| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
superoxide indicator; blue-fluorescence dye
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| 体外研究 (In Vitro) |
一般操作步骤：
二氢乙锭工作液的制备 1.1 配制储备液：将 1 mg 二氢乙锭溶解于 0.31 mL DMSO 中，配制成 10 mM 的储备液。 注意：避免反复冻融，建议将储备液储存于 -20°C 或 -80°C 并避光保存。 1.2 配制二氢乙锭工作液：将储备液用 PBS 或无血清细胞培养基稀释至 1–10 μM 的工作浓度。 注意：您可以根据具体需要调整二氢乙锭工作液的浓度。 细胞染色 2.1：悬浮细胞：将悬浮细胞在 4°C 下以 1000g 离心 3–5 分钟；弃去上清液。用PBS洗涤两次，每次5分钟。 贴壁细胞：为了分离细胞并制备单细胞悬液，弃去细胞培养基，加入胰蛋白酶。在4℃下以1000g离心3-5分钟后弃去上清液。用PBS洗涤两次，每次5分钟。 2.2 加入1 mL二氢乙锭工作液，室温静置30分钟。 2.3 在4℃下以400g离心3-4分钟后弃去上清液。 2.4 用PBS洗涤细胞两次，每次5分钟。 2.5 将细胞重悬于PBS或无血清细胞培养基中，然后使用流式细胞仪或荧光显微镜进行观察。在-20°C避光保存一年。 注意事项： 1. 原液应冷藏于-20°C或-80°C，避光保存，避免频繁冻融。 2. 您可以根据具体需要调整二氢乙锭工作液的浓度。 3. 本产品仅供研究使用。 4. 操作时请穿戴实验服和一次性手套，以保障您自身的健康和安全。 二氢乙锭与超氧阴离子(O₂•⁻)反应，反应速率常数约为10⁵–10⁶ M⁻¹·s⁻¹，生成特定的羟基化产物2-OH-E⁺。其他氧化剂（过氧亚硝酸盐衍生的自由基、羟基自由基、过铁基铁）与HE反应生成乙锭(E⁺)和非荧光二聚体产物（例如E⁺-E⁺），但不生成2-OH-E⁺。[1] 在利用次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶（生成O₂•⁻）和DPTA-NONOate（生成•NO）的无细胞体系中，•NO和O₂•⁻的共生成（形成ONOO⁻）抑制了2-OH-E⁺的生成，并以浓度依赖的方式增加了E⁺和二聚体产物的生成。尽管2-OH-E⁺减少，但由于E⁺的生成（其荧光光谱与2-OH-E⁺相似），HE氧化产生的荧光强度并未因•NO通量的增加而降低。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
OXA诱导小鼠肝脏高氧化应激（HSOS）中氧化应激相关指标[2]
微阵列结果表明，氧化应激可能在OXA诱导的HSOS中发挥重要作用。因此，我们检测了常见氧化应激标志物的水平，并通过DHE染色观察了活性氧（ROS）的变化。丙二醛（MDA）是体内脂质过氧化产物，可引起细胞毒性。给予小鼠10 mg/kg OXA后，小鼠肝脏中MDA水平显著升高（P<0.05；图7A）。超氧化物歧化酶（SOD）是一种抗氧化金属酶，可催化超氧阴离子自由基，为细胞提供对抗ROS的防御机制。过氧化氢酶（CAT）也是一种抗氧化酶，可保护细胞免受H₂O₂的毒性作用。谷胱甘肽（GSH）具有抗氧化和综合解毒作用。OXA显著降低了小鼠肝脏中SOD、CAT和GSH的水平（P<0.05；图7B-D）。此外，采用DHE探针技术分析了ROS水平的变化。结果显示，OXA组小鼠肝脏中的ROS水平呈剂量依赖性升高（图7E）。综上所述，这些数据证实氧化应激可能在OXA诱导的HSOS小鼠肝损伤中发挥重要作用。 |
| 酶活实验 |
氢乙啶 (HE) 或二氢乙啶及其线粒体靶向类似物（与三苯基膦部分偶联，即 MitoSOX™ Red）与超氧阴离子快速反应 (k ∼10⁶ m⁻¹ s⁻¹)，生成特异性羟基化标记产物 2-羟基乙啶 (2-OH-E⁺) 或 2-羟基线粒体乙啶 (2-OH-Mito-E⁺)[1]。酶活性测定：不适用（HE 是一种探针，而非酶底物）。然而，以下方法可用于使用 HE 检测 O₂•⁻ 和其他氧化剂：在磷酸盐缓冲液（50 mM，pH 7.4，含 0.1 mM DTPA）中，使用 96 孔荧光酶标仪（激发波长 485 nm，发射波长 595 nm）监测 HE 的氧化情况。 DPTA-NONOate分解产生的•NO和次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶产生的O₂•⁻的通量各不相同。荧光强度增加速率与•NO和O₂•⁻通量的关系如图所示。采用C18熔融核色谱柱（2.6 µm，100×4.6 mm）进行HPLC分析，采用梯度洗脱（水相流动相，乙腈浓度在5分钟内从10%~20%逐渐增加至100%，含0.1% TFA，流速1.5 ml/min）。产物（HE、2-OH-E⁺、E⁺和E⁺-E⁺）使用标准品进行定量。[1]
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| 细胞实验 |
细胞内活性氧（ROS）测定[3]
使用两种染料检测ROS：5-(和-6)-氯甲基-2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯乙酰酯（CM-H2DCFDA：激发波长504 nm；发射波长524 nm）和二氢乙锭（DHE；激发波长518 nm；发射波长605 nm）。两种染料均用DMSO溶解。将单核细胞和THP-1细胞与染料在37°C孵育30分钟。将细胞沉淀重悬于培养基中，并在37°C孵育15分钟，以使酯酶裂解CM-H2DCFDA并将其捕获在细胞内。然后将细胞与α2NTD、PMA或仅含培养基（含或不含100 μM二乙基二硫代氨基甲酸钠三水合物）孵育。采用两种方法检测细胞内活性氧（ROS）。在α2NTD刺激后，使用LSR II流式细胞仪或96孔黑色微孔板中的酶标仪分析细胞荧光。 细胞实验：将RAW 264.7巨噬细胞接种于96孔板中，用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA，200 ng/ml）刺激，并加入二氢乙锭（浓度未明确，但根据其他研究通常为10 μM）。在37℃下，使用酶标仪（激发波长485 nm，发射波长595 nm）监测荧光强度的增加。超氧化物歧化酶（SOD）而非过氧化氢酶抑制了荧光强度的增加，表明2-OH-E⁺的生成依赖于O₂•⁻。L-NAME不抑制荧光强度的增加。 LPS（0.5 μg/ml）、IFN-γ（50 单位/ml）和 PMA 的共刺激降低了细胞内 2-OH-E⁺ 的水平，并增加了二聚体产物的生成。孵育 1 小时后，裂解细胞并收集培养基；按照上述方法用 HPLC 分析产物。[1] |
| 动物实验 |
二氢乙锭 (DHE) 活性氧 (ROS) 染色[2]
将冷冻肝组织切片（-26°C；6 µm 厚）在室温下复温，并用抗荧光猝灭液封片 5 分钟。逐滴加入 ROS 染料溶液，并在 37°C 避光孵育 30 分钟。随后，用磷酸盐缓冲液 (PBS，pH 7.4) 洗涤切片三次，并逐滴加入 DAPI 染色液，在室温下避光孵育 10 分钟。用 PBS 洗涤三次并干燥后，用抗荧光猝灭液封片。在荧光显微镜下观察切片并拍照。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
另见：氢乙啶（注：已移至此处）。
二氢乙锭（氢乙锭）是一种广泛用于超氧化物检测的荧光探针。它与超氧化物反应生成2-羟基乙锭（2-OH-E⁺），一种特异性标记产物。然而，由于光谱重叠，仅凭荧光测量无法区分2-OH-E⁺和乙锭（E⁺）；高效液相色谱（HPLC）分析对于准确定量至关重要。其他氧化剂（例如，过氧亚硝酸盐、羟基自由基）会生成E⁺和二聚体，但不会生成2-OH-E⁺。氢乙锭与O₂•⁻的反应速率常数约为10⁵–10⁶ M⁻¹·s⁻¹，远低于O₂•⁻与超氧化物歧化酶（SOD）的反应速率常数（~10⁹ M⁻¹·s⁻¹），因此SOD可以有效地与之竞争。 HE衍生的自由基不与分子氧反应，从而防止人为地生成O₂•⁻和H₂O₂。线粒体靶向类似物MitoSOX Red的作用机制类似。外部因素（光照、超声处理）可诱导2-OH-E⁺和E⁺的生成。[1] |
| 分子式 |
C21H21N3
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|---|---|---|
| 分子量 |
315.41
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| 精确质量 |
315.173
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| 元素分析 |
C, 79.97; H, 6.71; N, 13.32
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| CAS号 |
104821-25-2
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
128682
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| 外观&性状 |
Pale purple to light pink solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
580.4±50.0 °C at 760 mmHg
|
|
| 闪点 |
299.5±24.9 °C
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|
| 蒸汽压 |
0.0±1.6 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.680
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| LogP |
3.06
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|
| tPSA |
55.92
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
24
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| 分子复杂度/Complexity |
419
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
NC1=CC=C2C3=C(C=C(N)C=C3)C(C4=CC=CC=C4)N(CC)C2=C1
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| InChi Key |
XYJODUBPWNZLML-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C21H21N3/c1-2-24-20-13-16(23)9-11-18(20)17-10-8-15(22)12-19(17)21(24)14-6-4-3-5-7-14/h3-13,21H,2,22-23H2,1H3
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| 化学名 |
5-ethyl-6-phenyl-6H-phenanthridine-3,8-diamine
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.93 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1705 mL | 15.8524 mL | 31.7048 mL | |
| 5 mM | 0.6341 mL | 3.1705 mL | 6.3410 mL | |
| 10 mM | 0.3170 mL | 1.5852 mL | 3.1705 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 Oxidation of HE by O2˙̄,•NO, and co-generated•NO and O2˙̄and global profiling of products.J Biol Chem.2012 Jan 27;287(5):2984-95. |
|---|
 Real-time monitoring of products of HE oxidation by activated macrophages.J Biol Chem.2012 Jan 27;287(5):2984-95. |
 Global profiling of H2O2and ONOO−-derived oxidants by monitoring the oxidation of Amplex® Red.J Biol Chem.2012 Jan 27;287(5):2984-95. |
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