LeuRS(IC50= 0.31 μM)
"[1]. Cancer Res. 1999 Jun 1;59(11):2566-9.
链接: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10363974/
[2]. Biochem J. 2004 Jan 1;377(Pt 1):249-55.
链接: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14570592/
[2]. J Biol Chem. 2001 Jan 5;276(1):251-60.
链接: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11013232/
请找到上述文章的全文(比如从https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/ 或者出版社原文), 随后将这些文章中关于 Kenpaullone 这个药物的体内外药理/生物活性、药物代谢性质、毒性及相关实验流程按照下面的详细要求提炼出来。
一、提取信息的详细要求（请仔细阅读，完全按照下述要求来提取）：
1）一定要阅读全文，不能只看摘要；
2）提取的信息分成英文（全英文）和中文两个版本；
3）字段如果文献未描述，就不用列出来;
4) 将药物名称嵌入加粗代码, 如药物名称;
5) 来自不同文献的内容后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等”；
6）同一个字段里面如果有几种不同的内容或实验步骤描述，请在不同内容或实验步骤之间插入分隔符
；
7) IC50、Ki、EC50、给药浓度/剂量等数值信息必须准确，如果不确定，宁可不提供；
8）仅提取指定文献里包含的此药物信息，不要将其他文献的信息放进来；
8）也不要引用指定文献之外的其他文献；
9）请务必准确、实事求是和详细，不要凭空捏造和幻想。一定不要提供不存在的假数据，我要的是真实数据，有就是有，没有就没有。
二、要提取的字段及具体要求按照如下格式（请仔细阅读，完全按照下述要求来提取）：
Target: 提炼出这个药物的作用靶点/靶标，并将不同靶标的IC50、Ki、EC50等信息放在括号里面（这些数据也不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）；不同文献的靶点用
分开。
In Vitro：描述体外活性的详细实验结果（如抗增殖活性、酶/靶点活性、细胞活性、western blot, PCR、免疫组织化学、凋亡、克隆形成、作用机制等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）, 不同的体外实验结果分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。
In Vivo：描述体内活性的详细实验结果(如体内药效、作用机制等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测), 不同的体内实验结果分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。
Enzyme Assay： 关于酶（或者蛋白/受体）活性实验 或者靶点结合实验（如激酶活性、SPR、ITC、HTRF等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）的详细流程描述 (在原描述的基础上改变说法重新描述，不要只提取一两句话), 不同的实验分别描述，详细描述，不同实验之间嵌入分行代码
；另外，不要出现试剂/药物的供应商的名称； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。
Cell Assay： 关于细胞实验（如抗增殖、Cell viability/antiproliferative, western blot, PCR、免疫组织化学、凋亡、克隆形成实验等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）详细流程的描述(在原描述的基础上改变说法重新描述，不要只提取一两句话), 不同的细胞实验分别描述，详细描述，不同实验之间嵌入分行代码
；另外，不要出现试剂/药物的供应商的名称； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。
Animal Protocol: 关于动物实验(如体内药效实验、体内药代实验等)详细流程的描述(在原描述的基础上改变说法重新描述，不要只提取一两句话), 包括药物溶解配方/剂型、给药频率、途径等（数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）；不同的动物实验分别描述，详细描述，不同实验之间嵌入分行代码
；另外，不要出现试剂/药物的供应商的名称； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。
ADME/Pharmacokinetics：关于这个药物的体内外药物代谢特征（PK性质），如吸收、分布、代谢、排泄、半衰期、口服生物利用度等参数（数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测），不同的ADME性质分别描述，详细描述，不同的药代参数之间嵌入分行代码
； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。
Toxicity/Toxicokinetics：关于这个药物的体内外毒性/副作用信息，如半数致死量、肝肾毒性、药物药物相互作用、血浆蛋白结合度（protein binding）等（数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测），不同的性质分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。
Additional Info：除了上述信息之外的其他和这个药物相关的信息，如背景介绍、作用机制、疗效、适应症、FDA警示信息，不同类别信息分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。"

主要革兰氏阴性需氧和厌氧病原体以及革兰氏阳性厌氧菌对依哌硼罗 (0-32 μg/mL) 的抗菌作用敏感[1]。

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1. 厌氧菌抗菌活性：盐酸埃佩特拉硼（Epetraborole hydrochloride，GSK2251052）对35个属的916株临床厌氧菌分离株具有强效体外活性。关键属的MIC₅₀/MIC₉₀值（μg/mL）为：脆弱拟杆菌群（0.25/1）、普雷沃菌属（0.12/0.5）、卟啉单胞菌属（0.06/0.25）、梭杆菌属（0.12/0.5）、艰难梭菌（0.5/1）、产气荚膜梭菌（0.12/0.25）和消化链球菌属（0.12/0.5）。总体而言，99.3%的分离株在≤2 μg/mL浓度下敏感（CLSI厌氧菌折点）。对大多数属的活性与甲硝唑、克林霉素、哌拉西林-他唑巴坦相当或更优[1]
2. 无交叉耐药性：盐酸埃佩特拉硼（Epetraborole hydrochloride，GSK2251052）对甲硝唑耐药的脆弱拟杆菌群分离株（MIC₅₀/MIC₉₀=0.25/1 μg/mL）和克林霉素耐药的普雷沃菌属分离株（MIC₅₀/MIC₉₀=0.12/0.5 μg/mL）仍保持活性，MIC分布与敏感株无显著差异[1]
3. 体外细菌耐药诱导：将大肠杆菌（n=3）和肺炎克雷伯菌（n=3）在盐酸埃佩特拉硼（Epetraborole hydrochloride，GSK2251052）亚抑菌浓度（0.5×MIC至2×MIC）中连续传代20天，诱导出耐药性，大肠杆菌MIC升高8-64倍，肺炎克雷伯菌升高4-32倍。全基因组测序证实，leuS基因（编码LeuRS）的错义突变是主要耐药机制[2]
4. 临床分离株耐药性：在接受盐酸埃佩特拉硼（Epetraborole hydrochloride，GSK2251052）治疗的复杂性尿路感染（cUTI）患者中，104株大肠杆菌分离株中有12株（11.5%）在治疗期间产生耐药性。耐药株MIC≥8 μg/mL（敏感株≤1 μg/mL），且携带leuS突变（A431V、D405N、G412S等）。未观察到对其他抗生素类别（氟喹诺酮类、β-内酰胺类、复方新诺明）的交叉耐药性[2]
5. LeuRS活性抑制：盐酸埃佩特拉硼（Epetraborole hydrochloride，GSK2251052）通过干扰氨酰化反应（tRNA^Leu与亮氨酸的结合）特异性抑制细菌LeuRS，阻断蛋白质合成。耐药大肠杆菌菌株（携带leuS突变）的重组LeuRS显示出抑制剂结合亲和力降低，证实了靶点介导的耐药性[2]

1. 细菌LeuRS氨酰化实验：通过异源表达和纯化制备目标细菌（如大肠杆菌、脆弱拟杆菌）的重组LeuRS；构建含LeuRS、tRNA^Leu、L-亮氨酸、ATP和不同浓度盐酸埃佩特拉硼（Epetraborole hydrochloride，GSK2251052）的反应体系；37°C孵育10-30分钟；采用放射学方法（[³H]-亮氨酸掺入）或荧光法（ATP水解检测）测量亮氨酰-tRNA^Leu的生成量；计算相对于无抑制剂对照组的LeuRS活性抑制百分比[1, 2]
2. 耐药LeuRS活性实验：表达并纯化亲本（敏感）和leuS突变（耐药）大肠杆菌菌株的重组LeuRS；按上述方法进行氨酰化实验，比较盐酸埃佩特拉硼（Epetraborole hydrochloride，GSK2251052）对野生型和突变型LeuRS的抑制效力；以抑制剂浓度为横坐标、抑制百分比为纵坐标绘制曲线，计算IC₅₀值[2]

细胞系：厌氧菌分离株
浓度：0-32 μg/mL
结果：测试的每种厌氧菌分离株的 MIC50/MIC90 值分别为 2 和 4 μg/mL。

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1. 厌氧菌抗菌药敏实验（微量肉汤稀释法）：在厌氧肉汤（如含血红素、维生素K1和5%裂解马血的布鲁氏菌肉汤）中制备盐酸埃佩特拉硼（Epetraborole hydrochloride，GSK2251052）的两倍倍比稀释液（0.008-64 μg/mL）；每孔接种5×10⁵ CFU/mL的厌氧菌对数期培养物；35°C厌氧培养箱（85% N₂、10% H₂、5% CO₂）中孵育48小时；MIC定义为抑制细菌可见生长的最低抑制剂浓度；纳入质控菌株（脆弱拟杆菌ATCC 25285、艰难梭菌ATCC 700057）和对照抗生素（甲硝唑、克林霉素）进行方法验证[1]
2. 耐药诱导实验：将亲本细菌菌株（大肠杆菌、肺炎克雷伯菌）在穆勒-欣顿肉汤（MHB）中37°C振荡培养；每日将细菌传代至含盐酸埃佩特拉硼（Epetraborole hydrochloride，GSK2251052）亚抑菌浓度的新鲜MHB中（起始浓度0.5×MIC，根据生长情况调整至1×MIC或2×MIC）；连续传代20次后，微量肉汤稀释法测定进化菌株的MIC；通过在含抑制剂琼脂（4×MIC）上接种验证耐药性，并对leuS基因测序以鉴定突变[2]
3. 临床分离株药敏检测：从接受盐酸埃佩特拉硼（Epetraborole hydrochloride，GSK2251052）治疗的cUTI患者尿液样本中分离大肠杆菌；麦康凯琼脂培养分离株并通过生化试验鉴定；按上述微量肉汤稀释法测定MIC，将分离株分为敏感（MIC ≤1 μg/mL）或耐药（MIC ≥8 μg/mL）；提取耐药株基因组DNA，测序leuS基因以检测突变[2]

[1]. Comparative in vitro activities of GSK2251052, a novel boron-containing leucyl-tRNA synthetase inhibitor, against 916 anaerobic organisms. Antimicrob Agents Chemother. 2013 May;57(5):2401-4.

[2]. Bacterial resistance to leucyl-tRNA synthetase inhibitor GSK2251052 develops during treatment of complicated urinary tract infections. Antimicrob Agents Chemother. 2015 Jan;59(1):289-98.

[3]. Sutcliffe JA. Antibiotics in development targeting protein synthesis. Ann N Y Acad Sci. 2011 Dec;1241:122-52.

1. 化学类别和作用机制：盐酸依哌硼罗（GSK2251052）是一种新型含硼抗生素，靶向细菌亮氨酸合成酶（LeuRS），LeuRS是蛋白质合成的关键酶。硼基团与LeuRS的活性位点相互作用，干扰tRNA^Leu的氨酰化，而tRNA^Leu的氨酰化对于细菌的生长和存活至关重要[1, 3]。2. 治疗潜力：该药物被开发用于治疗厌氧菌引起的感染，包括腹腔内感染、皮肤和软组织感染以及呼吸道感染。其对临床相关厌氧菌的强效活性以及与现有抗生素无交叉耐药性，使其成为治疗多重耐药（MDR）厌氧菌感染的理想候选药物[1]
3. 耐药性问题：对盐酸依培硼罗 (GSK2251052)的耐药性主要源于leuS基因的错义突变，这些突变会改变LeuRS活性位点并降低抑制剂的结合。复杂性尿路感染（cUTI）治疗过程中耐药性的出现凸显了合理用药和联合治疗以最大限度减少耐药性发展的必要性[2]
4. 在抗生素研发中的地位：盐酸依培硼罗 (GSK2251052)属于一类新型蛋白质合成抑制剂，靶向氨酰tRNA合成酶，这是一个已验证但尚未充分利用的靶点类别。它满足了对新型抗MDR厌氧病原体抗生素的迫切需求[3]

C11H17BCLNO4

273.5210

273.093

C, 48.30; H, 6.26; B, 3.95; Cl, 12.96; N, 5.12; O, 23.40

1234563-16-6

1234563-16-6 (HCl);1093643-37-8;1234563-15-5 (R-mandelate);

52918389

White to off-white solid powder

84.9

4

5

5

18

244

1

Cl[H].O1B(C2C(=C([H])C([H])=C([H])C=2[C@@]1([H])C([H])([H])N([H])[H])OC([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])O[H])O[H]

DADYQGIQOBJGIW-HNCPQSOCSA-N

InChI=1S/C11H16BNO4.ClH/c13-7-10-8-3-1-4-9(16-6-2-5-14)11(8)12(15)17-10;/h1,3-4,10,14-15H,2,5-7,13H2;1H/t10-;/m1./s1

(S)-3-(Aminomethyl)-7-(3-hydroxypropoxy)-1-hydroxy-1,3-dihydro-2,1-benzoxaborole hydrochloride

Epetraborole hydrochloride; GSK-2251052; GSK 2251052; GSK2251052; AN3365; AN 3365; AN-3365; GSK-052; GSK 052; GSK052;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~200 mg/mL (~731.21 mM)
H2O : ≥ 28 mg/mL (~102.37 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.14 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.14 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 5% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80+50% Saline: ≥ 2.5 mg/mL (9.14 mM)

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配方 4 中的溶解度: 100 mg/mL (365.60 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。