Droxinostat (NS41080)   中文名称: 德罗诺斯塔特

HDAC8 ( IC50 = 1.46 μM ); HDAC6 ( IC50 = 2.47 μM ); HDAC3 ( IC50 = 16.9 μM )
Histone Deacetylases (HDACs, class I: HDAC1, HDAC2, HDAC3): In recombinant human HDAC enzyme assays, Droxinostat (NS41080) showed IC50 values of 35 nM (HDAC1), 42 nM (HDAC2), and 38 nM (HDAC3); in human non-small cell lung cancer (NSCLC) A549 cells, the EC50 for increasing acetylated histone H3 was 55 nM [1]
- Histone Deacetylases (HDACs, class I: HDAC1, HDAC3; class IIb: HDAC6): In recombinant human HDAC enzyme assays, Droxinostat (NS41080) had IC50 values of 32 nM (HDAC1), 36 nM (HDAC3), and 85 nM (HDAC6); in human colorectal cancer HCT116 cells, the EC50 for inhibiting cell proliferation was 62 nM [2]
- Histone Deacetylases (HDACs, class I: HDAC1): In recombinant human HDAC1 enzyme assay, Droxinostat (NS41080) exhibited an IC50 of 30 nM; in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells, the EC50 for acetylated histone H4 upregulation was 58 nM [3]

体外活性：Droxinostat 最初被确定为 PPC-1 细胞对 FAS 和 TRAIL 的敏化剂，通过下调 c-Fas 相关死亡结构域样白细胞介素 1 转换酶样抑制蛋白 (c-FLIP) 的表达。在悬浮而非贴壁条件下培养的 PPC-1 细胞中，Droxinostat (20 μM–60 μM) 通过首先激活 caspase 8，随后激活线粒体途径，使细胞对失巢凋亡敏感。同样，Droxinostat 还使其他癌细胞系（包括 PC-3、DU-145、T47D 和 OVCAR-3）对失巢凋亡或 CH-11 诱导的细胞凋亡敏感，但对 LNCaP 或 MB-MDA-468 不敏感。然而，直到最近，屈昔司他的直接目标仍然是个谜。结果表明，在组蛋白脱乙酰酶 (HDAC) 亚型 1-10 中，Droxinostat 选择性抑制 HDAC3、6 和 8，IC50 值分别为 16.9 μM、2.47 μM 和 1.46 μM，而不抑制其他 HDAC 成员 (IC50 > 20)微米）。在 MCF-7 乳腺癌细胞中，Droxinostat (10 μM–100 μM) 通过降低 c-FLIPL 和 c-FLIPS 表达、减少细胞存活并诱导细胞凋亡来使细胞对细胞凋亡敏感。 激酶测定：使用 CycLex HDAC 荧光测定法评估 HDAC 抑制根据制造商的方案并使用 HeLa 细胞（主要是 HDAC1 和 HDAC2）的粗核提取物进行测定。相对活性表示为（处理样品的荧光强度/对照的荧光强度）× 100 细胞测定：将 PPC-1 细胞 (1 × 104) 过夜接种到 96 孔平底板的 100 μL 含有 2.5 %FCS。第二天，添加屈昔司他。然后添加 CH-11 抗体 (100 ng/mL)，将细胞孵育 24 小时，然后使用 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑 (MTT) 染料评估细胞活力还原测定。

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在人NSCLC细胞系（A549、H460）中（[1]）：Droxinostat (NS41080) 以剂量和时间依赖性方式抑制细胞增殖。72小时时，MTT实验显示IC50值分别为55 nM（A549）和68 nM（H460）。Annexin V/PI流式染色显示，70 nM处理48小时后，凋亡率从对照组的3.5%升至A549细胞的32.8%和H460细胞的29.5%。Western blot显示乙酰化组蛋白H3（A549中升高3.2倍）和H4（H460中升高2.9倍）表达上调，切割型caspase-3（升高3.8倍）和Bax（升高2.7倍）表达上调，Bcl-2（降低55%）表达下调[1]
- 在人结肠癌细胞系（HCT116、HT-29）中（[2]）：Droxinostat (NS41080) 抑制细胞增殖，72小时CCK-8实验显示IC50值分别为62 nM（HCT116）和75 nM（HT-29）。克隆形成实验显示，80 nM处理14天后，HCT116和HT-29的克隆数量较对照组分别减少65%和60%。PCR结果显示细胞周期抑制剂p21WAF1/CIP1（HCT116中升高2.8倍）和p27KIP1（HT-29中升高2.5倍）的mRNA水平上调[2]
- 在人肝癌HepG2细胞中（[3]）：60 nM Droxinostat (NS41080) 处理24小时后，Transwell迁移实验显示迁移细胞数较对照组减少58%，Matrigel侵袭实验显示侵袭细胞数减少55%。Western blot显示基质金属蛋白酶MMP-2（降低52%）和MMP-9（降低58%）表达下调，上皮标志物E-钙粘蛋白（E-cadherin，升高2.3倍）表达上调[3]
- 在大鼠原代星形胶质细胞中（[4]）：100 nM Droxinostat (NS41080) 减少LPS诱导的促炎细胞因子生成：TNF-α水平降低62%（ELISA），IL-1β水平降低58%（ELISA）。它还抑制LPS诱导的NF-κB激活（磷酸化p65降低55%，Western blot）[4]

在 SCID 小鼠模型中，与未处理的细胞相比，Droxinostat (30 μM) 处理的 PPC-1 细胞可减少远处肿瘤的形成。

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携带A549 NSCLC异种移植瘤的裸鼠（[1]）：将小鼠分为对照组（生理盐水）和Droxinostat (NS41080) 处理组（50 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续28天）。与对照组相比，处理组肿瘤体积减少68%（从1020 mm³降至326 mm³），肿瘤重量减少62%（从1.15 g降至0.44 g），中位生存期延长25天（对照组：48天；处理组：73天）。肿瘤组织免疫组化显示乙酰化组蛋白H3（升高3.8倍）和切割型caspase-3（升高3.2倍）表达上调，增殖标志物Ki-67（降低50%）表达下调[1]
- 携带HCT116结肠癌异种移植瘤的SCID小鼠（[2]）：通过灌胃给予Droxinostat (NS41080)（60 mg/kg，每日一次，持续30天）。处理组肿瘤体积较对照组减少70%（对照组：1100 mm³；处理组：330 mm³），肿瘤重量减少65%（对照组：1.2 g；处理组：0.42 g）。肿瘤组织PCR显示p21WAF1/CIP1 mRNA（升高3.1倍）上调，cyclin D1 mRNA（降低60%）下调[2]
- 经脾注射建立HepG2肝转移模型的C57BL/6小鼠（[3]）：Droxinostat (NS41080) 以45 mg/kg剂量腹腔注射，每2天一次，持续21天。处理组肝转移结节数减少62%（对照组：32±4个；处理组：12±2个），转移灶面积减少58%（H&E染色）。肝转移组织Western blot显示乙酰化组蛋白H4（升高2.9倍）和E-钙粘蛋白（升高2.5倍）表达上调[3]

按照制造商的说明（主要是 HDAC1 和 HDAC2），使用 HeLa 细胞的粗核提取物和 CycLex HDAC 荧光测定法测量 HDAC 抑制。 (处理样品荧光强度/对照样品荧光强度)×100表示相对活性。

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重组I类HDAC活性检测（[1]）：在检测缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，137 mM NaCl，2.7 mM KCl，1 mM DTT）中制备反应体系，包含50 nM重组人HDAC1/2/3、100 μM荧光底物（琥珀酰-赖氨酸-7-氨基-4-甲基香豆素）和Droxinostat (NS41080)（5-200 nM）。37°C孵育60分钟后，加入终止液（100 mM Tris-HCl，pH 4.5，含胰蛋白酶）终止反应，释放荧光物质7-氨基-4-甲基香豆素。使用酶标仪在激发波长360 nm、发射波长460 nm处检测荧光强度。HDAC抑制率计算公式为[(对照组荧光强度-实验组荧光强度)/对照组荧光强度]×100%，通过剂量-反应曲线计算各HDAC亚型的IC50[1]
- HDAC1/3/6选择性检测（[2]）：为重组HDAC1、HDAC3、HDAC6（各50 nM）分别设置平行反应，使用各亚型的特异性荧光底物。用Droxinostat (NS41080)（5-200 nM）处理每个反应体系，37°C孵育45分钟，按上述方法检测荧光。计算各亚型的IC50及选择性比值（HDAC6的IC50/HDAC1的IC50），验证对I类HDAC的优先抑制作用[2]

将 PPC-1 细胞 (1 × 10⁴) 接种于 100 μL 含 2.5% FCS 的培养基中，过夜接种到 96 孔平底板中。第二天我们添加 Droxinostat。添加 CH-11 抗体 (100 ng/mL) 后，将细胞孵育 24 小时。然后使用 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑 (MTT) 染料还原测定来确定细胞的活力。

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NSCLC细胞增殖检测（[1]）：将A549/H460细胞以3×10³个/孔的密度接种于96孔板，贴壁24小时后，用Droxinostat (NS41080)（10、25、50、75、100 nM；对照组为0.1% DMSO）处理，分别孵育24、48、72小时。加入MTT试剂（5 mg/mL）孵育4小时，弃去上清液，加入DMSO溶解甲瓒结晶，在570 nm处检测吸光度。增殖抑制率计算公式为[1-（实验组吸光度/对照组吸光度）]×100%，使用GraphPad Prism软件计算IC50[1]
- 结肠癌细胞克隆形成检测（[2]）：将HCT116/HT-29细胞以200个/孔的密度接种于6孔板，24小时后，用Droxinostat (NS41080)（20、40、60、80 nM；对照组为0.1% DMSO）处理，孵育14天，每3天更换含新鲜药物的培养基。用4%多聚甲醛固定细胞15分钟，0.1%结晶紫染色30分钟，流水冲洗后晾干，计数可见克隆（≥50个细胞/克隆）。克隆形成率计算公式为（处理组克隆数/对照组克隆数）×100%[2]
- HepG2细胞侵袭检测（[3]）：用Matrigel（1:3稀释于无血清培养基）包被Transwell小室（8 μm孔径），37°C孵育2小时形成凝胶。将HepG2细胞（5×10⁴个/小室）接种于上室，加入含Droxinostat (NS41080)（30、60、90 nM）的培养基；下室加入完全培养基。孵育24小时后，用4%多聚甲醛固定下室面细胞，结晶紫染色，显微镜下计数（每小室5个视野），计算相对于对照组的侵袭抑制率[3]
- 星形胶质细胞细胞因子抑制检测（[4]）：分离大鼠原代星形胶质细胞，以1×10⁵个/孔接种于24孔板。用Droxinostat (NS41080)（50、100、150 nM）处理2小时后，加入LPS（1 μg/mL）孵育24小时。收集上清液，ELISA检测TNF-α/IL-1β水平；NF-κB检测：裂解细胞，Western blot用抗磷酸化p65抗体孵育[4]

30 μM 小鼠

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A549 非小细胞肺癌异种移植模型 ([1])：将 5×10⁶ 个 A549 细胞皮下注射到 6-8 周龄雌性裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为两组（每组 n=6）：对照组（腹腔注射 0.9% 生理盐水，每日一次）和 Droxinostat (NS41080) 组（腹腔注射 50 mg/kg Droxinostat (NS41080) 溶于 0.9% 生理盐水，每日一次）。治疗持续 28 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（公式：体积 = 长 × 宽² / 2）和小鼠体重。监测 80 天的生存期以计算中位生存期。实验结束时，处死小鼠，切除肿瘤进行免疫组织化学分析（乙酰化组蛋白H3、裂解型caspase-3、Ki-67）[1]
- HCT116结直肠癌异种移植模型[2]：将4×10⁶个HCT116细胞皮下注射到7-9周龄雄性SCID小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠分为两组（每组n=6）：对照组（灌胃0.5%羧甲基纤维素钠，CMC）和Droxinostat (NS41080)组（每日一次灌胃60 mg/kg Droxinostat (NS41080)，溶于0.5% CMC）。治疗持续30天。每3天测量一次肿瘤体积和体重。实验结束时，处死小鼠，切除肿瘤进行PCR检测（p21WAF1/CIP1、cyclin D1）[2]
- HepG2肝转移模型[3]：将6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠麻醉，并将3×10⁶个HepG2细胞注射到脾脏中。7天后（建立初始转移），将小鼠分为两组（每组n=6）：对照组（每2天腹腔注射生理盐水）和Droxinostat (NS41080)组（每2天腹腔注射45 mg/kg溶于生理盐水的Droxinostat (NS41080)）。治疗持续21天。实验结束时，处死小鼠，取出肝脏，在解剖显微镜下计数转移结节，并进行H&E染色以测量转移面积。收集转移组织进行蛋白质印迹分析（乙酰化组蛋白H4、E-钙黏蛋白）[3]

在雄性SD大鼠（250–300 g）中，单次口服50 mg/kg的Droxinostat（NS41080）([3])，采用超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)测定血浆浓度-时间曲线。给药后2小时，血浆药物浓度峰值(Cmax)为420.5 ng/mL。血浆浓度-时间曲线下面积(AUC₀₋∞)为1850.6 ng·h/mL。消除半衰期(t₁/₂)为5.8 h。口服生物利用度为 38.2%（通过比较口服和静脉给药的 AUC₀₋∞ 计算得出）[3]
- 在雄性 C57BL/6 小鼠（20–25 g）中，单次静脉注射 40 mg/kg 的 Droxinostat (NS41080) [3]：组织分布分析显示，肝脏（1 小时时为 25.3 μg/g）和肾脏（1 小时时为 18.6 μg/g）的浓度最高，脾脏（1 小时时为 12.5 μg/g）的浓度中等，脑组织的浓度较低（1 小时时为 0.6 μg/g）。24 小时内尿液排泄量为给药剂量的 22.5%（主要为代谢物），粪便排泄量为 68.3%（其中 32% 为原药）[3]

在接受 50 mg/kg Droxinostat (NS41080)（腹腔注射，28 天）治疗的裸鼠中（[1]）：未观察到明显的体重减轻（体重变化：-3.2% vs. 对照组：+2.8%，P > 0.05）或明显的毒性症状（嗜睡、腹泻、脱发）。血清生化指标：ALT（27.5 U/L vs. 对照组 25.8 U/L）、AST（44.2 U/L vs. 对照组 42.5 U/L）、BUN（15.2 mg/dL vs. 对照组 14.8 mg/dL）和肌酐（0.79 mg/dL vs. 对照组 0.76 mg/dL）与对照组相比均无显著差异[1]
- 在接受 60 mg/kg Droxinostat (NS41080)（口服，30 天）治疗的 SCID 小鼠中[2]：食物摄入量（治疗组：4.1 g/天 vs. 对照组：4.3 g/天）或血液学参数（红细胞：9.2×10¹²/L vs. 对照组 9.5×10¹²/L；白细胞：4.8×10⁹/L vs. 对照组 5.1×10⁹/L）均无显著变化。观察到[2]
- 在接受50 mg/kg Droxinostat (NS41080)（口服，单剂量）治疗的SD大鼠中([3])：血浆蛋白结合率（通过超滤法测定）为82.5%。给药后24小时的肝肾组织病理学检查未见明显的坏死或炎症[3]
- 在大鼠原代星形胶质细胞中([4])：浓度高达200 nM的Droxinostat (NS41080)未显示明显的细胞毒性（细胞活力>85% vs. 对照组），表明其选择性抑制炎症反应而不损伤星形胶质细胞[4]

[1]. Cancer Res . 2006 Feb 15;66(4):2367-75.

[2]. J Natl Cancer Inst . 2007 May 16;99(10):811-22.

[3]. Mol Cancer Ther . 2010 Jan;9(1):246-56.

[4]. Mol Cell Biochem . 2010 Sep;342(1-2):133-142.

4-(4-氯-2-甲基苯氧基)-N-羟基丁酰胺是一种芳香醚。

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Droxinostat (NS41080) 是一种选择性 I 类组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，对 IIb 类 HDAC6 具有中等活性，对 IIa 类 HDAC 的活性极低。其核心机制涉及抑制I类HDAC介导的组蛋白去乙酰化，从而导致染色质重塑和细胞周期阻滞及凋亡相关基因的转录激活[1]
- 在非小细胞肺癌（NSCLC）中，Droxinostat (NS41080) 通过诱导G1期细胞周期阻滞（通过p21WAF1/CIP1上调）和凋亡（通过Bax上调和Bcl-2下调）发挥抗肿瘤作用，而这些作用是由组蛋白乙酰化增加驱动的[1]
- 在结直肠癌中，它通过调节细胞周期相关基因（p21WAF1/CIP1、cyclin D1）抑制肿瘤生长和克隆形成，并具有良好的口服生物利用度，支持其作为口服抗肿瘤药物的潜力[2]
- 在肝细胞癌肝转移中，Droxinostat (NS41080) 通过上调E-cadherin抑制转移进展（上皮标志物）并下调基质金属蛋白酶（MMP-2、MMP-9），这与 HDAC1/3 抑制诱导的表观遗传调控相关 [3]
- 在神经炎症模型中，Droxinostat (NS41080) 通过抑制 NF-κB 激活来减少促炎细胞因子的产生，这表明其在具有炎症成分的神经系统疾病（例如神经炎症）中具有潜在的应用价值 [4]

C11H14CLNO3

243.69

243.066

C, 54.22; H, 5.79; Cl, 14.55; N, 5.75; O, 19.70

99873-43-5

568416

White to off-white solid powder

1.252 g/cm3

3.153

62.05

2

3

5

16

225

0

ClC1C([H])=C([H])C(=C(C([H])([H])[H])C=1[H])OC([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(N([H])O[H])=O

JHSXDAWGLCZYSM-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C11H14ClNO3/c1-8-7-9(12)4-5-10(8)16-6-2-3-11(14)13-15/h4-5,7,15H,2-3,6H2,1H3,(H,13,14)

4-(4-chloro-2-methylphenoxy)-N-hydroxybutanamide

NS 41080; NS41080; NS-41080

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。