| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
P2Y12 Receptor
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| 体外研究 (In Vitro) |
抗 VEEV(委内瑞拉马脑炎病毒)剂 β-d-N4-hydroxycytidine (NHC)的 EC50、EC90 和 EC99 值分别为 0.426、1.036 和 2.5 μM[1]。
在 Huh-7–CHIKV 中复制子细胞系,β-d-N4-羟基胞苷抑制CHIKV复制子活性,50%有效浓度(EC50)为0.8 μM。关于 BHK-21 细胞中的复制子,已报告了类似的结果 (EC50=1.8 μM)。根据 MTT 测定,NHC 在 Huh-7 细胞培养系统中浓度高达 100 μM 时不会引起任何细胞毒性。对于外周血单核 (PBM)、Vero 和 CEM 细胞,NHC 的 50% 细胞毒性浓度 (CCsub>50) 值分别为 30.6 μM、7.7 μM 和 2.5 μM。NHC 充当嘧啶类似物;外源核苷,例如嘧啶 C 和 U,可以逆转 NHC 介导的 CHIKV 复制子抑制;然而,复制子不受 dA、dC、dG、dU 或 T 的影响。无论有或没有 NHC,嘧啶 A 和 G 都在复制子抑制中发挥作用 [2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠模型中对VEEV抑制剂核糖核苷类似物EIDD-1931(β-D-N4-羟基胞苷)进行了表征。[4]
• EIDD-1931可口服,成功递送至脑组织并转化为活性5′-三磷酸形式。[4] • EIDD-1931在长达1000mg/kg/天的7天剂量范围毒理学研究中表现出良好的耐受性。[4] • EIDD-1931在预防性或治疗性给药时保护小鼠免受VEEV的致命鼻内攻击。[4] |
| 酶活实验 |
细胞内NHC-TP t1/2s的测定。[2]
Huh-7细胞(六孔板每孔2.5×106)与10μM[3H]NHC(β-d-N4-羟基胞苷,500 dpm/pmol)在37°C、5%CO2气氛中孵育24小时。然后用无药物培养基洗涤细胞三次以去除细胞外NHC,并用常规培养基孵育特定时间段(0、1、2、4、8和24小时)。如下所述提取细胞内代谢物。 细胞内代谢物的测定。[2] 在NHC-TP积累或NHC-TP t1/2研究时间点测定的选定时间,去除细胞外培养基,用冷磷酸缓冲盐水洗涤细胞层。用60%甲醇(1ml)刮除细胞后,在-20°C下孵育过夜提取NHC及其各自的代谢物,然后以14000 rpm离心样品5分钟,收集上清液。第二天,在冰上提取1小时(200μl,含60%甲醇),然后再次以14000 rpm的速度离心样品(Eppendorf 5415C型离心机)5分钟。将提取物合并,在温和的过滤气流下干燥,然后储存在-20°C下,直至通过HPLC分析。将残留物重新悬浮在200μl水中,并将等分试样注入HPLC柱中。 猴和人全血中NHC的稳定性研究。[2] 将10微摩尔[3H]NHC(1000 dpm/pmol)在猴子或人类血液中孵育不同时间段(0、0.08、0.16、1、2、4和24小时)。在选定的时间点,取200μl的等分试样,以14000 rpm离心5分钟。收集上清液,加入500μl乙腈并混合。将样品在14000rpm下重新离心5分钟,并使用DNA快速真空干燥上清液。将残留物重新悬浮在200μl水中,并将等分试样注入HPLC柱中。 |
| 细胞实验 |
病毒复制分析。将总共5×10~5个Vero细胞接种到6孔Costar平板中,并以图例中所示的MOI感染。在指定时间将β-d-N4-hydroxycytidine (NHC)添加到细胞中,收获培养基,并通过Vero细胞上的空斑试验测定样品中的病毒滴度,如别处所述[1]。
发现β-d-N4-hydroxycytidine (NHC)在HCV复制子系统(克隆A)中具有选择性抗丙型肝炎病毒(HCV)活性。在HCV复制子系统、Huh-7细胞、HepG2细胞和原代人肝细胞中研究了氚化NHC的细胞内代谢。用10微M放射性标记的NHC孵育细胞表明,所有肝细胞中都存在广泛而快速的磷酸化。除了NHC的5'-单磷酸、-二磷酸和-三磷酸代谢物外,还对其他代谢物进行了表征。这些包括胞苷和尿苷单磷酸盐、二磷酸盐和三磷酸盐。UTP是Huh-7细胞和原代人肝细胞中主要的早期代谢产物,表明NHC的脱氨基是主要的分解代谢途径。经计算,放射性标记的NHC三磷酸盐和来源于Huh-7细胞中NHC孵育的CTP和UTP的细胞内半衰期分别为3.0+/-1.3、10.4+/-3.3和13.2+/-3.5小时(平均值+/-标准差)。使用猴子和人类全血的研究表明,猴子细胞的脱氨基和氧化速度比人类细胞快,这表明NHC在血浆中的持续时间可能不足以输送到肝细胞。 |
| 动物实验 |
小鼠体内的药代动力学和组织分布[4]
本研究采用6-8周龄的雌性ICR (CD-1®)小鼠(与疗效研究中使用的小鼠相同)。EIDD-1931以240 mM柠檬酸缓冲液(pH 3 ± 0.3)灌胃给药,或以生理盐水腹腔注射给药。口服剂量为50、150和500 mg/kg体重,腹腔注射剂量为10和50 mg/kg体重。分别于腹腔注射后0.08、0.25、0.5、1、2、4、8和24小时,以及口服给药后0.25、0.5、1、2、3、4、8和24小时采集血样。采集血液后30分钟内,将血液样本在4℃下以2000g离心10分钟制备血浆,并在进行LC-MS/MS分析前储存于-80℃。从给药后0.5小时开始,立即从所有小鼠采集血液样本,并收集其器官(肺、脾、肝、肾、心脏和脑)。组织样本立即用液氮速冻,并在进行LC-MS/MS分析前储存于-80℃。 剂量范围探索(DRF)毒理学和毒代动力学研究[4] 该研究分两个阶段进行:A阶段(单次给药,急性毒性)和B阶段(多次给药)。在A阶段,两组各6只小鼠(每组3只雄性,3只雌性)分别以500 mg/kg和1000 mg/kg的剂量,通过灌胃法单次给予EIDD-1931。经过4天的洗脱期后,同一批小鼠分别以1500 mg/kg和2000 mg/kg的剂量再次接受灌胃给药。化合物以10 ml/kg的体积溶于柠檬酸钠溶液(0.24M柠檬酸钠,pH 3 ± 0.3)中。给药后,连续4天,每天两次监测小鼠的体重、食物消耗量、一般体貌特征和行为。在B阶段,EIDD-1931连续7天每日一次给药。每个剂量组10只雄性和10只雌性小鼠(共80只小鼠)分别以200 mg/kg/天、500 mg/kg/天和1000 mg/kg/天的剂量水平进行测试,给药体积为10 ml/kg。 [4] 在毒代动力学 (TK) 研究中,动物接受的 EIDD-1931 剂量、给药体积和给药方式与主要研究组相同,剂量分别为 200、500 和 1000 mg/kg/天。TK 组每个剂量水平使用 36 只雄性小鼠和 36 只雌性小鼠。从 TK 组动物采集血样,用于测定血浆中 EIDD-1931 的浓度。在第 1 天给药后 1、2、4、6、8 和 24 小时,以及在第 7 天给药前和给药后 1、2、4、6 和 8 小时,从每组 3 只 TK 组动物(性别/组别/时间点)采集血样。血样收集于含有肝素锂作为抗凝剂的试管中,并置于冰上保存。 鼻内委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)感染的小鼠模型[4] 所有研究均使用7至8周龄的ICR(Crl:CD1)雌性小鼠。在预防性研究中确定了EIDD-1931的剂量依赖性。将小鼠分为四组,分别灌胃给予150、300或500 mg/kg的EIDD-1931(溶于240 mM柠檬酸钠缓冲液,pH 3 ± 0.3),或仅给予溶剂作为对照,所有剂量体积均为10 ml/kg,于感染前2小时开始给药。第二次给药于感染后2小时(+2 h P1),之后每日两次(bid)给药,持续6天。在第二项(治疗性)研究中,分别于感染后 6、12、24 或 48 小时开始给予 500 mg/kg EIDD-1931 治疗,并将治疗组与载体(假)治疗组进行比较。对于感染后 6 小时组,第二次治疗在感染后 12 小时进行;之后,所有组均每 12 小时(每日两次)继续治疗 6 天。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
吸收、分布和排泄
N4-羟基胞苷在小鼠体内具有口服生物利用度,但在非人灵长类动物体内生物利用度较低。 代谢/代谢物 N4-羟基胞苷分布于组织中,并在组织中被磷酸化为5'-三磷酸形式。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
N(4)-羟基胞苷是一种核苷类似物,是胞苷在N(4)位连接一个羟基后形成的衍生物。它对流感病毒、SARS-CoV、SARS-CoV-2和MERS-CoV均具有广谱抗病毒活性。它可作为药物代谢物、人类异生物质代谢物、抗冠状病毒药物和抗病毒药物发挥作用。它是一种核苷类似物和酮肟类化合物,在功能上与胞苷相关。
N4-羟基胞苷,又称EIDD-1931,是一种核糖核苷类似物,可诱导RNA病毒颗粒发生突变。N4-羟基胞苷最早于1980年被文献报道为一种强效的细菌和噬菌体诱变剂。体外实验表明,N4-羟基胞苷对委内瑞拉马脑炎病毒和人冠状病毒HCoV-NL63具有抗病毒活性。N4-羟基胞苷已被证实能够抑制小鼠和人呼吸道上皮细胞中的SARS-CoV-2以及其他人类和蝙蝠冠状病毒。在小鼠体内,N4-羟基胞苷具有良好的口服生物利用度,并能分布到组织中,最终转化为活性5'-三磷酸形式,该形式可整合到新病毒颗粒的基因组中,导致失活突变的积累。在非人灵长类动物中,N4-羟基胞苷的口服生物利用度较低。此外,一种对瑞德西韦耐药的小鼠肝炎病毒突变株也表现出对N4-羟基胞苷的敏感性增加。 N4-羟基胞苷的前药[EIDD-2801]也正在研究其对冠状病毒家族的广谱活性。 药物适应症 N4-羟基胞苷及其前药[EIDD-2801]正在研究其对多种病毒感染的活性,包括流感病毒、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)和SARS-CoV-2。 作用机制 N4-羟基胞苷在组织中磷酸化为活性5'-三磷酸形式,该形式被整合到新病毒颗粒的基因组中,导致失活突变的积累,即病毒错误灾难。一种对[瑞德西韦]耐药的小鼠肝炎病毒突变株也显示出对N4-羟基胞苷的敏感性增加。 |
| 分子式 |
C9H13N3O6
|
|---|---|
| 分子量 |
259.21602
|
| 精确质量 |
259.08
|
| 元素分析 |
C, 41.70; H, 5.06; N, 16.21; O, 37.03
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| CAS号 |
3258-02-4
|
| PubChem CID |
197020
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
-2.2
|
| tPSA |
137.07
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
5
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
18
|
| 分子复杂度/Complexity |
398
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
|
| SMILES |
C1(N2C=C/C(=N\O)/NC2=O)OC(CO)C(O)C1O
|
| InChi Key |
XCUAIINAJCDIPM-XVFCMESISA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C9H13N3O6/c13-3-4-6(14)7(15)8(18-4)12-2-1-5(11-17)10-9(12)16/h1-2,4,6-8,13-15,17H,3H2,(H,10,11,16)/t4-,6-,7-,8-/m1/s1
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| 化学名 |
N4-Hydroxycytidine
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| 别名 |
EIDD-1931; EIDD 1931; EIDD1931; N4-Hydroxycytidine; β-D-N4-hydroxycytidine; Uridine, 4-oxime; N(4)-Hydroxycytidine; 3258-02-4; EIDD-1931; Beta-D-N4-hydroxycytidine; Uridine, 4-oxime; N-hydroxycytidine; 4-N-Hydroxycytidine; NHC; EIDD-2801-metabolite; Molnupiravir-,etabolite
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意: 该产品在溶液状态不稳定,请现配现用。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~385.77 mM)
H2O : ≥ 25 mg/mL (~96.44 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (8.02 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.8577 mL | 19.2886 mL | 38.5773 mL | |
| 5 mM | 0.7715 mL | 3.8577 mL | 7.7155 mL | |
| 10 mM | 0.3858 mL | 1.9289 mL | 3.8577 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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