| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
AMPK α1β1γ1 (Kd = 0.06 μM); AMPK α2β1γ1 (Kd = 0.06 μM); AMPK α1β2γ1 (Kd = 0.51 μM)
AMP-activated protein kinase (AMPK) [1] AMPK [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
EX229 可激活培养的大鼠肱骨上髁肌中的 AMPK，并且用 EX229 孵育大鼠骨骼肌可增加葡萄糖摄取。EX229 刺激骨骼肌葡萄糖摄取，但这种刺激依赖于 AMPK，而不依赖于 PI3K/PKB。在 L6 肌管细胞中，EX229 可促进脂肪酸氧化和葡萄糖摄取[1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在离体大鼠肱骨内上肌中，用 EX-229（100 μM，90 分钟）处理可剂量依赖性地增加 AMPK Thr172 的磷酸化水平，在 50 μM 时达到显著水平；ACC Ser218 的磷酸化水平在 10 μM 时达到显著水平。[1]
用 100 μM EX-229 孵育可增加大鼠肌肉中 AMPK α1、α2、β1 和 β2 亚基复合物的活性，其中 α1 和 β2 亚基的活性达到与收缩诱导的水平无显著差异的水平。[1] 在大鼠肌肉中，100 μM EX-229 可使葡萄糖摄取量增加约 2 倍，并剂量依赖性地增加 TBC1D1 Ser237 的磷酸化水平（在 50 μM 时达到显著水平）。 [1]在L6肌管细胞中，EX-229（0.5-1 μM）呈剂量依赖性地增加脂肪酸氧化（0.5 μM时显著）和葡萄糖摄取（0.5-1 μM时约增加1.5倍）。[1]在小鼠趾长伸肌（EDL）和比目鱼肌中，EX-229（100 μM）使AMPK活性增加2倍以上，葡萄糖摄取增加约2倍。[1]在AMPK α1/α2双敲除肌管细胞中，EX-229诱导的葡萄糖摄取增加和ACC磷酸化作用完全消失，表明其作用依赖于AMPK。 [1] 在饥饿（24 小时）且糖原含量降低的大鼠肌肉中，与喂食大鼠相比，EX-229 (100 μM) 可诱导更高的 AMPK 活性和更大的葡萄糖摄取。[1] EX-229 引起的葡萄糖摄取增加不受 PI3K 抑制剂渥曼青霉素 (1 μM) 的抑制。[1] EX-229 (100 μM) 不改变静息大鼠肌肉中的嘌呤核苷酸（ATP、ADP、AMP）水平。[1] EX-229 (10-100 μM) 可降低电刺激大鼠肌肉中 AMP、腺苷、肌苷以及 AMP/ATP 和 ADP/ATP 比值的升高。 [1] EX-229 (25-100 μM) 呈剂量依赖性地增加 Raptor Ser792 的磷酸化水平，并降低 4E-BP1 Thr37/Thr46 的磷酸化水平。[1] EX-229 (100 μM) 导致大鼠肌肉蛋白质合成率略微（<20%）但显著降低。[1] 在 HEK293T 细胞中，EX-229（化合物 991）以 50 μM 的浓度作用 60 分钟，可增加 Myc-Rabep1 Ser407 位点的磷酸化水平，该磷酸化水平通过 AMPK 底物基序抗体检测。 [2] 在原代小鼠肝细胞中，浓度为 10、25 和 50 μM 的 EX-229 (991) 处理 60 分钟可诱导内源性 STIM1 和 STIM2 发生剂量依赖性的迁移率变化，同时伴随 Raptor 和 ACC 的 AMPK 依赖性磷酸化；这些效应在 AMPK 双敲除 (DKO) 肝细胞中消失。[2] 在小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 中，浓度为 50 μM 的 EX-229 (991) 处理 1 小时可诱导 STIM1 Ser521 位点的磷酸化，该磷酸化在 Ser521Ala 突变体或 AMPK DKO MEF 中消失。[2] |
| 酶活实验 |
大鼠肱骨外上肌与EX-229（100 μM，孵育90分钟）孵育后，AMPK活性和葡萄糖摄取均增加。实验采用喂食或禁食24小时的大鼠肌肉。葡萄糖摄取通过在孵育的最后30分钟加入2-脱氧-D-[1-3H]葡萄糖和D-[1-14C]甘露醇进行测定。[1]
小鼠趾长伸肌和比目鱼肌与EX-229（100 μM，孵育60分钟）孵育后，AMPK活性和葡萄糖摄取（额外孵育20分钟）均增加。[1] 在L6肌管中，脂肪酸氧化通过与EX-229（0.05-1 μM）孵育4小时，并加入[9,10-3H]棕榈酸进行测定。在用 EX-229 (0.05-1 μM) 预孵育 2 小时后，使用 2-脱氧-D-[1-3H]葡萄糖在 10 分钟内测定葡萄糖摄取量。[1] 在 AMPK α1/α2 双敲除肌管细胞中，EX-229 (0.5-1 μM，孵育 2 小时) 未能增加葡萄糖摄取，证实了其对 AMPK 的依赖性。[1] 在 HEK293T 细胞中，使用 50 μM 的 EX-229 (991) 处理 60 分钟，以检测转染 Myc-Rabep1 WT 或 S407A 的细胞；进行 Myc 免疫沉淀，并用抗 AMPK pMOTIF 抗体进行检测。 [2] 在 AMPK 野生型 (WT) 和双敲除 (DKO) 小鼠的原代肝细胞中，使用浓度为 0、10、25 和 50 μM 的 EX-229 (MK-991) 处理 60 分钟；对细胞裂解液进行免疫印迹分析，检测 p-AMPK、p-ACC 和 STIM1/STIM2 的迁移率变化。[2] 在稳定表达空载体、flag-STIM1-WT 或 flag-STIM1-Ser521Ala 的 MEF 细胞（WT 或 AMPK DKO）中，用载体、50 μM EX-229 (MK-991) 或 2 mM 苯乙双胍处理 1 小时；对 flag 免疫沉淀物进行免疫印迹分析，检测抗 p-STIM1 Ser521 抗体。[2] |
| 细胞实验 |
将载体或 50 μM 991 应用于转染了 Myc-Rabep1 WT 或 Ser407Ala 的细胞，孵育 60 分钟。
分离肌肉孵育：将大鼠肱三头肌（110-130 g 雄性 Wistar 大鼠）置于含 0.1-0.2% DMSO（载体）或 EX-229（0.5-100 μM）的 Krebs-Henseleit 碳酸氢盐缓冲液中，于 30°C 孵育 90 分钟。为诱导肌肉收缩，施加电刺激（每 2 秒一次，每次 200 ms，频率 100 Hz，持续 30 分钟）。为诱导葡萄糖摄取，加入 2-脱氧-D-[1-3H]葡萄糖（0.25 μCi/ml）和 D-[1-14C]甘露醇（0.1 μCi/ml）。肌肉组织经吸干水分后，置于液氮中冷冻。[1] 小鼠肌肉孵育：将小鼠趾长伸肌（EDL）和比目鱼肌（3-4月龄C57/B16小鼠）分别与0.1% DMSO、100 μM EX-229、300 μM A769662或2 mM AICAR孵育60分钟。随后继续孵育20分钟，测定葡萄糖摄取量。[1] L6肌管脂肪酸氧化：将分化的L6肌管在低糖DMEM培养基中饥饿培养2小时，然后在含有2 mM丙酮酸和0.1 mM [9,10-3H]棕榈酸（2 μCi/孔）的无糖DMEM培养基中，分别与EX-229或AICAR孵育4小时。收集³H₂O。 [1] L6肌管葡萄糖摄取：将过夜血清饥饿的L6肌管与EX-229（0.05-1 μM）、2 mM AICAR或1 μM胰岛素孵育2小时，然后加入2-脱氧-D-[1-3H]葡萄糖（0.5 μCi/孔），室温孵育10分钟。[1] AMPK双敲除肌管：将对照组或AMPK α1/α2双敲除肌管血清饥饿4小时，然后与EX-229（0.5-1 μM）、2 mM AICAR或1 μM胰岛素孵育2小时。葡萄糖摄取量按上述方法测定。 [1] HEK293T细胞处理：将细胞转染Myc-Rabep1 WT或S407A突变体，然后用载体或50 μM EX-229 (991)处理60分钟。进行Myc免疫沉淀。[2] 原代肝细胞处理：将AMPK WT或DKO小鼠的原代肝细胞用剂量反应曲线的EX-229 (991)（0、10、25、50 μM）处理60分钟，或用2 mM苯乙双胍处理。[2] MEF细胞处理：将MEF细胞（WT或AMPK DKO）用载体、50 μM EX-229 (991)或2 mM苯乙双胍处理1小时。进行Flag免疫沉淀。[2] |
| 动物实验 |
对于大鼠肌肉：选用雄性Wistar大鼠（110-130 g）。为降低肌肉糖原含量，大鼠禁食24小时。按照“细胞实验”和“动物实验方案”部分所述，解剖并离体培养肱二头肌（epitrochlearis）。本研究未报告对活体动物进行EX-229体内给药的情况。[1]
对于小鼠肌肉：选用雄性C57/B16小鼠（3-4月龄）。按照所述方法解剖并离体培养趾长伸肌（EDL）和比目鱼肌（soleus）。本研究未报告对活体动物进行EX-229体内给药的情况。 [1] 对于原代肝细胞：将 AMPKα1fl/flα2fl/fl 小鼠（± Albumin-CreERT2）用他莫昔芬（隔日 1 mg，共 3 次注射）处理，以构建 AMPK 双敲除 (DKO) 小鼠。约 2 周后分离原代肝细胞。在体外用 EX-229 (991) 处理细胞。本研究未报告对活体动物进行 EX-229 体内给药的情况。[2] 对于 MEF：使用来自野生型或 AMPKα1/α2 DKO 小鼠的小鼠胚胎成纤维细胞。未报告对动物进行 EX-229 给药的情况。[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
AMP激活蛋白激酶激活剂
EX-229是一种环状苯并咪唑衍生物，化学名称为5-({6-氯-5-(1-甲基吲哚-5-基)-1H-苯并咪唑-2-基}氧基)-2-甲基苯甲酸。它是一种直接的AMPK激活剂，结合于激酶结构域N端叶与β亚基糖原结合模块之间的界面。它通过变构作用和保护α亚基Thr172位点免于去磷酸化来激活AMPK。EX-229激活纯化AMPK的效力比A769662高5-10倍。 [1] EX-229（也称为化合物 991）被用作工具化合物，以验证 AMPK 依赖的 STIM1/STIM2 和 Rabep1 的磷酸化。它直接激活 AMPK，而不会引起细胞 ATP/AMP 水平的变化。[2] |
| 分子式 |
C24H18CLN3O3
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|---|---|---|
| 分子量 |
431.8710
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| 精确质量 |
431.103
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| 元素分析 |
C, 66.75; H, 4.20; Cl, 8.21; N, 9.73; O, 11.11
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| CAS号 |
1219739-36-2
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
45256693
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| 外观&性状 |
Off-white to pink solid powder
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| LogP |
5.6
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| tPSA |
80.1
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
666
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=C(C=C(C=C1)OC2=NC3=C(N2)C=C(C(=C3)C4=CC5=C(C=C4)N(C=C5)C)Cl)C(=O)O
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| InChi Key |
FHWSAZXFPUMKFL-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H18ClN3O3/c1-13-3-5-16(10-17(13)23(29)30)31-24-26-20-11-18(19(25)12-21(20)27-24)14-4-6-22-15(9-14)7-8-28(22)2/h3-12H,1-2H3,(H,26,27)(H,29,30)
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.3 mg/mL (3.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 13.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.3 mg/mL (3.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 13.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.3 mg/mL (3.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3155 mL | 11.5776 mL | 23.1551 mL | |
| 5 mM | 0.4631 mL | 2.3155 mL | 4.6310 mL | |
| 10 mM | 0.2316 mL | 1.1578 mL | 2.3155 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Effect of the small-molecule AMPK activator 991 on activity of a panel of 139 protein kinases.Am J Physiol Endocrinol Metab.2016 Oct 1;311(4):E706-E719. |
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991 treatment enhances AMPK activity induced by 5-aminoimidazole-4-carboxamide riboside (AICAR) or C13 in hepatocytes.Am J Physiol Endocrinol Metab.2016 Oct 1;311(4):E706-E719. |
991 activator binding to AMPK.Nat Commun.2013;4:3017. doi: 10.1038/ncomms4017. |
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