Echinatin

别名: Retrochalcone; 刺甘草查尔酮;刺甘草查尔酮(刺甘草查耳酮);刺甘草查尔酮对照品;刺甘草查耳酮
目录号: V5259 纯度: ≥98%
Echinatin 是一种查尔酮衍生物,称为逆查尔酮 (retrochalcone),是从甘草中分离出来的天然产物,是一种查耳酮衍生物,称为逆查尔酮 (retrochalcone)。
Echinatin CAS号: 34221-41-5
产品类别: Immunology & Inflammation related
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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纯度: ≥98%

产品描述
Echinatin 是一种查耳酮衍生物,称为逆查尔酮 (retrochalcone),是从甘草中分离出来的天然产物,是一种查耳酮衍生物,称为逆查尔酮 (retrochalcone)。它具有抗氧化特性和抗炎活性。
生物活性&实验参考方法
靶点
This study investigates the antioxidant activity of Echinatin. The focus is on its radical scavenging and reducing power. [1]
体外研究 (In Vitro)
在 LPS 攻击的 BMDM 中,松果素(0–40 μM,60 分钟)与 HSP90 结合并抑制 ATP 酶活性,从而抑制细胞周期蛋白诱导的 NLRP3 调节体激活 [2]。在 ESCC(KYSE30 和 KYSE270 细胞)中,紫锥菊素(0–40 μM,1–5 天)可减少细胞增殖、迁移和缩短,同时诱导细胞封闭和自噬 [4]。
Echinatin 在四种不同的体外测定中表现出剂量依赖性的抗氧化活性。测得的IC₅₀值(达到50%自由基抑制或相对还原能力的浓度)分别为:Fe³⁺还原测定为 338.0 ± 8.6 μM,Cu²⁺还原测定为 228.1 ± 10.6 μM,PTIO自由基清除测定为 1276.5 ± 149.9 μM,DPPH自由基清除测定为 394.2 ± 67.5 μM。Trolox被用作阳性对照。 [1]
通过UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS分析发现,Echinatin 与DPPH自由基反应,形成echinatin-DPPH加合物(m/z值为662, 226, 196)和echinatin二聚体(m/z值为538, 417, 297),表明存在自由基加合物形成机制。 [1]
共振理论分析表明,在echinatin分子中,氢原子转移抗氧化反应优先发生在4-OH位点,而非4′-OH位点。 [1]
引言部分引用的文献提到,既往研究表明echinatin具有保肝和抗炎作用,这些作用已知与抗氧化活性相关。 [1]
体内研究 (In Vivo)
紫锥菊素(20–80 mg/kg,腹膜内注射)具有心脏保护作用; Echinatin(20 和 50 mg/kg,缺血)可抑制 KYSE270 衍生的肿瘤异种移植物中的肿瘤生长并抑制 AKT/mTOR 缓冲 [4]。 Echinatin(20 和 40 mg/kg,腹腔注射)通过抑制 NLRP3 炎性体激活来抑制 LPS 诱导的探针感染性休克 [2]。
在小鼠LPS诱导的败血症休克模型中,腹腔注射 (i.p.) 预处理 Echinatin (20 或 40 mg/kg) 有效减轻了LPS诱导的腹腔灌洗液中IL-1β和TNF-α的产生,降低了中性粒细胞的比例和数量,并显著提高了小鼠的存活率。其效果与NLRP3抑制剂MCC950相当。Echinatin与MCC950联用未显示出叠加效应。 [2]
在葡聚糖硫酸钠 (DSS) 诱导的结肠炎小鼠模型中,每日腹腔注射 Echinatin (40 mg/kg),持续9天,能显著防止体重下降、降低疾病活动指数评分、恢复DSS诱导的结肠缩短、并减轻结肠炎症(黏膜屏障破坏和炎性细胞浸润)。它还降低了结肠组织中的caspase-1激活和IL-1β产生。其效果与MCC950相似,联合用药未显示出显著的叠加益处。 [2]
在蛋氨酸-胆碱缺乏 (MCD) 饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎 (NASH) 小鼠模型中,在6周MCD饮食的最后5周内,每日腹腔注射 Echinatin (40 mg/kg) 能显著改善肝脏形态学改变、肝脏脂肪变性、气球样变、纤维化以及血浆ALT和AST水平的升高。它抑制了肝脏中caspase-1的激活,并降低了肝纤维化标志物(α-SMA, Col1a1)和促炎基因(IL-1β, TNF-α)的mRNA水平。其治疗效果与MCC950相似,联合用药显示出相似的益处。 [2]
酶活实验
HSP90β ATP酶活性测定:在含有HEPES、NaCl、MgCl₂、DTT和ATP的反应缓冲液中评估HSP90β的ATP酶活性。将反应体系与不同浓度的 Echinatin (0.25 mM, 0.5 mM, 1 mM) 或阳性对照格尔德霉素 (20 μM) 在37°C下孵育1小时。根据制造商说明,使用CellTiter-Glo发光法量化剩余的ATP,并记录发光信号。结果显示echinatin剂量依赖性地抑制HSP90β的ATP酶活性。 [2]
细胞实验
蛋白质印迹分析[1]
细胞类型: LPS 引发的 BMDM
测试浓度: 0- 40 μM
孵育时间: 60 分钟
实验结果: 裂解的 caspase-1 和 IL-1β 的产生减少。

免疫荧光 [4]
细胞类型: KYSE30 和 KYSE270 细胞
测试浓度: 40 μM
孵育时间:2天
实验结果:诱导细胞LC3斑点积累。
细胞活力测定:用指定剂量的 Echinatin 处理骨髓来源巨噬细胞 (BMDMs)。使用Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 或基于ATP定量的CellTiter-Glo发光细胞活力法评估细胞活力。 [2]
炎症小体激活测定:为诱导NLRP3炎症小体激活,将BMDMs过夜培养,用LPS或Pam3CSK4预激4小时,用 Echinatin 处理1小时,然后用不同激动剂刺激:尼日利亚菌素 (30分钟)、ATP (45分钟)、MSU (6小时),或用转染试剂转染LPS、poly(I:C)或poly(dA:dT) 4小时。对于NLRC4激活,用Lfn-FliC刺激细胞。收集细胞培养上清和裂解物进行分析。 [2]
Caspase-1活性测定:使用Caspase-Glo 1炎症小体测定试剂测量细胞培养基中的caspase-1活性。按照制造商说明,使用试剂体积与样品体积1:1的比例,并记录发光信号。 [2]
ASC寡聚化测定:处理后,用含Triton X-100的裂解缓冲液裂解细胞。通过离心分离Triton X-100不溶性沉淀部分,洗涤,重悬于PBS中,并在37°C下用双琥珀酰亚胺辛二酸酯 (DSS) 交联30分钟。然后将交联的沉淀离心,溶解于SDS上样缓冲液中,并通过免疫印迹分析检测ASC寡聚体。 [2]
细胞内K⁺测量:用 Echinatin 处理并经尼日利亚菌素刺激的LPS预激BMDMs被彻底洗涤。细胞用超纯硝酸裂解,裂解物煮沸。通过电感耦合等离子体发射光谱法测量细胞内K⁺浓度。 [2]
线粒体损伤评估:用 Echinatin 处理并经尼日利亚菌素刺激的LPS预激BMDMs用MitoTracker Red染料染色,观察线粒体形态。 [2]
下拉实验鉴定结合靶点:将 Echinatin 偶联到溴化氰活化的琼脂糖珠上。来自LPS预激BMDMs的细胞裂解液在4°C下与echinatin-琼脂糖珠孵育过夜。洗涤珠子,洗脱结合蛋白并进行免疫印迹分析。竞争实验通过在裂解液中加入游离echinatin后进行下拉。 [2]
免疫共沉淀实验:用Flag标签质粒(NLRP3、NLRC4、AIM2)转染HEK-293T细胞。24小时后,用 Echinatin (80 μM)、格尔德霉素 (20 μM) 或溶剂处理细胞6小时。裂解细胞,使用抗Flag M2亲和珠进行免疫共沉淀。对免疫沉淀物进行免疫印迹分析以评估蛋白质相互作用。 [2]
动物实验
动物/疾病模型: LPS诱导的小鼠脓毒性休克[1]
剂量: 20和40 mg/kg
给药途径: 腹腔注射 (ip)
实验结果: 抑制LPS诱导的IL-1β和TNF-α的产生。降低小鼠腹腔灌洗液中中性粒细胞的比例和数量。
LPS诱导的脓毒性休克模型:将8周龄小鼠腹腔注射棘皮素(20或40 mg/kg)或载体。1小时后,再次腹腔注射LPS(20 mg/kg)。为进行细胞因子分析,在LPS注射后2小时处死小鼠。用冰冷的PBS进行腹腔灌洗,收集灌洗液用于ELISA(IL-1β、TNF-α)和中性粒细胞流式细胞术分析(Ly6G和CD11b染色)。在生存研究中,LPS注射后监测小鼠3天的死亡率。[2] DSS诱导的结肠炎模型:将8周龄雄性C57BL/6小鼠在饮用水中添加2.5%的DSS,持续9天以诱导结肠炎。在此期间,每天腹腔注射溶于5% DMSO玉米油溶剂中的棘霉素(40 mg/kg)。对照组小鼠仅注射溶剂。每日监测小鼠的体重和疾病活动指数(DAI)。处死小鼠,测量结肠长度,并收集结肠组织进行组织病理学分析(H&E染色)、免疫印迹(活性caspase-1)和ELISA(IL-1β)。 [2]
MCD饮食诱导的NASH模型:8周龄雄性C57BL/6小鼠饲喂蛋氨酸和胆碱缺乏(MCD)饮食6周。在最后5周,MCD饮食组小鼠每日腹腔注射溶于5% DMSO玉米油溶剂中的棘球蓍草素(40 mg/kg)。对照组小鼠注射溶剂或饲喂蛋氨酸和胆碱充足(MCS)饮食。实验结束时,对小鼠进行麻醉。收集肝脏和血清进行分析:肝脏组织学(H&E染色和Masson染色)、血浆ALT/AST测定、肝组织免疫印迹(活性caspase-1)以及肝脏mRNA(α-SMA、Col1a1、IL-1β、TNF-α)的定量RT-PCR。 [2]
毒性评估:将8周龄的雄性和雌性C57BL/6小鼠腹腔注射棘球蚴素(120 mg/kg,剂量为疗效模型中最高剂量的3倍)或对照溶液,连续15天。每日测量体重。第16天,采集血清进行生化分析(ALT、AST、肌酐),并采集器官进行形态学检查。[2]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
在一项重复给药毒性研究中,小鼠连续15天每日腹腔注射高剂量(120 mg/kg)的棘皮素,与对照组相比,未观察到体重、血清生化指标(ALT、AST、肌酐水平)或器官形态的显著变化。这表明,在所测试的剂量下,棘皮素在小鼠中具有良好的耐受性和安全性。[2]
参考文献

[1]. Antioxidant Mechanisms of Echinatin and Licochalcone A. Molecules. 2018 Dec 20;24(1).

[2]. Echinatin effectively protects against NLRP3 inflammasome-driven diseases by targeting HSP90. JCI Insight. 2021 Jan 25;6(2):e134601.

[3]. Cardioprotective Effect of Echinatin Against Ischemia/Reperfusion Injury: Involvement of Hippo/Yes-Associated Protein Signaling. Front Pharmacol. 2021 Jan 11;11:593225.

[4]. Echinatin suppresses esophageal cancer tumor growth and invasion through inducing AKT/mTOR-dependent autophagy and apoptosis. Cell Death Dis. 2020 Jul 13;11(7):524.

其他信息
据报道,甘草(Glycyrrhiza pallidiflora)、甘草(Glycyrrhiza uralensis)以及其他有相关数据的生物体中均含有棘皮素。
另见:Loureirin C(注释已移至此处)。
棘皮素是一种查尔酮,存在于中药甘草(Glycyrrhizae radix et rhizoma)中。[1]
本研究阐明了棘皮素的抗氧化机制。在水溶液中,其抗氧化作用可能涉及电子转移(ET)和质子转移(PT)机制。在醇(甲醇)溶液中,氢原子转移(HAT)机制占主导地位,主要发生在4-OH位点。这种HAT导致中间自由基的形成,这些自由基随后生成最终的自由基加合物(RAF)产物,即棘皮素-DPPH加合物和棘皮素-棘皮素二聚体。 [1]
该研究还将棘皮素与其衍生物甘草查尔酮A进行了比较,后者含有一个1,1-二甲基-2-丙烯基取代基。在所有抗氧化活性测定中,甘草查尔酮A的IC₅₀值均显著低于棘皮素,这表明该取代基可能通过其供电子诱导效应增强了抗氧化活性。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C16H14O4
分子量
270.2800
精确质量
270.089
CAS号
34221-41-5
PubChem CID
6442675
外观&性状
Light yellow to yellow solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
509.8±50.0 °C at 760 mmHg
熔点
210ºC (dec.)
闪点
193.3±23.6 °C
蒸汽压
0.0±1.4 mmHg at 25°C
折射率
1.658
LogP
3.23
tPSA
66.76
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
20
分子复杂度/Complexity
344
定义原子立体中心数目
0
SMILES
COC1=C(C=CC(=C1)O)/C=C/C(=O)C2=CC=C(C=C2)O
InChi Key
QJKMIJNRNRLQSS-WEVVVXLNSA-N
InChi Code
InChI=1S/C16H14O4/c1-20-16-10-14(18)8-4-12(16)5-9-15(19)11-2-6-13(17)7-3-11/h2-10,17-18H,1H3/b9-5+
化学名
(E)-3-(4-hydroxy-2-methoxyphenyl)-1-(4-hydroxyphenyl)prop-2-en-1-one
别名
Retrochalcone;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~125 mg/mL (~462.48 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.17 mg/mL (8.03 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 21.7 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (7.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.6999 mL 18.4993 mL 36.9987 mL
5 mM 0.7400 mL 3.6999 mL 7.3997 mL
10 mM 0.3700 mL 1.8499 mL 3.6999 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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