Dihydrocaffeic acid   中文名称: 3,4-二羟基苯基丙酸

Target: p38 MAPK (reduces UVB-induced phosphorylation)
JNK (reduces UVB-induced phosphorylation to a lower extent)[1]

DHCA在无细胞实验中表现出高抗氧化能力：ABTS⁺清除能力为5.09 ± 0.76 μM TE/μM样品；DPPH⁺ IC50为7.65 ± 0.08 μM；在XOD实验中，超氧阴离子(O₂⁻)清除IC50为0.96 ± 0.03 μM。[1]
在7-35 μM浓度范围内，DHCA对L929成纤维细胞无细胞毒性（35 μM时细胞存活率为98.3%）。[1]
用35 μM DHCA预处理可显著降低UVB诱导的细胞死亡（600 mJ/cm²），使细胞存活率从51.8%（仅UVB）提高到63.4%。 [1] DHCA (35 μM) 可使 UVB 诱导的细胞内 ROS 生成减少 39.1%，细胞外 H₂O₂ 生成减少 72.2%（几乎恢复至基础水平）。[1] DHCA 可部分恢复 UVB 消耗的内源性抗氧化剂：与 UVB 照射的对照组相比，过氧化氢酶 (CAT) 活性增加 32.5%，超氧化物歧化酶 (SOD) 活性增加 28.5%，还原型谷胱甘肽 (GSH) 水平恢复 28.4%。[1] DHCA 可抑制 UVB 诱导的脂质过氧化 38.3%（DPPP 法）。 [1] DHCA 可预防 UVB 诱导的线粒体膜电位 (Δψm) 丧失：UVB 导致 50.1% 的丧失，而 DHCA 预处理可将丧失降低至 10.6%。[1] DHCA 可显著减弱 UVB 诱导的细胞凋亡：UVB 使细胞凋亡增加 42.5%（膜联蛋白 V 染色），而 DHCA 可抑制细胞凋亡 41.6%。[1] DHCA 可减少 UVB 诱导的晚期凋亡和坏死细胞（吖啶橙/碘化丙啶染色），并减少具有浓缩核的细胞数量（Hoechst 33342 染色）。 [1]
DHCA显著减弱了UVB诱导的MMP-1表达（Western blot），但未显著降低MMP-3或MMP-9的表达。[1]
DHCA降低了UVB诱导的p38 MAPK（与未照射对照组相比，从2.4倍降至1.3倍）和JNK（与未照射对照组相比，从2.0倍降至1.4倍）的磷酸化水平。[1]

将ABTS⁺自由基阳离子溶液（稀释至734 nm处吸光度为0.70 ± 0.05）与7 μL溶于乙醇的DHCA（35 μM）或槲皮素混合，评估DHCA的ABTS⁺清除能力。在25°C避光条件下孵育6分钟后测量吸光度。结果以每μM样品中Trolox当量（μM）表示。[1] 将100 μL DPPH⁺甲醇溶液（65 μM）与100 μL不同浓度（2.7 - 16.5 μM）的DHCA或槲皮素混合，评估DPPH⁺清除能力。在25°C避光条件下孵育30分钟后，于517 nm处测量吸光度。计算DPPH⁺清除率，结果以IC50值表示。[1]
采用黄嘌呤/鲁米诺/黄嘌呤氧化酶（XOD）体系，通过鲁米诺依赖性化学发光法分析超氧阴离子（O₂⁻）清除能力。将含有甘氨酸缓冲液（0.1 M，1 mM EDTA，pH 9.4）、黄嘌呤（6 mM）、鲁米诺（0.6 mM）和溶于50%乙醇的二氢黄酮酸（DHCA）或槲皮素（0.05 - 5.1 μM）的试剂溶液混合。加入新鲜配制的冷XOD（20 mU/mL）启动反应，1分钟后读取化学发光值。计算清除率，结果以IC50值表示。[1]

L929成纤维细胞在添加了2 mM L-谷氨酰胺、10%胎牛血清、青霉素（50 U/mL）和链霉素（50 μg/mL）的DMEM培养基中，于37°C、5% CO₂条件下培养。[1]
采用中性红染色法评估DHCA的细胞毒性。将细胞（2.5×10⁴/孔）用不同浓度的DHCA（7、14、21、28、35 μM）或0.6% DMSO处理24小时。洗涤后，加入中性红溶液（40 μg/mL）孵育3小时，然后用甲醛/氯化钙固定细胞，并在540 nm处测定吸光度。 [1]
在 UVB 照射研究中，细胞先用 35 μM DHCA 或 1 mM NAC 预处理 1 小时，然后用 UVB 灯在 20 cm 距离处进行 UVB 照射（600 mJ/cm²）。照射后，细胞在无血清 DMEM 培养基中培养 24 小时后进行分析。[1]
使用 H₂DCFDA 探针检测细胞内 ROS。细胞用 DHCA 或 NAC 处理 1 小时，然后在 37°C 下与 10 μM H₂DCFDA 孵育 45 分钟，之后进行照射。立即测量荧光强度（激发波长 488 nm，发射波长 525 nm）。蛋白质浓度采用 Bradford 法定量。[1]
使用 Amplex Red 试剂盒检测细胞外 H₂O₂。照射后，将细胞与 15 μM Amplex Red 和 0.15 U/mL 辣根过氧化物酶在 pH 7.5 的 Tris-HCl 缓冲液中于 25°C 孵育 30 分钟，并测量荧光强度（激发波长 563 nm，发射波长 590 nm）。[1]
过氧化氢酶活性通过监测 240 nm 处的 H₂O₂ 消耗量来测定。将样品（50 μg/mL 蛋白）与 30 mM H₂O₂ 在磷酸钾缓冲液（50 mM，pH 7.0）中混合，并通过分光光度法测定分解速率。[1]
超氧化物歧化酶 (SOD) 活性通过焦棓酚氧化法测定。将样品（50 μg/mL 蛋白）与 15 mM 焦棓酚在 Tris-HCl 缓冲液（200 mM，2 mM EDTA，pH 8.2）中混合，孵育 2 分钟，并在 420 nm 处测量吸光度。一个单位的 SOD 活性定义为抑制 50% 焦棓酚氧化所需的量。[1]
GSH 含量通过将细胞上清液（50 μg/mL 蛋白）与 7.5 mM 邻苯二甲醛在磷酸钠缓冲液（100 mM，5 mM EDTA，pH 8.0）中混合 15 分钟来测定，并测量荧光强度（激发波长 350 nm，发射波长 420 nm）。[1]
脂质过氧化采用 DPPP 探针进行评估。照射后24小时，将细胞与20 μM DPPP在37°C下孵育30分钟，并测量荧光强度（激发波长λ_ex 351 nm，发射波长λ_em 380 nm）。同时进行荧光显微镜观察。[1]
使用罗丹明123测量线粒体膜电位。照射后24小时，将细胞与26.2 μM罗丹明123在37°C下孵育15分钟，并测量荧光强度（激发波长λ_ex 488 nm，发射波长λ_em 525 nm）。[1]
通过膜联蛋白V-FITC结合检测细胞凋亡。细胞解离、洗涤后，重悬于结合缓冲液（140 mM NaCl、5 mM CaCl₂、10 mM HEPES-Na，pH 7.4）中，用 2 μL Annexin V-FITC 染色 15 分钟，然后进行流式细胞术分析（10,000 个事件）。[1]
吖啶橙和碘化丙啶双重染色：细胞用 1 μg/mL 吖啶橙和 1 μg/mL 碘化丙啶染色 10 分钟，然后用荧光显微镜观察。计数活细胞（绿色）、晚期凋亡细胞（橙色细胞核）和坏死细胞（红色细胞核）（每次实验 100 个细胞）。[1]
用 Hoechst 33342 染色评估细胞核浓缩情况。照射后24小时，用8 μM Hoechst 33342在37°C下染色15分钟，并通过荧光显微镜观察细胞。对浓缩的细胞核进行定量（每次实验100个细胞）。[1]
Western blot分析：将细胞裂解于含有Tris-HCl（pH 7.4）、2% SDS、5% 2-巯基乙醇、30%甘油、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物的缓冲液中。将等量的蛋白质样品进行 12% SDS-PAGE 电泳分离，然后转移至硝酸纤维素膜，用 5% BSA 的 TBST 溶液封闭，与 JNK、p-JNK、p38、p-p38、MMP-1、MMP-3、MMP-9、caspase 9（1:500）和 β-actin（1:10000）的一抗于 4°C 孵育过夜，再与 HRP 标记的二抗（1:10000）孵育 2 小时。最后用化学发光试剂检测蛋白条带。[1]

代谢/代谢产物
3,4-二羟基苯丙酸的已知代谢产物包括3-(3-羟基苯基)丙酸和4-羟基-4-羟基苯丙酸。

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DHCA在浓度为7-35 μM时对L929成纤维细胞无细胞毒性，经中性红染色法检测，在最高浓度（35 μM）下处理24小时后，细胞存活率为98.3%。[1]

[1]. Dihydrocaffeic Acid Prevents UVB-Induced Oxidative Stress Leading to the Inhibition of Apoptosis and MMP-1 Expression via p38 Signaling Pathway. Oxid Med Cell Longev. 2019 Jan 17;2019:2419096.

3-(3,4-二羟基苯基)丙酸是一种单羧酸，由3-苯基丙酸的3位和4位羟基取代而成。它也被称为二氢咖啡酸，是咖啡酸的代谢产物，具有抗氧化活性。在人体内，它既是一种抗氧化剂，也是一种外源性代谢产物。其功能与3-苯基丙酸相关；它是3-(3,4-二羟基苯基)丙酸酯的共轭酸。据报道，3-(3,4-二羟基苯基)丙酸存在于Pyrrosia petiolosa、Lindera glauca以及其他一些具有相关数据的生物体中。

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长期暴露于UVB会促进氧化应激，导致皮肤光老化，其特征是深层皱纹、弹性丧失、脱水、毛细血管扩张和色素沉着改变。二氢萘酚酸（DHCA）具有儿茶酚结构和羧基，这赋予了它抗氧化活性。该研究首次证实，DHCA能够抑制UVB诱导的L929成纤维细胞脂质过氧化、细胞凋亡和MMP-1表达，从而减轻皮肤光老化。这些作用与通过减少活性氧（ROS）生成和再生内源性抗氧化防御机制来抑制氧化应激有关，进而抑制p38 MAPK信号通路。DHCA是一种很有前景的化合物，可用于开发局部给药系统，以预防UVB引起的皮肤损伤。[1]

C9H10O4

182.1733

182.057

1078-61-1

348154

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

417.5±30.0 °C at 760 mmHg

136-139 °C(lit.)

220.4±21.1 °C

0.0±1.0 mmHg at 25°C

1.620

0.5

77.76

3

4

3

13

181

0

DZAUWHJDUNRCTF-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C9H10O4/c10-7-3-1-6(5-8(7)11)2-4-9(12)13/h1,3,5,10-11H,2,4H2,(H,12,13)

3-(3,4-dihydroxyphenyl)propanoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~250 mg/mL (~1372.34 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。