| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Dystrophin (DMD) pre-mRNA. Eteplirsen binds to a specific region within exon 51 of the dystrophin pre-mRNA. By sterically blocking the spliceosome's access to this exon, it causes the splicing machinery to skip over exon 51, joining exon 50 to exon 52. This restores the disrupted open reading frame (ORF) in patients with certain deletions in the DMD gene (e.g., deletion of exon 50 or exon 45-50). The mechanism produces a shortened, internally deleted but functional dystrophin protein, converting a severe Duchenne phenotype to a milder Becker-like phenotype. The restoration of dystrophin synthesis is the therapeutic effect.
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| 体外研究 (In Vitro) |
通过专门跳过缺陷基因变体中的第 51 个外显子，eteplirsen 恢复了杜氏肌营养不良症 (DMD) 的翻译阅读框，并随后增加了肌营养不良蛋白的产生 [1]。
作为一种反义寡核苷酸，eteplirsen 不用于无细胞酶抑制试验。其活性在无细胞体系中通过测定其与互补 RNA 靶序列的杂交能力来评估。熔解温度 (Tm) 分析是通过将 PMO 与对应于外显子 51 靶位点的合成 RNA 寡核苷酸混合来进行的。混合物加热（25-95℃），并在 260 nm 处监测吸光度以确定 Tm 值，Tm 值是结合亲和力的量度。eteplirsen 形成稳定的双链体（Tm > 60℃）。由于 PMO 不募集 RNase H，而是通过空间位阻发挥作用，因此 RNase H 切割试验不适用。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在基于细胞的检测中，eteplirsen 用于 DMD 患者来源的成肌细胞，这些细胞具有可发生外显子 51 跳跃的缺失突变（例如，外显子 50 缺失）。细胞在分化培养基中培养以形成肌管。将 Eteplirsen 以 0.1-100 uM 的浓度添加到培养基中（自由摄取），持续 48-96 小时。使用位于外显子 49 和 53 的引物，通过 RT-PCR 检测外显子跳跃，并通过毛细管电泳分离产物。定量外显子 51 跳跃的百分比。使用单克隆抗体（例如，DYS-1）通过蛋白质印迹法检测肌营养不良蛋白的恢复情况，并通过免疫荧光染色确认其膜定位。Eteplirsen 可将肌营养不良蛋白的表达恢复到正常水平的一小部分（通常为 0.5-5%）。外显子 51 跳跃的 EC50 值在低微摩尔范围内。
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| 酶活实验 |
可使用微基因构建体在无细胞剪接分析中评估 Eteplirsen 的活性。构建包含人类 DMD 基因第 50-52 外显子及其侧翼内含子的质粒。在体外转录该微基因以产生前体 mRNA。将前体 mRNA 与添加了 ATP 的核提取物（例如，来自 HeLa 细胞的核提取物）孵育。向反应中加入 Eteplirsen（0.1-10 uM）。2-4 小时后，提取 RNA，并使用覆盖第 50-52 外显子的引物进行 RT-PCR。将产物进行凝胶电泳，以观察跳跃（缺失第 51 外显子）产物与全长产物。这证实了反义寡核苷酸直接抑制剪接体的组装。
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| 细胞实验 |
为研究细胞活性，我们使用来自DMD患者的原代人成肌细胞，这些患者携带可发生外显子51跳跃的突变（例如，外显子50缺失）。将细胞在分化培养基（DMEM + 2%马血清）中培养5-7天以形成肌管。在分化的最后48-72小时内，加入浓度为0.1-100 uM的Eteplirsen。使用Trizol试剂提取RNA。通过嵌套RT-PCR评估外显子跳跃，首先进行PCR扩增（外显子49和53），然后进行二次PCR扩增（使用荧光标记引物）。通过毛细管电泳分离PCR产物。根据峰面积计算跳跃百分比。使用DYS2抗体通过Western blot定量肌营养不良蛋白，并以α-辅肌动蛋白进行标准化。对肌管培养物进行免疫荧光染色以观察肌膜肌营养不良蛋白。蛋白质的检测限通常在正常值的 1-2% 左右。
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| 动物实验 |
在缺乏第52外显子的mdx52小鼠模型（部分模型）或hDMD转基因小鼠模型中评估了eteplirsen的体内疗效。小鼠接受eteplirsen治疗，剂量为10-100 mg/kg，每周或每周两次，通过静脉（IV）或皮下（SC）注射给药，持续4-12周。主要终点是骨骼肌（股四头肌、膈肌、心脏）中肌营养不良蛋白的恢复情况，通过Western blot和免疫荧光法进行检测。功能测试包括握力测试和跑步机测试。血清肌酸激酶（CK）水平作为肌肉损伤的生物标志物进行检测。肌肉切片的组织学分析包括H&E染色，以评估中心核和纤维化情况。研究表明，在动物模型中，eteplirsen可显著提高肌营养不良蛋白的表达水平（达到正常水平的1-5%）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
在人体中，依特普利生（Eteplirsen）通过静脉注射给药。在动物临床前药代动力学研究中，静脉或皮下注射依特普利生后，血浆半衰期较短（数小时），但在肌肉中的滞留时间较长（数天）。它主要分布于肾脏、肝脏和肌肉。该化合物通过内吞作用和溶酶体降解清除。它不经CYP酶代谢，因此药物相互作用极少。主要排泄途径是尿液。在人体药代动力学研究中，依特普利生（例如，每周静脉注射30 mg/kg）显示出线性药代动力学特征。达峰时间（Tmax）出现在输注结束时，血浆消除半衰期为2-4小时。肌肉半衰期则长得多。由于其高分子量和亲水性，口服吸收受到限制。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在临床前毒理学研究中，eteplirsen 在临床相关剂量下总体耐受性良好。动物实验中最常见的不良反应为注射部位反应、轻度至中度肾小球肾炎以及高剂量下肾小管空泡化，这些不良反应均可逆。未观察到明显的肝毒性、心脏毒性或中枢神经系统毒性。在人体临床试验（II期研究）中，最常见的不良事件为呕吐、发热、鼻咽炎和咳嗽。曾观察到短暂性蛋白尿。未报告严重药物相关不良事件或死亡病例。该药物不具有遗传毒性。2016年，FDA基于替代终点（肌营养不良蛋白生成增加）以颇具争议的加速审批方式批准了eteplirsen上市。目前正在监测其长期安全性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Eteplirsen（Exondys 51）是美国首个获得FDA批准用于治疗杜氏肌营养不良症（DMD）的药物（2016年获批）。它由Sarepta Therapeutics公司研发。该药物获批用于治疗经确诊携带肌营养不良蛋白基因突变且适合进行51号外显子跳跃治疗的DMD患者（约占DMD患者的13%）。该药物以30 mg/kg的剂量每周静脉输注给药。CAS号为1173755-55-9。分子量约为5,000-6,000 Da。其序列为：5'-CCTCCGGTTCTGAAGGTGTTC-3'。用于研究的eteplirsen以冻干粉末或溶液的形式提供。该化合物不可用于人体研究。它是一种PMO反义寡核苷酸。
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| 精确质量 |
10300.59
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|---|---|
| CAS号 |
1173755-55-9
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~4.85 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 33.33 mg/mL (3.23 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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