESI-MS/MS（ABCIEX）进行分析。S1P裂合酶的活性表示为每分钟每毫克蛋白质十五醛pmol。 金黄色葡萄球菌侵袭试验[1] 如前所述，进行了金黄色葡萄球菌侵袭试验。简而言之，从无毛小鼠（10周龄雌性，hr/hr，n=5）身上采集用Defensamide (MHP) 或载体处理的全层小鼠皮肤。每隔一天局部应用恶唑酮（0.1%）五次，可以减弱表皮通透性屏障。在恶唑酮治疗期间，在采集皮肤之前，在最后3天每天用两次Defensamide (MHP) 治疗小鼠。将皮肤放在滤纸上，真皮面朝下，并在KC生长培养基中保持在空气-培养基界面。将PBS或PBS中的金黄色葡萄球菌皮内施用（20μl/cm−2），然后在37°C的5%CO2中孵育24小时。进行革兰氏染色以评估金黄色葡萄球菌的侵袭情况。 |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
细胞类型： 角质形成细胞 测试浓度： 100 μM 孵育时间： 24 小时 实验结果：角质形成细胞中的 CAMP 蛋白水平增加。 用于CAMP定量的ELISA[1] 根据制造商的说明，通过ELISA试剂盒测定先前与（S）-2-（己酰胺）-3-（4-羟基苯基）丙酸甲酯（Defensamide (MHP) ）一起孵育的KC细胞裂解物的CAMP含量。 免疫荧光[1] 如前所述，对NF-κB[14]和小鼠CAMP（mCAMP）进行了免疫荧光检测。KC用Defensamide（MHP）或载体处理30分钟。使用抗NF-κB p65和与异硫氰酸荧光素偶联的抗兔IgG评估NF-κB分布。用核标记组蛋白H4对细胞进行复染。用福尔马林（5μm）固定的切片在封闭缓冲液（4%BSA，0.5%冷水鱼明胶PBS溶液）中孵育1小时，然后在4°C下与抗mCAMP孵育过夜。然后将切片在室温下用山羊抗兔Alexa Fluor 488孵育1小时，然后用碘化丙啶复染。 细胞内鞘氨醇-1-磷酸水平的测定[1] 为了评估细胞S1P的水平，如我们之前报道的，将KC与Defensamide（MHP）一起孵育，用磷酸缓冲盐水洗涤，然后提取总S1P。S1P用邻苯二甲醛（OPA）试剂衍生化，然后使用配备荧光检测器系统的HPLC系统进行定量，如前所述。S1P水平以pmol/mg蛋白质表示。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
研究人员进一步探究了MHP诱导的S1P增加是否激活了我们近期发现的S1P→NF-κB激活→C/EBP激活→cAMP机制，并证实MHP通过该S1P依赖的下游信号通路刺激cAMP的产生。具体而言，我们证明SPHK1的激活也能通过刺激角质形成细胞（KC）中cAMP的产生来有效增强皮肤的抗菌防御能力。为了评估MHP的临床意义，我们随后证明局部应用MHP可以增强小鼠皮肤对毒力金黄色葡萄球菌的抗菌防御能力。由于MHP不会增加人β-防御素的产生，这些研究表明cAMP在抑制金黄色葡萄球菌的侵袭和定植中发挥着重要作用。激活S1P的产生在其他一些临床情况下也可能具有价值；例如，不仅可以纠正特应性皮炎中的cAMP缺乏，还可以促进伤口愈合，或增强慢性病或免疫功能低下患者的先天免疫力。三种小分子化合物，芪类化合物、异黄酮和MHP，是增强先天免疫力和抗菌防御能力的有效化学物质。因此，我们将MHP命名为“防御酰胺”。[1]
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| 分子式 |
C16H23NO4
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|---|---|---|
| 分子量 |
293.36
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| 精确质量 |
293.163
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| 元素分析 |
C, 65.51; H, 7.90; N, 4.77; O, 21.81
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| CAS号 |
1104874-94-3
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
56652925
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
3.013
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| tPSA |
79.12
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
9
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| 重原子数目 |
21
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| 分子复杂度/Complexity |
324
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CCCCCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)OC
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| InChi Key |
GBTVWZMJUZJPBU-AWEZNQCLSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H23NO4/c1-3-4-5-6-15(19)17-14(16(20)21-2)11-12-7-9-13(18)10-8-12/h7-10,14,18H,3-6,11H2,1-2H3,(H,17,19)/t14-/m0/s1
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.52 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4088 mL | 17.0439 mL | 34.0878 mL | |
| 5 mM | 0.6818 mL | 3.4088 mL | 6.8176 mL | |
| 10 mM | 0.3409 mL | 1.7044 mL | 3.4088 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Inhibition ofS. aureusinvasion into murine skin.J Dermatol Sci. 2015 Sep; 79(3): 229–234 |
NF-κB activation is required for MHP-induced upregulation of CAMP production.J Dermatol Sci. 2015 Sep; 79(3): 229–234. |
MHP increases CAMP mRNA and protein expression.J Dermatol Sci. 2015 Sep; 79(3): 229–234. |
SphK1-IN-4
PPI-4955
(R)-FTY720-vinylphosphonate
(R)-FTY720-OMe
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