Demecolcine

别名: C 12669; C-12669; Colcemid; Demecolcine; C12669; (-)-Demecolcine; Colchamine; Demecolcine; colcemid; 477-30-5; Colchamine; (-)-Demecolcine; Reichstein's F; Desmecolcine; Demecolcin; Colchamin 脱羰秋水仙碱;N-脱乙酰-N-甲基秋水仙碱;地美可辛; Colcemid; 秋水仙胺; 秋水仙碱;秋水仙酰胺;生物碱F;脱羰秋水仙碱
目录号: V19560 纯度: ≥98%
Demecolcine (Colcemid) 是一种秋水仙碱类似物,是一种有效的微管聚合抑制剂/有丝分裂抑制剂/解聚抗微管蛋白剂,具有抗癌活性。
Demecolcine CAS号: 477-30-5
产品类别: Microtubule(Tubulin)
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
Demecolcine (Colcemid) 是一种秋水仙碱类似物,是一种有效的微管聚合抑制剂/有丝分裂抑制剂/解聚抗微管蛋白剂,具有抗癌活性。它是从 ColchicumAutumnale L. 中分离出来的一种天然存在的生物碱。
生物活性&实验参考方法
靶点
Microtubule/Tubulin
体外研究 (In Vitro)
在小鼠、生殖细胞和青蛙精母细胞中,秋水仙胺 (Demecolcine)(0.1-0.25 μg/ml,1 小时)可降低 II 相补体亚倍体的频率 [3]。
卵母细胞的去甲羟氨苄(DEM)处理诱导了含有大量浓缩母体染色体的膜突起的形成,在体细胞核移植(SCNT)之前,可以以最小的损伤将其去除。然而,这种方法对猪卵母细胞中成熟促进因子(MPF)分布的影响尚未有报道。在这里,我们评估了DEM处理后猪卵母细胞中MPF的水平和细胞周期蛋白B1的分布。此外,还比较了DEM辅助和机械去核的效率,以及SCNT后这些卵母细胞的发育(体外和体内)。MPF在用0.4μg/ml DEM处理1小时的卵母细胞中均匀分布。免疫荧光显微镜显示,在未处理的卵母体内,MPF的调节亚基细胞周期蛋白B1在纺锤体周围积聚,在细胞质中检测到的含量较低。DEM处理破坏纺锤体微管,诱导染色体缩合,并降低核区细胞周期蛋白B1的水平。细胞周期蛋白B1在DEM处理的卵母细胞中均匀分布,MPF水平升高。由DEM处理的卵母细胞产生的胚胎在体内发育的潜力明显大于由机械去核卵母细胞生成的胚胎。这是首次报道DEM辅助猪卵母细胞去核对细胞周期蛋白B1分布的影响。成熟卵母细胞中的MPF对于重建胚胎的发育和高效的SCNT非常重要。[去甲霉素辅助去核对猪卵母细胞MPF水平和细胞周期蛋白B1分布的影响。[6]
体内研究 (In Vivo)
腹腔注射 Demecolcine(Colcemid;0.3 mg/kg)治疗的小鼠,第二阶段分裂中倍性不良的发生率增加 [3]。
发现Colcemid/Demicolcine可诱导剂量和时间表依赖性骨髓巨核细胞增多症和外周血小板增多症。反应可分为早期和晚期两个部分。早期成分似乎是由于直接的刺激作用,可能是通过增强中期停滞的巨核细胞前体中的内复制。早期的刺激反应在有毒药物治疗方案中减弱了。相比之下,在毒性最强的药物方案中,造血反应的晚期成分表现得最好。它在时间上分别与单核骨髓和血细胞成分的反应性恢复相吻合。因此,晚期成分似乎是一种非特异性的反弹现象。在实验系统中比较Colcemid和长春花生物碱的血栓形成特性时,前者似乎具有更有利的治疗指标。数据表明,秋水仙碱及其衍生物可能是治疗临床血小板减少症的有用药物。[The effects of colcemid on hematopoiesis in the mouse. J Clin Invest . 1976 Nov;58(5):1280-5. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/993346/]
细胞实验
实验1:Demecolcine/地美考辛(DEM)处理对MII卵母细胞MPF水平的影响[6]
研究了不同时间Demecolcine(DEM)治疗对MPF水平的影响。卵母细胞在含有0.6 mM半胱氨酸、4 mg/ml牛血清白蛋白(BSA)和DEM的NCSU-37中培养0.5、1、2或3小时。在猪卵母细胞中诱导卵质突起的最佳DEM浓度为0.4µg/ml[11]、[22]。对照卵母细胞在缺乏DEM的培养基中培养。测定卵母细胞中的MPF水平(每个治疗组30个)。
实验2:Demecolcine(DEM)处理对MII卵母细胞中Cyclin B1分布的影响[6]
卵母细胞分割[6]
将形成第一极体的成熟卵母细胞在添加了0.4μg/mlDemecolcine(DEM)和0.05 M蔗糖的培养基中培养最佳时间(在实验1中确定)。蔗糖用于扩大卵黄间隙。用钝移液管尖端挤压法将卵母细胞一分为二。为了确定染色体是否在中期板上对齐,用Hoechst 33342对卵母细胞进行染色,拍照,并在PBS中洗涤三次。在分割后不到30分钟内收集半卵母细胞。对照卵母细胞在不添加补充剂的培养基中培养,并通过去除一半体积的细胞质将其一分为二。对于每种处理,在25个完整卵母细胞或50个半卵母细胞中检测MPF水平。
免疫荧光显微镜[6]
对整个标本进行免疫荧光显微镜检查Demecolcine(DEM)处理或未处理的MII卵母细胞在室温下用含4%多聚甲醛的PBS固定至少30分钟。细胞在4°C下用含有1%Triton X-100的PBS透化10分钟,在1%BSA中封闭1小时,然后在4°℃下用1∶50稀释的抗细胞周期蛋白B1抗体在封闭溶液中孵育过夜。在含有0.1%吐温20和0.01%Triton X-100的PBS中洗涤三次,每次5分钟后,在37°C的黑暗中用1∶100的封闭溶液稀释的FITC偶联的山羊抗兔IgG标记卵母细胞45分钟。样品用10µg/ml的Hoechst 33342孵育10分钟以标记DNA。染色的卵母细胞被安装在盖玻片下,使用防褪色安装介质来延缓光漂白。使用激光扫描共聚焦显微镜(Leica TCS SP5)和适当的滤光片同时激发FITC(细胞周期蛋白B1标记)和Hoechst 33342(DNA标记)检查载玻片。
实验3:Demecolcine(DEM)辅助和机械去核猪卵母细胞的效率,以及这些去核卵母细胞在SCNT后的发育[6]
Demecolcine(DEM)辅助眼球摘除术[6]
将经Demecolcine(DEM)处理的具有突出膜的卵母细胞移至添加了5μg/ml细胞松弛素B和0.4μg/ml DEM的培养基中,持续最佳时间(在实验1中确定)。使用斜面移液管去除突起,吸出第一极体和部分直接位于下方的细胞质(图1)。
动物实验
动物/疾病模型: 小鼠 [3]
剂量: 0.3 mg/kg
给药途径: 腹腔注射 (ip)
实验结果: 与对照组相比,减数分裂 II 期细胞中低倍体和高倍体的频率增加了 7.8-8 倍。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
220401 人类 TDLo 口服 200 ug/kg 皮肤及附属器官(皮肤):毛发:其他 药物和化学品毒理学,Deichmann, WB,纽约,学术出版社,1969,-(184),1969
220401 大鼠 LD50 静脉注射 1700 ug/kg Arzneimittel-Forschung.药物研究,20(1467),1970 [PMID:4991432]
220401 大鼠 LD50 肠外给药 1700 ug/kg 癌症研究最新进展,52(76),1975 [PMID:796916]
220401 小鼠 LD50 口服 25530 ug/kg 美国国家癌症研究所筛查项目数据摘要,发育治疗项目,1986年1月
220401 小鼠 LD50 腹腔注射 35 mg/kg 瑙恩-施米德贝格实验病理学和药理学文献,230(559),1957 [PMID:13526771]
参考文献

[1]. Colcemid-induced apoptosis of cultured human glioma: electron microscopic and confocal laser microscopic observation of cells sorted in different phases of cell cycle. Cytometry. 1998 Apr 1;31(4):295-9.

[2]. Ultra-Low Colcemid Doses Induce Microtubule Dysfunction as Revealed by Super-Resolution Microscopy. Bioexiv. doi.org/10.1101/2020.08.13.249664

[3]. Discovery and engineering of colchicine alkaloid biosynthesis. Nature. 2020 Aug;584(7819):148-153. Erratum in: Nature. 2020 Jul 30.

[4]. Antitubulin effects of derivatives of 3-demethylthiocolchicine, methylthio ethers of natural colchicinoids, and thioketones derived from thiocolchicine. Comparison with colchicinoids. J Med Chem. 1990 Feb;33(2):567-71.

[5]. An improved method for cytogenetic analysis of meiotic aneuploidy in rodent and frog spermatocytes. Mutat Res. 1990 Dec;234(6):361-8.

[6]. Effect of demecolcine-assisted enucleation on the MPF level and cyclin B1 distribution in porcine oocytes. PLoS One. 2014 Mar 13;9(3):e91483.

其他信息
(-)-去甲基秋水仙碱是一种仲氨基化合物,是(S)-秋水仙碱中N-乙酰基被N-甲基取代的化合物。它可从秋水仙(Colchicum autumnale)中分离得到,毒性低于秋水仙碱,并被用作抗肿瘤药物。它具有抗肿瘤和微管解聚的双重作用。它是一种生物碱,也是一种仲氨基化合物。
据报道,去甲基秋水仙碱存在于沙生秋水仙(Colchicum arenarium)、黄花金盏花(Gagea lutea)以及其他一些有相关数据的生物体中。
去甲基秋水仙碱是一种秋水仙碱类似物,具有潜在的抗有丝分裂和抗肿瘤活性。去甲秋水仙碱酸与微管蛋白的秋水仙碱结合位点结合,抑制其聚合形成微管,导致细胞周期停滞于中期,从而阻止细胞分裂。
去甲秋水仙碱酸是从秋水仙(Colchicum autumnale L.)中分离得到的一种生物碱,用作抗肿瘤药物。
目前,植物药用化合物的生物合成途径鲜有完全阐明。因此,许多植物来源的治疗药物都是直接从药用植物或植物细胞培养物中分离得到的1。秋水仙碱就是一个典型的例子,它是一种获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准的治疗炎症性疾病的药物,来源于秋水仙属(Colchicum)和嘉兰属(Gloriosa)植物2-5。本文结合转录组学、代谢逻辑和途径重建技术,在不预先了解生物合成基因、基因组序列或天然宿主遗传工具的情况下,阐明了秋水仙碱近乎完整的生物合成途径。我们从嘉兰(Gloriosa superba)中发现了八个参与N-甲酰秋水仙碱生物合成的基因。N-甲酰秋水仙碱是秋水仙碱的前体,含有秋水仙碱特有的卓酚酮环和药效团6。值得注意的是,我们鉴定出一种非经典的细胞色素P450,它催化了秋水仙碱独特碳骨架生成所必需的显著的环扩展反应。我们进一步利用这些新发现的基因,在烟草(Nicotiana benthamiana)中构建了一条以苯丙氨酸和酪氨酸为起始原料的N-甲酰秋水仙碱生物合成途径(共包含16种酶)。本研究建立了一条合成含托酚酮的秋水仙碱生物碱的代谢途径,并深入揭示了植物利用简单氨基酸生成复杂生物活性代谢物的独特化学机制。[3]
总之,本研究首次证明,去甲秋水仙碱 (DEM)/DEM辅助去核法相比其他去核技术具有显著优势。在DEM辅助去核过程中,MPF保留在细胞质中,而核区细胞周期蛋白B1的含量降低。DEM辅助去核后,细胞周期蛋白B1均匀分布于细胞质中,且该蛋白的总体水平升高,这与MPF活性的增强相对应。MPF对于重构胚胎的发育和高效的体细胞核移植(SCNT)至关重要。因此,DEM辅助去核法似乎是利用SCNT生产克隆猪的最佳方法。[6]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C21H25NO5
分子量
371.43
精确质量
371.173
元素分析
C, 67.91; H, 6.78; N, 3.77; O, 21.54
CAS号
477-30-5
相关CAS号
477-30-5; 1246817-95-7 (HBr)
PubChem CID
220401
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.2±0.1 g/cm3
沸点
625.5±55.0 °C at 760 mmHg
熔点
73-75ºC
闪点
332.1±31.5 °C
蒸汽压
0.0±1.8 mmHg at 25°C
折射率
1.582
LogP
1.52
tPSA
66.02
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
5
重原子数目
27
分子复杂度/Complexity
653
定义原子立体中心数目
1
SMILES
O(C([H])([H])[H])C1C(=C(C([H])=C2C=1C1=C([H])C([H])=C(C(C([H])=C1[C@]([H])(C([H])([H])C2([H])[H])N([H])C([H])([H])[H])=O)OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H])OC([H])([H])[H]
InChi Key
NNJPGOLRFBJNIW-HNNXBMFYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C21H25NO5/c1-22-15-8-6-12-10-18(25-3)20(26-4)21(27-5)19(12)13-7-9-17(24-2)16(23)11-14(13)15/h7,9-11,15,22H,6,8H2,1-5H3/t15-/m0/s1
化学名
(7S)-1,2,3,10-tetramethoxy-7-(methylamino)-6,7-dihydro-5H-benzo[a]heptalen-9-one
别名
C 12669; C-12669; Colcemid; Demecolcine; C12669; (-)-Demecolcine; Colchamine; Demecolcine; colcemid; 477-30-5; Colchamine; (-)-Demecolcine; Reichstein's F; Desmecolcine; Demecolcin; Colchamin
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~75 mg/mL (~201.9 mM)
Ethanol: ~75 mg/mL (~201.9 mM)
Water: ~75 mg/mL (~201.9 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.73 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.6923 mL 13.4615 mL 26.9230 mL
5 mM 0.5385 mL 2.6923 mL 5.3846 mL
10 mM 0.2692 mL 1.3461 mL 2.6923 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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