Entinostat (MS275; SNDX275)   中文名称: 恩替诺特

HDAC1 ( IC50 = 243 nM ); HDAC3 ( IC50 = 248 nM ); HDAC2 ( IC50 = 453 nM )

体外活性：MS-275 通过 2-氨基显示出对 HDAC 的抑制作用。 MS-275 诱导 K562 细胞中 p21WAF1/CIP1 和凝溶胶蛋白的积累。 MS-275可以减少A2780细胞中的S期细胞并诱导G1期细胞。 MS-275 抑制人类肿瘤细胞系的增殖，包括 A2780、Calu-3、HL-60、K562、St-4、HT-29、KB-3-1、Capan-1、4-1St 和 HCT-15 IC50 从 41.5 nM 至 4.71 μM，这是由于 HAD 抑制所致。 MS-275 对其他 HDAC（4、6、8 和 10）不敏感，IC50 约为/高于 100 μM。 MS-275 对人类白血病和淋巴瘤细胞（包括 U937、HL-60、K562 和 Jurkat）显示出极大的抑制作用。 MS-275 还降低细胞周期蛋白 D1 以及抗凋亡蛋白 Mcl-1 和 XIAP 的表达。激酶测定：用 HDAC 缓冲液按 1:6 稀释大鼠肝酶。重组人 HDAC 在 HDAC 缓冲液中按 1:4 稀释。对于标准 HDAC 测定，将 60 μL HDAC 缓冲液与 10 μL 稀释酶溶液在 30 °C 下混合。 HDAC 反应通过在 HDAC 缓冲液中添加 30 μL 底物溶液开始，然后在 30 °C 下孵育 30 分钟。添加 100 μL 胰蛋白酶溶液（10 mg/ml 胰蛋白酶于 50 mM Tris-HCl [pH 8.0]、100 mM NaCl、2 μM TSA 中）终止反应。在 30°C 下孵育 20 分钟后，通过测量 460 nm（λex = 390 nm）处的荧光来监测 AMC 的释放。使用免费 AMC 校准荧光强度。对于标准时程实验，在初始 100 μL HDAC 反应中使用 20 pmol 底物。 Km 和 Vmax 值通过测量 2-50 pmol 底物酶裂解产生的荧光 AMC 来确定。使用哈内斯图分析实验数据。 AMC 信号是针对含有缓冲液和底物但不含酶的空白记录的。细胞检测：癌细胞（A2780、Calu-3、HL-60、K562、St-4、HT-29、KB-3-1、Capan-1、4-1St 和 HCT-15 细胞，5 × 103）接种到96孔板的每个孔中并用分级浓度的MS-275培养3天。将细胞用 0.1 mg/mL 中性红在 CO2 培养箱中染色 1 小时，吸出培养基后，测量用 50 μL 乙醇和 150 μL 0.1 M Na2HPO4 溶解的中性红的 OD540。 IC50值是通过将细胞的生长抑制与药物浓度的对数作图来确定的。

MS-275 在 49 mg/kg 浓度下对除 HCT-15 之外的人类肿瘤异种移植物表现出良好的抗肿瘤活性。 MS-275 在实体瘤和血液恶性肿瘤以及生理和异常基因表达的调节方面表现出有希望的治疗潜力。 MS-275与IL-2结合，对因T调节细胞减少和脾细胞增加而导致的肾细胞癌异种移植模型具有良好的抗肿瘤活性。

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研究了合成苯甲酰胺衍生物抑制组蛋白去乙酰化酶（HDA）的能力。本研究考察了一种最具活性的苯甲酰胺衍生物MS-27-275的生物学特性和抗肿瘤功效。MS-27-275抑制部分纯化的人HDA，引起多种肿瘤细胞系核组蛋白的超乙酰化。它的行为方式类似于其他HDA抑制剂，如丁酸钠和曲古霉素a；MS-27-275诱导p21（WAF1/CIP1）和gelsolin，改变细胞周期分布，s期细胞减少，g1期细胞增加。MS-27-275对多种人类肿瘤细胞系的体外敏感性谱显示出与常用抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶不同的模式，而且有趣的是，p21（WAF1/CIP1）在MS-27-275敏感的细胞系中积累更快、更大。口服MS-27-275对移植到裸鼠体内的8种肿瘤系中的7种有强烈的抑制作用，尽管其中大多数对5-氟尿嘧啶没有反应。一种结构与MS-27-275相似的化合物，没有抑制hda的活性，在细胞培养中既没有生物学效应，也没有体内治疗效果。这些结果表明MS-27-275通过抑制HDA发挥抗肿瘤作用，可能为传统抗肿瘤药物不敏感的癌症提供新的化疗策略。[3]

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实验性自身免疫性神经炎（EAN）是一种T细胞介导的周围神经系统自身免疫性炎症性脱髓鞘疾病，是人类炎症性脱髓鞘性多根神经病变的动物模型。MS-275是一种有效的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，目前正在进行各种恶性肿瘤的临床研究，据报道显示出有希望的抗炎活性。在我们目前的研究中，从首次神经症状出现开始，每天给EAN大鼠一次MS-275 (3.5 mg/kg i.p)，大大降低了EAN的严重程度和持续时间，并减轻了巨噬细胞、T细胞和B细胞的局部积聚，以及坐骨神经脱髓鞘。此外，MS-275处理的EAN大鼠坐骨神经中促炎白介素-1 β、干扰素- γ、白介素-17、诱导型一氧化氮合酶和基质金属蛋白酶-9的mRNA水平显著降低。在淋巴结中，MS-275也抑制促炎细胞因子，但增加抗炎细胞因子白介素-10和Foxp3的表达，Foxp3是调节性T细胞的一种独特的转录因子。此外，MS-275处理增加了EAN大鼠坐骨神经中浸润的Foxp3（+）细胞和抗炎M2巨噬细胞的比例。综上所述，我们的数据表明MS-275可以通过抑制炎性T细胞、巨噬细胞和细胞因子，诱导抗炎免疫细胞和分子，有效抑制EAN中的炎症，提示MS-275是治疗自身免疫性神经病变的有效候选药物[4]。

HDAC 活性生化测定由 Nanosyn 在 384 孔微孔板中进行，反应体积为 10 μL。将 5 微升 2× HDAC 抑制剂（例如 Entinostat）、4 微升 2.5× 酶和 1 微升 10× 底物与测定缓冲液（100 mM HEPES，pH 7.5，25 mM KCl，0.1% BSA，0.01 % Triton X-100、1% DMSO）在典型的酶促反应中。在酶测定中，每种 HDAC 的终浓度范围为 0.5 至 5 nM。在每个实验中，使用的最终底物浓度为 1 μM FAM-RHKK(Ac)-NH₂ 或 FAM-RHKK(三氟乙酰基)-NH₂，并且发现低于每种酶的计算 K_m,app[1]。

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酶促HDAC活性测定[1]
Nanosyn在384孔微孔板中以10μl的反应体积进行HDAC活性的生化测定。标准酶反应在测定缓冲液（100 mm HEPES，pH 7.5，25 mm KCl，0.1%BSA，0.01%Triton X-100，1%DMSO）中含有5μl 2×HDAC抑制剂、4μl 2.5×酶和1μl 10×底物。酶测定中所有HDAC的最终浓度在0.5至5nm之间。在所有测定中使用1μm FAM-RHKK（Ac）-NH2或FAM-RHKK（三氟乙酰基）-NH2的最终底物浓度，发现其低于每种酶的测定Km，app。所有抑制剂在DMSO中连续稀释，然后在测定缓冲液中交叉稀释，并在加入底物引发反应之前与酶一起孵育15分钟。孵育3小时后，通过分别加入EDTA和SDS至终浓度分别为24mm和0.04%来终止反应。使用在Caliper LC3000®上运行的12吸管微流控芯片分离每个反应中的产物和底物。分离条件使用的下游电压为-800V，上游电压为-3000V，筛选压力为-1.4ps.i。产物和底物的荧光在488nm激发，在530nm检测。使用HTS Well Analyzer软件从电泳图计算底物转化率。

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组蛋白脱乙酰酶测定。[3]
HDA按照Yoshida等人的描述进行了部分纯化，并进行了轻微的修改。K562细胞（2.5×108）在15ml HDA缓冲液（15mM磷酸钾，pH 7.5/5%甘油/0.2mM EDTA）中被破坏。通过离心（35000×g，10分钟）收集细胞核，并将其重新悬浮在含有1M（NH4）2SO4的15ml HDA缓冲液中。经过超声波处理以降低粘度后，通过离心收集上清液，向上清液中加入固体（NH4）2SO4，使最终浓度达到3.5 M，并在0°C下搅拌1小时。通过离心收集的沉淀物再次用4ml HDA缓冲液溶解，并用2升HDA缓冲溶液透析。将透析液装载到用HDA缓冲液平衡的MonoQ HR5/5（Amersham Pharmacia）上，用30ml HDA缓冲溶液中0-1M NaCl的线性梯度洗脱蛋白质。HDA活性的单峰在0.4 M NaCl下洗脱，该部分在-80°C下储存直至使用。通过将K562细胞（108个细胞）在含有0.5 mCi/ml[3H]乙酸钠（152.8 GBq/mmol；NEN）和5 mM NaBu的25 ml生长培养基中在37°C下孵育1小时来标记核组蛋白。按所述提取组蛋白
在含有2μl上述HDA组分、100μg/ml[3H]乙酰化组蛋白和5μl化合物的50μl反应混合物中，在37°C下溶解在HDA缓冲液中10分钟，评估化合物的HDA抑制活性。用50μl 1M HCl和0.55ml乙酸乙酯提取反应释放的[3H]乙酸，并通过液体闪烁计数测量溶剂层中的放射性。为了评估体内HDA抑制作用，提取细胞组蛋白，用酸/尿素/Triton X-100 PAGE检查，然后用考马斯亮蓝R-250染色，如所述。

SH-SY5Y细胞每周分裂两次，并在标准培养条件下保存在37°C、5% CO₂的湿润培养箱中。将细胞以每孔 2500 个细胞的密度接种在 20 μL 体积的补充有 10% FBS 的 DMEM/F-12 培养基中后，使细胞在黑色 384 孔板中粘附整夜。第二天在 100% DMSO 中连续稀释后，HDAC 抑制剂（如恩替司他）交叉稀释到培养基中。为了达到所需的抑制剂终浓度（例如，0.1% DMSO），将在培养基中稀释的 5 μL 化合物（例如，恩替司他）添加到细胞板的适当孔中。将处理的细胞在标准组织培养条件下孵育 6、24、48、72 或 96 小时后，使用 CellTiter-Glo 试剂对细胞 ATP 水平进行定量。类似地，与HDAC抑制剂（例如Entinostat）孵育6小时后吸出来自不同细胞板的培养基，并再次用不含抑制剂的培养基洗涤细胞。孵育 24、48、72 或 96 小时后，向细胞添加 25 μL 补充有 10% FBS 和 0.1% DMSO（无抑制剂）的培养基，并使用 CellTiter-Glo 测量细胞 ATP 水平。使用计数时间为 0.1 秒的 Envision 仪器来测量每个时间点的光度[1]。

小鼠：将A2780细胞（9×10⁶）悬浮于PBS中，皮下注射至裸鼠侧腹部。对于其余肿瘤细胞系，如KB-3-1、HCT-15、4-1St、Calu-3、St-4、Capan-1和HT-29，在进行体内抗肿瘤试验前，需进行多次传代培养。使用套管针将直径为2-3 mm的肿瘤团块皮下植入裸鼠侧腹部。待确认肿瘤在体内生长（肿瘤大小为20-100 mm³）后，每个实验组选取4-5只小鼠开始药物治疗。每周5天，连续4周口服一次entinostat。每周测量两次肿瘤的宽度和长度，并计算肿瘤体积。

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大鼠：雄性Lewis大鼠（体重：170-200克，8-10周龄）饲养于12小时光照/黑暗循环环境中，可自由摄取食物和饮水。每组6只大鼠，从第10天到第14天，每天腹腔注射Entinostat MS-275（3.5毫克/千克），作为治疗的一部分。Entinostat MS-275溶于磷酸盐缓冲液（PBS）中注射，对照组大鼠注射相同体积（1毫升）的PBS。

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体内抗肿瘤活性。[3]
将体外培养的A2780细胞（9 × 10⁶）悬浮于PBS中，并皮下注射到裸鼠侧腹。对于其他肿瘤细胞系，KB-3-1、HCT-15、4-1St、Calu-3、St-4、Capan-1 和 HT-29，在进行体内抗肿瘤试验前，肿瘤细胞经多次传代培养。使用套管针将直径为 2-3 mm 的肿瘤肿块皮下移植到裸鼠侧腹。待确认肿瘤在体内生长（肿瘤体积为 20-100 mm³）后，开始药物治疗（每组 4-5 只小鼠）。将 Entinostat/MS-27-275 和化合物 2（均溶于 0.05 N HCl 和 0.1% Tween 80 溶液中）以及 5-氟尿嘧啶 (5-FU)（用生理盐水稀释）每日一次口服给药，每周 5 天，持续 4 周。每周监测两次肿瘤的长度和宽度，并按所述方法计算肿瘤体积。

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EAN 诱导和Entinostat/MS-275 治疗 [4]
EAN 的诱导方法如前所述 (Zhang et al., 2008a)。简而言之，将含有 100 μg 合成致神经突 P2 肽 57–81 的接种物 100 μL 注射到大鼠尾根部进行免疫。每天评估 EAN 的神经功能评分，评分标准如下：0=正常，1=尾部肌张力减低，2=尾部无力，翻正反射受损，3=翻正反射消失，4=步态共济失调，5=后肢轻度瘫痪，6=中度截瘫，7=后肢重度截瘫或截瘫，8=四肢瘫痪，9=濒死，10=死亡。在治疗中，EAN大鼠从第10天到第14天每天腹腔注射Entinostat/MS-275（3.5 mg/kg）（每组6只大鼠）。注射时，Entinostat/MS-275悬浮于磷酸盐缓冲液（PBS）中，对照组大鼠注射相同体积（1 ml）的PBS。

MS-275 的药代动力学总结见表 5。在第一部分中，由于每隔一周给药一次，且首次采样点位于达峰时间 (tmax) 之后，因此最大血浆浓度 (Cmax) 和 AUC 的早期特征不明确。图 1 显示了单次给药 2、4 和 6 mg/m² 后的血浆浓度-时间曲线。
在所有给药方案下，单次和重复给药后 1 小时内均达到 MS-275 的最大血浆浓度。首次给药后的平均 Cmax 几乎与剂量成正比增加。在研究的第二部分和第三部分中，单次给药后 4 小时内 MS-275 的血浆浓度下降至 Cmax 的约 4%，此时 Cmax 已明确，表明药物迅速分布到组织中。初始分布阶段之后是较慢的次级分布阶段。然而，由于大多数患者的曲线可感知线性部分小于2个半衰期，因此无法准确测定其末端半衰期值。因此，计算得到的末端半衰期值以及AUC和表观清除率值仅为估计值，可作为近似参考值。当曲线可感知线性部分能够持续较长时间（给药后约168小时）时，无论剂量或给药方案如何，末端半衰期估计值均在60至150小时之间。
由于给药方案存在偏差，例如漏服和因毒性反应而减少剂量，因此对每周一次和每周两次给药方案下药物在血浆中的蓄积情况评估有限。基于有限的数据，血浆药物浓度似乎持续增加直至第1周期最后一次给药，表明每周两次治疗组尚未达到稳态。每周一次治疗后未发现明显的药物蓄积迹象。 https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18579665/

血液学毒性和实验室异常[https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18579665/]
表3列出了出现血液学毒性的周期数。总体而言，血液学毒性罕见，且均未达到剂量限制。149个周期中有5个周期（3%）出现3级血红蛋白异常：1例发生在2 mg/m²每周两次给药方案中，4例发生在5 mg/m²每周给药方案中。149个周期中有6个周期（4%）出现3级或4级中性粒细胞减少症：2例发生在2 mg/m²给药方案中，1例发生在4 mg/m²每两周一次给药方案中，3例发生在5 mg/m²每周给药方案中。未观察到3级或4级血小板减少症。骨髓抑制的发生与既往化疗或放疗无关，且所有病例均未出现发热、严重感染或出血等并发症。

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非血液学毒性[https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18579665/]
非血液学毒性见表4。最常见的不良事件是恶心和乏力[分别在149个治疗周期中的48个和47个周期中发生（32%）]。第二常见的不良事件是厌食，在149个治疗周期中的23个周期中发生（15%）。最常见的3级或4级不良事件是乏力，在149个治疗周期中的7个周期中发生（5%）。
无症状性低磷血症较为常见，在两例患者中构成剂量限制性毒性（DLT）。低磷血症与其他毒性（如肾功能不全或其他电解质紊乱）无关，也未观察到严重并发症。一名转移性结肠癌患者在出现大量腹水和脱水（与肿瘤快速进展和口服摄入量减少相关）期间，同时出现了3级低钠血症。该患者既往无肾脏疾病史、电解质紊乱史，也无已知会导致电解质紊乱的化疗史。经治疗性腹腔穿刺、静脉输液和胶体输注后，该患者的脱水和电解质紊乱在72小时内得到纠正。
出现≥2级低磷血症的患者接受了尿液和血清电解质分析，每日口服补充磷，并至少每周监测一次，直至血清磷水平稳定在正常范围内。
其他组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDAC抑制剂），包括羟肟酸衍生物，一直存在引起心律失常和心肌梗死的担忧，包括QTc间期延长和T波及ST波异常，尤其是在临床前模型中。在本研究中，每隔一周给药组的患者在基线、第1个治疗周期、第2个治疗周期开始时以及研究结束时均需进行心电图检查；每周两次给药组和每周一次给药组的患者在基线以及根据临床需要进行心电图检查。每隔一周给药组的患者在基线、第2个和第4个治疗周期前以及第4个治疗周期后每6周进行一次MUGA扫描；每周两次给药组和每周一次给药组的患者在基线以及根据临床需要进行MUGA扫描。基线评估后，共有18例患者进行了心电图检查：每隔一周给药组10例，每周两次给药组3例，每周一次给药组5例。10例患者完成了连续MUGA扫描：每隔一周给药组6例，每周两次给药组和每周一次给药组各2例。未发现与MS-275至少可能相关的显著心电图或MUGA异常。

[1]. Histone deacetylase (HDAC) inhibitor kinetic rate constants correlate with cellular histone acetylation but not transcription and cell viability. J Biol Chem. 2013 Sep 13;288(37):26926-43.

[2]. The histone deacetylase inhibitor MS-275 promotes differentiation or apoptosis in human leukemia cells through a process regulated by generation of reactive oxygen species and induction of p21CIP1/WAF1 1. Cancer Res. 2003 Jul 1;63(13):3637-45.

[3].A synthetic inhibitor of histone deacetylase, MS-27-275, with marked in vivo antitumor activity against human tumors. Proc Natl Acad Sci U S A, 1999, 96(8), 4592-4597.

[4]. MS-275, an histone deacetylase inhibitor, reduces the inflammatory reaction in rat experimental autoimmune neuritis. Neurosci, 2010, 169, 370-377.

恩替诺司他（Entinostat）属于苯甲酰胺类化合物，是由对-(氨甲基)苯甲酸的吡啶-3-基甲基氨基甲酸酯衍生物的羧基与苯-1,2-二胺的氨基缩合而成。它是组蛋白去乙酰化酶1 (HDAC1) 和3 (HDAC3) 的抑制剂。它具有多种功能，包括作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂（EC 3.5.1.98）、抗肿瘤药物和细胞凋亡诱导剂。恩替诺司他属于吡啶类、氨基甲酸酯类、取代苯胺类、伯胺类化合物和苯甲酰胺类化合物。其功能与1,2-苯二胺类似。
恩替诺司他目前正在进行研究，用于治疗志愿者、乳腺癌患者、人类志愿者和健康志愿者。恩替诺司他已被研究用于治疗非小细胞肺癌和表观遗传疗法。
恩替诺司他是一种合成的苯甲酰胺衍生物，具有潜在的抗肿瘤活性。恩替诺司他可与组蛋白去乙酰化酶结合并抑制该酶，组蛋白去乙酰化酶是一种调节染色质结构和基因转录的酶。该药物似乎对人类白血病细胞具有剂量依赖性效应，包括在低药物浓度下诱导细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A (p21/CIP1/WAF1) 依赖性生长停滞和分化；显著诱导活性氧 (ROS) 生成；线粒体损伤；半胱天冬酶激活；以及在高浓度下诱导细胞凋亡。在正常细胞中，细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A的表达与细胞周期退出和分化相关。

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我们研究了组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂MS-275对人白血病和淋巴瘤细胞（U937、HL-60、K562和Jurkat细胞）以及原代急性髓系白血病原始细胞分化和凋亡的影响。MS-275在每种细胞系中均表现出剂量依赖性效应。当以低浓度（例如1 μM）给药时，MS-275表现出强效的抗增殖活性，诱导U937细胞发生p21(CIP1/WAF1)介导的生长停滞和分化标志物（CD11b）的表达。这些事件伴随着低磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白的增加和包括细胞周期蛋白D1在内的细胞周期相关蛋白的下调。然而，在高浓度（例如 5 μM）下，MS-275 能有效诱导细胞死亡，在 48 小时内导致约 70% 的细胞凋亡。与其他 HDAC 抑制剂（例如阿匹西丁）不同，MS-275 的致死作用中，外源性受体介导的通路作用甚微。然而，MS-275 能迅速（例如在 2 小时内）有效诱导活性氧 (ROS) 水平升高，随后导致线粒体膜电位 (Δψm) 丧失和细胞色素 c 胞质释放。这些事件最终激活了 caspase 级联反应，表现为聚（ADP-核糖）聚合酶、p21(CIP1/WAF1)、p27(KIP)、Bcl-2 和视网膜母细胞瘤蛋白的降解。 MS-275暴露还导致细胞周期蛋白D1以及抗凋亡蛋白Mcl-1和XIAP的表达降低。给予自由基清除剂LN-乙酰半胱氨酸可阻断MS-275介导的线粒体损伤和细胞凋亡，表明活性氧（ROS）的产生在MS-275相关的细胞死亡中起主要作用。最后，稳定表达p21(CIP1/WAF1)反义构建体的U937细胞对MS-275介导的细胞凋亡的敏感性显著高于对照组，但其分化反应受损。这些研究结果共同表明，MS-275 对人类白血病细胞具有剂量依赖性效应，即在低药物浓度下诱导 p21(CIP1/WAF1) 依赖性生长停滞和分化，而在较高浓度下则显著诱导活性氧 (ROS) 生成、线粒体损伤、caspase 激活和细胞凋亡。[2]

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研究人员研究了合成苯甲酰胺衍生物抑制组蛋白去乙酰化酶 (HDA) 的能力。本研究考察了活性最高的苯甲酰胺衍生物之一 MS-27-275 的生物学特性和抗肿瘤功效。MS-27-275 可抑制部分纯化的人类 HDA，并导致多种肿瘤细胞系中核组蛋白的过度乙酰化。其作用方式与其他 HDA 抑制剂（如丁酸钠和曲古抑菌素 A）类似； MS-27-275 可诱导 p21(WAF1/CIP1) 和凝溶胶蛋白的表达，并改变细胞周期分布，导致 S 期细胞减少，G1 期细胞增加。MS-27-275 对多种人肿瘤细胞系的体外敏感性谱与常用抗肿瘤药物 5-氟尿嘧啶不同，值得注意的是，在对 MS-27-275 敏感的细胞系中，p21(WAF1/CIP1) 的积累速度更快、程度更高。口服 MS-27-275 可显著抑制移植到裸鼠体内的 8 种肿瘤细胞系中的 7 种的生长，而这些肿瘤细胞系中的大多数对 5-氟尿嘧啶无反应。一种与 MS-27-275 结构类似但不具有 HDA 抑制活性的化合物，在细胞培养中未显示出生物学效应，在体内也未显示出治疗效果。这些结果表明，MS-27-275 通过抑制 HDA 发挥抗肿瘤作用，并可能为对传统抗肿瘤药物不敏感的癌症提供一种新的化疗策略。[3]

C21H20N4O3

376.41

376.153

C, 67.01; H, 5.36; N, 14.88; O, 12.75

209783-80-2

4261

White off white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

566.7±50.0 °C at 760 mmHg

159-160ºC

296.6±30.1 °C

0.0±1.6 mmHg at 25°C

1.672

1.46

106.34

3

5

7

28

508

0

O=C(NCC1=CC=C(C=C1)C(NC2=CC=CC=C2N)=O)OCC3=CC=CN=C3

INVTYAOGFAGBOE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H20N4O3/c22-18-5-1-2-6-19(18)25-20(26)17-9-7-15(8-10-17)13-24-21(27)28-14-16-4-3-11-23-12-16/h1-12H,13-14,22H2,(H,24,27)(H,25,26)

pyridin-3-ylmethyl N-[[4-[(2-aminophenyl)carbamoyl]phenyl]methyl]carbamate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.64 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.53 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.53 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.53 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，你可以将100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900 μL玉米油中，混合均匀。

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配方 5 中的溶解度： 2% DMSO+30% PEG 300: 10mg/mL

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配方 6 中的溶解度： 3% DMSO + 22% Castor oil + 75% Saline

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。