Dihydroethidium

别名: Hydroethidine; PD-MY 003; PD-MY003; PD-MY-003; Hydroethidine; 38483-26-0; 5-ethyl-6-phenyl-5,6-dihydrophenanthridine-3,8-diamine; 5-ethyl-6-phenyl-6H-phenanthridine-3,8-diamine; 5-ethyl-5,6-dihydro-6-phenyl-3,8-phenanthridinediamine; Dihydroethidium?; Dihydroethidium 二氢乙锭; 2,7-二氨基-10-乙基-9-苯基-9,10-二氢二苯并哌啶; 溶剂红8; 2,7-二氨基-10-乙基-9-苯基-9,10-二氢啡啶;7-二氨基-10-乙基-9-苯基-9,10-二氢啡啶
目录号: V2871 纯度: ≥98%
二氢乙啶(以前称为 Hydroethidine 和 PD-MY 003)是一种细胞可渗透的蓝色荧光染料和超氧化物指示剂,在氧化之前在胞质溶胶中呈现蓝色荧光,并插入细胞 DNA 中,用明亮的荧光将其细胞核染色。红色的。
Dihydroethidium CAS号: 104821-25-2
产品类别: Reactive Oxygen Species
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
二氢乙啶(以前称为 Hydroethidine 和 PD-MY 003)是一种细胞可渗透的蓝色荧光染料和超氧化物指示剂,在氧化之前在细胞质中呈现蓝色荧光,并插入细胞 DNA 中,用明亮的荧光红色。 570 nm 处的 DHE 衍生荧光是检测吞噬细胞和血管 NADPH 氧化酶产生的细胞内和细胞外超氧化物的便捷方法。此外,据报道,二氢乙锭还可以通过减少中风后小鼠的超氧化物来发挥神经保护作用。
生物活性&实验参考方法
靶点
superoxide indicator; blue-fluorescence dye
体外研究 (In Vitro)
一般流程:
二氢乙锭工作液的制备
1.1将1mg二氢乙锭溶解在0.31mL DMSO中制备10mM储备溶液来制备储备液。
注意:避免反复冻融循环,建议将储备液储存在-20°C或-80°C下,避光保存。
1.2二氢乙锭工作液的制备:将储备液在PBS或无血清细胞培养基中稀释成1-10μM的工作液。
注意:您可以根据具体需要调整二氢乙锭工作液的浓度。
细胞染色
2.1:悬浮细胞:在4°C下离心1000g悬浮细胞3-5分钟;丢弃上清液。用PBS洗两次,每次五分钟。
贴壁细胞:分离细胞并制备单细胞悬浮液,丢弃细胞培养基并加入胰蛋白酶。在4°C下以1000g离心3至5分钟后丢弃上清液。用PBS洗两次,每次五分钟。
2.2加入1mL二氢乙锭工作液,然后在室温下静置半小时。
2.3在4°C下以400 g离心3至4分钟后,丢弃上清液。
2.4用PBS洗涤细胞两次,每次5分钟。
2.5将细胞重新悬浮在PBS或无血清细胞培养基中,然后使用流式细胞仪或荧光显微镜进行观察。在-20°C下避光储存一年。
注意事项:
1.原始溶液应在-20°C或-80°C下冷藏,避光,避免过于频繁地冷冻和解冻。
2.您可以根据具体需要调整二氢乙锭工作溶液的浓度。
3.本产品仅供研究使用。
4.操作时请穿着实验服和一次性手套,以保障自身健康和安全。
体内研究 (In Vivo)
OXA诱导的小鼠HSOS中的氧化应激相关指标[2]
微阵列结果表明,氧化应激可能在OXA诱导的HSOS中起重要作用。因此,我们测定了常见氧化应激标志物的水平,并通过DHE染色观察了ROS的变化。MDA是体内脂质过氧化产物,可引起细胞毒性。施用10mg/kg OXA后,小鼠肝脏中的MDA水平显著升高(P<0.05;图7A)。SOD是一种抗氧化金属酶,可以催化超氧阴离子自由基并提供细胞对ROS的防御。CAT也是一种抗氧化酶,可以保护细胞免受H2O2的毒性。谷胱甘肽具有抗氧化和综合解毒作用。OXA显著降低了小鼠肝脏中SOD、CAT和GSH的水平(P<0.05;图7B-D)。此外,DHE探针技术用于分析ROS水平的变化。结果显示,OXA组小鼠肝脏中的ROS水平呈剂量依赖性增加(图7E)。综上所述,这些数据证实了氧化应激可能在OXA诱导的HSOS小鼠的肝损伤中起着重要作用。
酶活实验
氢乙啶(HE)或二氢乙啶及其与三苯基鏻部分结合的线粒体靶向类似物(MitoSOXTM-Red)与超氧化物(k∼106 m−1 s−1)迅速反应,形成特定的羟基化标记产物2-羟基乙啶(2-OH-E+)或2-羟基甲硫醇(2-OH-Mito-E+)[1]。
细胞实验
细胞内ROS测量[3]
使用两种染料检测ROS:5-(和-6)-氯甲基-2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(CM-H2DCFDA:激发波长,504 nm;发射波长,524 nm)和二氢乙锭(DHE;激发波长,518 nm;发射波长相应,605 nm)。两种染料都用DMSO复溶。单核细胞和THP-1细胞在37°C下与染料一起孵育30分钟。将细胞颗粒重新悬浮在培养基中,在37°℃下孵育15分钟,使酯酶切割CM-H2DCFDA将其捕获在细胞内。然后将细胞与a2NTD、PMA或单独含有或不含有100μM二乙基二硫代氨基甲酸钠盐三水合物的培养基一起孵育。采用两种方法检测细胞内ROS。经过一次NTD刺激后,通过LSR II上的流式细胞仪或96孔黑板上的微孔板读数器分析细胞的荧光。
动物实验
Staining of dihydroethidium (DHE)-reactive oxygen species (ROS)[2]
Frozen liver sections (−26°C; 6 µm thickness) were warmed at room temperature and mounted with an anti-fluorescence quenching solution for 5 min. ROS dye solution was added dropwise and sections were incubated for 30 min at 37°C in the dark. Subsequently, the sections were washed three times with phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.4) and DAPI staining solution was added dropwise and incubated for 10 min at room temperature in the dark. After washing three times with PBS and drying, the sections were mounted with an anti-fluorescence quenching solution. The sections were observed under a fluorescence microscope and images were captured.
参考文献

[1]. Global profiling of reactive oxygen and nitrogen species in biological systems: high-throughput real-time analyses. J Biol Chem. 2012 Jan 27;287(5):2984-95.

其他信息
See also: Hydroethidine (annotation moved to).
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C21H21N3
分子量
315.41
精确质量
315.173
元素分析
C, 79.97; H, 6.71; N, 13.32
CAS号
104821-25-2
相关CAS号
104821-25-2
PubChem CID
128682
外观&性状
Pale purple to light pink solid powder
密度
1.2±0.1 g/cm3
沸点
580.4±50.0 °C at 760 mmHg
闪点
299.5±24.9 °C
蒸汽压
0.0±1.6 mmHg at 25°C
折射率
1.680
LogP
3.06
tPSA
55.92
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
2
重原子数目
24
分子复杂度/Complexity
419
定义原子立体中心数目
0
SMILES
NC1=CC=C2C3=C(C=C(N)C=C3)C(C4=CC=CC=C4)N(CC)C2=C1
InChi Key
XYJODUBPWNZLML-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C21H21N3/c1-2-24-20-13-16(23)9-11-18(20)17-10-8-15(22)12-19(17)21(24)14-6-4-3-5-7-14/h3-13,21H,2,22-23H2,1H3
化学名
5-ethyl-6-phenyl-6H-phenanthridine-3,8-diamine
别名
Hydroethidine; PD-MY 003; PD-MY003; PD-MY-003; Hydroethidine; 38483-26-0; 5-ethyl-6-phenyl-5,6-dihydrophenanthridine-3,8-diamine; 5-ethyl-6-phenyl-6H-phenanthridine-3,8-diamine; 5-ethyl-5,6-dihydro-6-phenyl-3,8-phenanthridinediamine; Dihydroethidium?; Dihydroethidium
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO:10 mM in DMSO
Water:<1 mg/mL
Ethanol:
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.93 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.1705 mL 15.8524 mL 31.7048 mL
5 mM 0.6341 mL 3.1705 mL 6.3410 mL
10 mM 0.3170 mL 1.5852 mL 3.1705 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • Dihydroethidium


    Oxidation of HE by O2˙̄,•NO, and co-generated•NO and O2˙̄and global profiling of products.2012 Jan 27;287(5):2984-95.

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