DSP Crosslinker   中文名称: 3,3'-二硫代二丙酸 二(N-羟基丁二酰亚胺酯)

Linker for antibody-drug conjugates (ADCs)

ADC 细胞毒素通过 ADC 连接体与抗体连接，形成 ADC。

洛曼试剂，即DSP，是一种具有膜渗透性、巯基可断裂的同源双功能交联剂。其结构特点在于，一个由8个原子组成的间隔臂两端各连有一个可与氨基反应的N-羟基琥珀酰亚胺酯。在pH 7–9条件下，这些NHS酯能选择性地与伯胺反应，形成稳定的酰胺键，从而共价连接蛋白质或其他含氨基分子。间隔臂中央的二硫键可在还原剂作用下断裂，从而实现可逆交联，以利于后续分析步骤。
尽管DSP不溶于水性缓冲液，但它可轻易溶解于DMF或DMSO等极性非质子溶剂中。其跨膜能力使其能够交联细胞内蛋白质，从而稳定微弱或瞬时的蛋白质相互作用以便研究。该试剂还可用于免疫染色前固定组织样本中的蛋白质复合物、将蛋白质固定在氨基化表面，以及为各种生化检测制备生物偶联物。
一种密切相关的类似物DTSSP，具有相同的8原子间隔臂和同源双功能NHS酯反应活性。两者的关键区别在于，DTSSP因含有磺酸基团而具有水溶性和膜非渗透性。这一特性使其标记作用仅限于细胞外或细胞表面蛋白质，而无法进入细胞内。
综上所述，洛曼试剂因其间隔臂长度、可断裂二硫键及膜渗透性等结构特点，成为一种用于探索细胞内、外蛋白质相互作用、绘制蛋白质复合物图谱以及生成可逆生物偶联物的多功能工具。

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关键特性
NHS酯基团： 该功能基团可选择性与伯胺反应，形成稳定的酰胺键，从而促进蛋白质或其他含胺分子之间的共价交联。 二硫键间隔臂： 分子中含有的二硫键可在还原条件下断裂，这使得DSP能够作为可逆交联剂使用。这一特性对于在分析后回收原始分子至关重要。


主要应用
蛋白质交联： DSP被广泛用于蛋白质或多肽的共价偶联，在结构生物学、蛋白质相互作用图谱绘制以及免疫分析等领域具有关键用途。
生物偶联： 该试剂是生物偶联策略的基础，可用于支持抗体药物偶联物及其他靶向治疗药物的合成。
可逆交联： 凭借其可断裂的二硫键，DSP能够实现临时交联，并且可精确地通过DTT或TCEP等还原剂进行逆转。

核心优势
可控的可逆性： 执行交联后再将其逆转的能力，对于需要在后续步骤中去除连接子的实验流程极具价值。
高效稳健的偶联： NHS酯的化学特性确保了其在生理pH条件下能与伯胺发生快速、高收率的偶联，生成的稳定偶联物适用于广泛的生物学与分析场景。

总结
DSP交联剂是生物技术和药物研究领域中一种用途广泛且不可或缺的试剂，尤其因其能够在需要精确控制蛋白质或其他生物分子交联及后续释放的应用中发挥重要作用而备受青睐。

[1]. Probing antibody surface density and analyte antigen incubation time as dominant parameters influencing the antibody-antigen recognition events of a non-faradaic and diffusion-restricted electrochemical immunosensor. Anal Bioanal Chem. 2020 Mar;412(7):1709-1717.

Electrochemical sensors based on antibody-antigen recognition events are commonly used for the rapid, label-free, and sensitive detection of various analytes. However, various parameters at the bioelectronic interface, i.e., before and after the probe (such as an antibody) assembly onto the electrode, have a dominant influence on the underlying detection performance of analytes (such as an antigen). In this work, we thoroughly investigate the dependence of the bioelectronic interface characteristics on parameters that have not been investigated in depth: the antibody density on the electrode's surface and the antigen incubation time. For this important aim, we utilized the sensitive non-faradaic electrochemical impedance spectroscopy method. We showed that as the incubation time of the antigen-containing drop solution increased, a decrease was observed in both the solution resistance and the diffusional resistance with reflecting boundary elements, as well as the capacitive magnitude of a constant phase element, which decreased at a rate of 160 ± 30 kΩ/min, 800 ± 100 mΩ/min, and 520 ± 80 pF × s(α-1)/min, respectively. Using atomic force microscopy, we also showed that high antibody density led to thicker electrode coating than low antibody density, with root-mean-square roughness values of 2.2 ± 0.2 nm versus 1.28 ± 0.04 nm, respectively. Furthermore, we showed that as the antigen accumulated onto the electrode, the solution resistance increased for high antibody density and decreased for low antibody density. Finally, the antigen detection performance test yielded a better limit of detection for low antibody density than for high antibody density (0.26 μM vs 2.2 μM). Overall, we show here the importance of these two factors and how changing one parameter can drastically affect the desired outcome. Graphical abstract.

C14H16N2O8S2

404.415441513062

404.034

57757-57-0

93313

White to off-white solid powder

1.6±0.1 g/cm3

560.1±60.0 °C at 760 mmHg

128-133 °C

292.6±32.9 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.625

-1.66

177.96

0

10

11

26

552

0

S(CCC(=O)ON1C(CCC1=O)=O)SCCC(=O)ON1C(CCC1=O)=O

FXYPGCIGRDZWNR-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C14H16N2O8S2/c17-9-1-2-10(18)15(9)23-13(21)5-7-25-26-8-6-14(22)24-16-11(19)3-4-12(16)20/h1-8H2

Dithiobis[succinimidyl propionate]

DTSSP CrosslinkerDSP Crosslinker

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~123.63 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL

Prior to use in aqueous cross-linking reactions, DSP must first be dissolved in an appropriate organic solvent, such as DMSO or DMF. The crosslinker exhibits solubility in several common solvents, including DMF, DMSO, acetone, and chloroform (at concentrations up to 50 mg/mL). Its membrane-permeable nature allows it to be effectively employed for cross-linking intracellular proteins, making it a frequent choice for applications such as immunoprecipitation (IP), co-immunoprecipitation (Co-IP), and chromatin immunoprecipitation (ChIP) assays. For applications specifically targeting extracellular cross-linking, the water-soluble analog DTSSP is recommended as a suitable alternative.

When preparing DSP for aqueous reactions, precipitation can sometimes occur upon dilution of the DMSO stock solution into phosphate-buffered saline (PBS). To mitigate this, it is advisable to add the DMSO stock to PBS in a dropwise manner while gently vortexing the PBS solution. Gentle warming of the final reaction mixture can also help maintain solubility. If precipitation is observed, reducing the concentrations of both the protein and DSP in the reaction may resolve the issue. Alternatively, increasing the final DMSO concentration in the reaction solution up to 20% can improve solubility and prevent precipitate formation.

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。