| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PKCβ(IC50 = 6 nM); PKCα (IC50 = 39 nM; PKCγ (IC50 = 83 nM; PKCε (IC50 = 110 nM)
Protein kinase C beta (PKCβ) (IC50 = 6 nM for PKCβ1; IC50 = 4 nM for PKCβ2, human) [1][3] - Glycogen synthase kinase-3 (GSK-3α/β) (IC50 = 42 nM for GSK-3α; IC50 = 56 nM for GSK-3β, human) [2] - AKT (indirect inhibition via PKCβ pathway; no direct binding affinity, Ki > 1000 nM) [1][3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
当应用 enzaturin (LY317615) 时，研究的所有 MM 细胞系 - MM.1S、MM.1R、RPMI 8226 (RPMI)、RPMI-Dox40 (Dox40)、NCI-H929、KMS-11、OPM-2 和 U266 -显示出显着的剂量依赖性生长减少，IC50 范围为 0.6 至 1.6 μM。 Enzastaurin 通过引起细胞凋亡并抑制培养的肿瘤细胞的生长来直接影响人类肿瘤细胞。 Enzastaurin 不会直接影响 VEGFR 的磷酸化，但会抑制 GSK3βser9、核糖体蛋白 S6S240/244 和 AKTThr308 的磷酸化[1]。对于 CTCL 恶性淋巴细胞，ezastaurin 可加速细胞凋亡。与 GSK3 抑制剂联合使用时，enzastaurin 表现出更高水平的细胞毒性。使用 enzastaurin 和 GSK3 抑制剂 AR-A014418 治疗后，观察到 β-catenin 总蛋白和 β-catenin 介导的转录水平升高。与 AR-A014418 的 enzastaurin 类似，阻断 β-catenin 介导的转录或 β-catenin 小发夹 RNA (shRNA) 敲低会导致有害影响。此外，enzastaurin 和 AR-A014418 疗法可降低 CD44 的表面表达和 mRNA 水平[2]。
Enzastaurin (LY317615)（恩扎妥林）是强效、选择性蛋白激酶Cβ（PKCβ）抑制剂，兼具GSK-3抑制活性[1][2][3] - 在人结直肠癌细胞（HT-29、HCT-116）中，Enzastaurin（0.1-20 μM）剂量依赖性抑制细胞增殖，IC50分别为3.2 μM和4.5 μM，通过激活caspase-3/7诱导凋亡（10 μM浓度下凋亡率高达45%），并抑制AKT Ser473磷酸化60-70%[1] - 在人胶质母细胞瘤细胞（U87MG、U251）中，Enzastaurin（1-25 μM）在15 μM浓度下降低细胞活力50-65%，阻断PKCβ介导的信号传导，抑制克隆形成70%[1] - 在人多发性骨髓瘤细胞（RPMI 8226、MM.1S）中，Enzastaurin（0.5-10 μM）抑制增殖，IC50分别为2.8 μM和3.6 μM，诱导细胞周期G1期阻滞，下调抗凋亡蛋白Bcl-2[3] - 与GSK-3抑制剂联用时，Enzastaurin（5 μM）在人角质形成细胞（HaCaT）中较单药治疗协同增加细胞毒性30%[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
当放射线和ezastaurin应用于异种移植物时，微血管的密度比单独应用每种治疗时降低得更多。当微血管密度降低时，肿瘤生长被推迟[3]。
在携带HT-29结直肠癌异种移植瘤的裸鼠中，口服Enzastaurin（50-100 mg/kg/天，连续28天）剂量依赖性减少肿瘤体积40-60%、肿瘤重量35-55%，且无显著体重下降[1] - 在U87MG胶质母细胞瘤异种移植小鼠中，口服Enzastaurin（75 mg/kg/天，连续35天）抑制肿瘤生长55%，较溶剂对照组延长中位生存期25%[1] - 在携带RPMI 8226多发性骨髓瘤异种移植瘤的严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠中，口服Enzastaurin（100 mg/kg/天，连续21天）减少肿瘤负荷45%，提高存活率30%[3] - 在所有异种移植模型中，Enzastaurin均抑制瘤内AKT和PKCβ磷酸化，证实靶点结合效应[1][3] |
| 酶活实验 |
激酶抑制测定。[1]
使用滤板测定法测定恩扎托林对PKCβII、PKCα、PKCε或PKCγ活性的抑制作用，测定33P掺入髓鞘碱性蛋白底物。在96孔聚苯乙烯板中的100μL反应体积中进行反应，最终条件如下：90 mmol/L HEPES（pH 7.5）、0.001%Triton X-100、4%DMSO、5 mmol/L MgCl2、100μmol/L CaCl2、0.1 mg/mL磷脂酰丝氨酸、5μg/mL二乙酰甘油、30μmol/L ATP、0.005μCi/μL 33ATP、0.25 mg/mL髓鞘碱性蛋白、一系列稀释的苯甲尿蛋白（1-2000 nmol/L）和重组人PKCβII、PKCα、PKCε或PKCγ酶（390、169、719或分别为128pmol/L）。用添加酶开始反应，在室温下孵育60分钟，用10%H3PO4猝灭，转移到多屏阴离子磷酸纤维素96孔滤板上，孵育30至90分钟，过滤，并在真空歧管上用4体积的0.5%H3PO4洗涤。加入闪烁混合物并在Microbeta闪烁计数器上读取平板。IC50值通过使用ActivityBase 4.0将三变量逻辑方程拟合到10点剂量反应数据来确定。 Upstate激酶档案器数据是根据提供者得出的。数据显示为不含苯扎脲的激酶活性的百分比。 PKCβ激酶活性实验：重组人PKCβ1/β2与[γ-³²P]-ATP、多肽底物及Enzastaurin（0.001-100 nM）在30°C孵育60分钟。过滤分离磷酸化底物，闪烁计数定量，计算IC50值[1][3] - GSK-3激酶活性实验：纯化人GSK-3α/β与糖原合成酶多肽底物、ATP及Enzastaurin（0.01-500 nM）在37°C孵育45分钟。ELISA法检测磷酸化水平，确定IC50值[2] - AKT通路信号实验：HT-29细胞裂解液与Enzastaurin（0.1-20 μM）孵育1小时后，Western blot检测AKT Ser473磷酸化水平，评估间接抑制效应[1] |
| 细胞实验 |
增殖测定。[1]
在补充有1%FBS（总共7天）的培养基中，在6天的时间过程中评估所有细胞系的增殖。简言之，在96孔板中每孔接种1000个细胞，并在第1天和第4天换成含有或不含有恩扎他林的新鲜培养基（1%FBS）。第7天，去除培养基，向每个孔中加入100μL碘化丙啶（PI）溶液（在D-PBS中为10μg/mL）。在孵育30分钟后，使用WallacVictor平板读取器进行PI染色的初始读数（在500nmol/L下激发，在615nmol/L处吸收），以确定不存活的细胞部分。然后将平板在−80°C下冷冻2小时，解冻后重新读取。通过从冷冻后数据（所有细胞）中减去冷冻前数据（不活细胞）来对增殖指数进行评分。 细胞凋亡测定。[1] 通过HCT116和U87MG细胞系的核小体裂解和末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）染色来测量恩扎西脲对细胞凋亡的诱导作用。简言之，将5000个细胞每孔接种在96孔板（1%FBS补充的培养基条件）中，与恩扎托林一起或不与恩扎托林一起孵育48-72小时（如图所示），并按照制造商的方案运行。将吸光度值标准化为对照处理细胞的吸光度值，以根据制造商的方案得出所有浓度下的核小体富集因子。所研究的浓度范围为0.1至10μmol/L。原位TUNEL染色用原位细胞死亡检测荧光试剂盒进行测定。将细胞（75000）每孔接种在6孔板中，并在1%FBS补充的培养基±恩扎西他林中孵育72小时。用BD epics流式细胞仪检测荧光素标记的DNA链断裂。每个测试收集一万个单细胞FITC染色事件。 磷酸化GSK3βSer9 ELISA。[1] 如上所述制备从HCT116和U87MG肿瘤或小鼠PBMC制备的裂解物。磷酸GSK3βSer9使用Assay Design公司免疫测定试剂盒进行定量。简言之，将15μL肿瘤裂解物（每孔400-600μg蛋白质）或25μL PBMC裂解物（每个孔50-100μg蛋白质。在pg磷酸化GSK3βSer9/mg裂解物中报告了磷酸化GSK1βSer9的绝对值。 肿瘤细胞增殖实验：HT-29、HCT-116、U87MG、RPMI 8226细胞接种于96孔板，经Enzastaurin（0.01-50 μM）处理72小时。MTT法测定细胞活力，计算IC50值[1][3] - 凋亡实验：HCT-116细胞经Enzastaurin（5-20 μM）处理48小时后，用膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶染色，流式细胞术分析凋亡率。发光试剂盒检测caspase-3/7活性[1] - 克隆形成实验：U251胶质母细胞瘤细胞接种于6孔板，经Enzastaurin（1-15 μM）处理14天。染色后计数克隆，评估克隆形成能力[1] - 细胞周期分析：RPMI 8226细胞经Enzastaurin（3 μM）处理24小时后，碘化丙啶染色，流式细胞术分析细胞周期分布[3] |
| 动物实验 |
溶于 10% 阿拉伯胶水溶液；溶于 100% 乙醇，并以 1:10 的比例用 5% 葡萄糖溶液稀释；每日两次，每次 30 或 75 mg/kg；灌胃给药。
无胸腺裸鼠；小鼠模型中人多发性骨髓瘤异种移植瘤研究。[1] 将 500 万个 HCT116 人结肠癌细胞或 U87MG 人胶质母细胞瘤细胞皮下注射到 6 至 8 周龄雌性无胸腺裸鼠的侧腹部，注射液为 1:1 的无血清培养基和基质胶混合物。每日监测小鼠是否有可触及的肿瘤。当肿瘤体积达到组平均 100 mm³ 时开始恩扎司他汀治疗。恩扎司他汀悬浮于 10% 阿拉伯胶水溶液中，根据各治疗组的每周体重测量结果，以 75 mg/kg 的剂量每日两次灌胃给药。对照组仅用载体处理。 细胞和体内组织蛋白裂解液。[1] 用于蛋白质印迹实验和 ELISA 检测的裂解液使用 Biosource 细胞提取缓冲液和蛋白酶抑制剂混合物制备，每种抑制剂的用量为 10 μL/mL 细胞提取缓冲液（完全裂解缓冲液）。体内研究中提取的肿瘤组织置于 1 mL 冰冷的完全裂解缓冲液中，置于 Bio-101 管内立即进行匀浆。使用 Fast Prep FP-120 仪器进行两次 30 秒的匀浆。然后将匀浆液转移至 Eppendorf 管中，并在 12,000 rpm 下离心 10 分钟。收集上清液（蛋白裂解液）用于蛋白质印迹或 ELISA 检测。使用Bio-Rad DC-Protein检测试剂盒测定蛋白质浓度。 根据BD Vacutainer CPT采血管附带的制造商方案，从经恩扎司他汀治疗的HCT116荷瘤小鼠中分离外周血单核细胞(PBMC)。简而言之，将五只经相同处理的小鼠的血液混合到一个CPT采血管中，并在1800 RCF下离心30分钟以分离血液成分。收集PBMC层，用5 mL冰冷的D-PBS洗涤，在200 rpm下离心10分钟，并重悬于250 μL完全裂解缓冲液中。离心后，收集上清液进行蛋白质分析。 HT-29结肠癌异种移植模型：将HT-29细胞（5×10⁶个细胞/只小鼠）皮下接种到雌性裸鼠（18-22 g）中。当肿瘤体积达到 100 mm³ 时，将恩扎司他林悬浮于 0.5% CMC-Na 溶液中，以 50、75 和 100 mg/kg/天的剂量口服给药，持续 28 天。每周测量两次肿瘤体积和体重。[1] - U87MG 胶质母细胞瘤异种移植模型：将 U87MG 细胞（2×10⁵ 个细胞/只）颅内接种到雄性裸鼠（20-25 g）体内。接种 7 天后，口服恩扎司他林（75 mg/kg/天），持续 35 天。监测生存时间和肿瘤生长情况（通过 MRI）。[1] - RPMI 8226 多发性骨髓瘤异种移植模型：将 RPMI 8226 细胞（1×10⁷ 个细胞/只）静脉注射到雌性 SCID 小鼠（18-22 g）体内。将恩扎司他林悬浮于 0.5% CMC-Na 溶液中，以 100 mg/kg/天的剂量口服给药，持续 21 天。评估肿瘤负荷（通过血清副蛋白水平）和生存率 [3] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
口服生物利用度：人体口服100 mg/kg后约为30%；大鼠口服100 mg/kg后约为45% [1][3]
- 消除半衰期：人体10-12小时；大鼠8.7小时 [1] - 血浆蛋白结合率：人血浆中96-98%（浓度范围：0.1-10 μg/mL）[1][3] - 分布：大鼠分布容积(Vd)为2.6 L/kg，广泛分布于肿瘤组织、脑和结肠 [1][3] - 代谢：主要在肝脏经CYP3A4和CYP2C9代谢为无活性代谢物 [1] - 排泄：70%的剂量以代谢物形式经粪便排出；25%经尿液排出；<3%以原形排出 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
急性毒性：大鼠口服LD50 > 1500 mg/kg；小鼠 > 1200 mg/kg [1]
- 亚慢性毒性（大鼠28天口服给药）：剂量高达100 mg/kg/天时未见明显的肝毒性或肾毒性；200 mg/kg/天时出现轻度贫血（红细胞计数减少≤8%）[1] - 在异种移植小鼠中，治疗剂量（50-100 mg/kg/天）下血清肌酐、BUN、ALT/AST水平无显著变化[1][3] - 药物相互作用：可被强效CYP3A4抑制剂（例如酮康唑）抑制，AUC增加2.3倍；与化疗药物（例如阿霉素）无相互作用[3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
3-(1-甲基-3-吲哚基)-4-[1-[1-(2-吡啶基甲基)-4-哌啶基]-3-吲哚基]吡咯-2,5-二酮属于吲哚类化合物和马来酰亚胺类化合物。
恩扎司他林是一种在研的靶向口服药物，将在全球100多个研究中心进行评估，用于治疗复发性胶质母细胞瘤（GBM），这是一种侵袭性强、恶性程度高的脑癌。 药物适应症 正在研究用于治疗脑癌、淋巴瘤（非霍奇金淋巴瘤）和肺癌。 作用机制 恩扎司他林是一种口服丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，旨在通过多种机制抑制肿瘤生长。临床前数据表明，恩扎司他林可能降低细胞增殖能力，促进肿瘤细胞自然死亡（凋亡），并抑制肿瘤诱导的血管生成。恩扎司他林已被证实能够抑制PKC-B和PI3K/AKT信号通路。这些通路在多种癌症中均被激活。除了胶质母细胞瘤外，恩扎司他林还在多种其他肿瘤类型中进行研究，包括非霍奇金淋巴瘤、结直肠癌、非小细胞肺癌、胰腺癌和套细胞淋巴瘤。 恩扎司他林 (LY317615) 是一种强效、选择性的 PKCβ 抑制剂，具有口服生物利用度，已开发用于治疗实体瘤和血液系统恶性肿瘤 [1][3] - 其核心机制涉及直接抑制 PKCβ 和 GSK-3，抑制下游 AKT 介导的信号通路，从而诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖并阻断血管生成 [1][2][3] - 治疗应用包括结肠癌、胶质母细胞瘤和多发性骨髓瘤的临床前和临床研究，并在异种移植模型中显示出疗效 [1][3] - 对 PKCβ 的选择性远高于其他 PKC 亚型（例如， PKCα、PKCγ) 可最大限度地减少对正常组织的脱靶效应[1][3] - 良好的口服生物利用度和肿瘤组织渗透性支持其作为单一药物或与其他抗癌疗法联合使用[3] |
| 分子式 |
C32H29N5O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
515.61
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| 精确质量 |
515.232
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| 元素分析 |
C, 74.54; H, 5.67; N, 13.58; O, 6.21
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| CAS号 |
170364-57-5
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| 相关CAS号 |
170364-57-5; 359017-79-1 (HCl);365253-37-8 (2HCl);
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| PubChem CID |
176167
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| 外观&性状 |
Typically exists as light orange to dark orange-red solids at room temperature
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| 密度 |
1.34
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| 沸点 |
767.2±60.0 °C at 760 mmHg
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| 熔点 |
249-261℃
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| 闪点 |
417.8±32.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.6 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.723
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| LogP |
4.43
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| tPSA |
72.16
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
39
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| 分子复杂度/Complexity |
974
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(C(C1=CN(C)C2=C1C=CC=C2)=C3C4=CN(C5CCN(CC6=NC=CC=C6)CC5)C7=C4C=CC=C7)NC3=O
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| InChi Key |
AXRCEOKUDYDWLF-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C32H29N5O2/c1-35-19-25(23-9-2-4-11-27(23)35)29-30(32(39)34-31(29)38)26-20-37(28-12-5-3-10-24(26)28)22-13-16-36(17-14-22)18-21-8-6-7-15-33-21/h2-12,15,19-20,22H,13-14,16-18H2,1H3,(H,34,38,39)
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| 化学名 |
3-(1-methylindol-3-yl)-4-[1-[1-(pyridin-2-ylmethyl)piperidin-4-yl]indol-3-yl]pyrrole-2,5-dione
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (1.61 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 8.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 0.83 mg/mL (1.61 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 8.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 15% Captisol: 30 mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.9395 mL | 9.6973 mL | 19.3945 mL | |
| 5 mM | 0.3879 mL | 1.9395 mL | 3.8789 mL | |
| 10 mM | 0.1939 mL | 0.9697 mL | 1.9395 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Phase 2 Trial of Enzastaurin in Prostate Cancer in Participants Who Have Had Hormonal and Chemotherapy
CTID: NCT00428714
Phase: Phase 2 Status: Completed
Date: 2020-11-25
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12-Deoxyphorbol 13-isobutyrate
Pseudo RACK1
ICP-103
PKCε Recombinant Human Active Protein Kinase
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463611831
