| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
AMPK α1β1γ1 (Kd = 0.06 μM); AMPK α2β1γ1 (Kd = 0.06 μM); AMPK α1β2γ1 (Kd = 0.51 μM)
AMP-activated protein kinase (AMPK) [1] AMPK [2] EX-229 targets AMP-activated protein kinase (AMPK), a key cellular energy sensor that regulates metabolism. It binds to AMPK with Kds of 0.06 μM for α1β1γ1, 0.06 μM for α2β1γ1, and 0.51 μM for α1β2γ1. It acts as an allosteric activator, increasing AMPK activity of both AMPKγ1- and AMPKγ3-containing complexes. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
EX229 可激活培养的大鼠肱骨上髁肌中的 AMPK，且用 EX229 孵育大鼠骨骼肌可增加葡萄糖摄取。EX229 刺激骨骼肌葡萄糖摄取，但这种刺激依赖于 AMPK，而不依赖于 PI3K/PKB。在 L6 肌管细胞中，EX229 可促进脂肪酸氧化和葡萄糖摄取[1]。体外实验表明，EX-229 是一种强效的 AMPK 激活剂。它以剂量依赖的方式增加 AMPK 活性。它以不依赖于渥曼青霉素的方式诱导 AMPK 激活和葡萄糖摄取。它可增加 L6 肌管细胞中的脂肪酸氧化。其效力比其他 AMPK 激活剂高 5-10 倍。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在离体大鼠肱骨内上肌中，用 EX-229（100 μM，90 分钟）处理可剂量依赖性地增加 AMPK Thr172 的磷酸化水平，在 50 μM 时达到显著水平；ACC Ser218 的磷酸化水平在 10 μM 时达到显著水平。[1]
用 100 μM EX-229 孵育可增加大鼠肌肉中 AMPK α1、α2、β1 和 β2 亚基复合物的活性，其中 α1 和 β2 亚基的活性达到与收缩诱导的水平无显著差异的水平。[1] 在大鼠肌肉中，100 μM EX-229 可使葡萄糖摄取量增加约 2 倍，并剂量依赖性地增加 TBC1D1 Ser237 的磷酸化水平（在 50 μM 时达到显著水平）。 [1]在L6肌管细胞中，EX-229（0.5-1 μM）呈剂量依赖性地增加脂肪酸氧化（0.5 μM时显著）和葡萄糖摄取（0.5-1 μM时约增加1.5倍）。[1]在小鼠趾长伸肌（EDL）和比目鱼肌中，EX-229（100 μM）使AMPK活性增加2倍以上，葡萄糖摄取增加约2倍。[1]在AMPK α1/α2双敲除肌管细胞中，EX-229诱导的葡萄糖摄取增加和ACC磷酸化作用完全消失，表明其作用依赖于AMPK。 [1] 在饥饿（24 小时）且糖原含量降低的大鼠肌肉中，与喂食大鼠相比，EX-229 (100 μM) 可诱导更高的 AMPK 活性和更大的葡萄糖摄取。[1] EX-229 引起的葡萄糖摄取增加不受 PI3K 抑制剂渥曼青霉素 (1 μM) 的抑制。[1] EX-229 (100 μM) 不改变静息大鼠肌肉中的嘌呤核苷酸（ATP、ADP、AMP）水平。[1] EX-229 (10-100 μM) 可降低电刺激大鼠肌肉中 AMP、腺苷、肌苷以及 AMP/ATP 和 ADP/ATP 比值的升高。 [1] EX-229 (25-100 μM) 呈剂量依赖性地增加 Raptor Ser792 的磷酸化水平，并降低 4E-BP1 Thr37/Thr46 的磷酸化水平。[1] EX-229 (100 μM) 导致大鼠肌肉蛋白质合成率略微（<20%）但显著降低。[1] 在 HEK293T 细胞中，EX-229（化合物 991）以 50 μM 的浓度作用 60 分钟，可增加 Myc-Rabep1 Ser407 位点的磷酸化水平，该磷酸化水平通过 AMPK 底物基序抗体检测。 [2] 在原代小鼠肝细胞中，浓度为 10、25 和 50 μM 的 EX-229 (991) 处理 60 分钟后，可诱导内源性 STIM1 和 STIM2 的迁移率发生剂量依赖性变化，同时伴随 Raptor 和 ACC 的 AMPK 依赖性磷酸化；这些效应在 AMPK 双敲除 (DKO) 肝细胞中消失。[2] 在小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 中，浓度为 50 μM 的 EX-229 (991) 处理 1 小时后，可诱导 STIM1 Ser521 位点的磷酸化，而这种磷酸化在 Ser521Ala 突变体或 AMPK DKO MEF 中消失。[2] 在体内，EX-229 具有调节 AMPK 介导的代谢通路的能力。当浓度为 100 μM 时，它可激活 AMPK 并增加离体大鼠肱骨内上髁肌的葡萄糖摄取。然而，现有文献中并没有详细列出动物模型中的具体体内疗效数据。 |
| 酶活实验 |
大鼠肱骨外上肌与EX-229（100 μM，孵育90分钟）孵育后，AMPK活性和葡萄糖摄取均增加。实验采用喂食或禁食24小时的大鼠肌肉。葡萄糖摄取通过在孵育的最后30分钟加入2-脱氧-D-[1-3H]葡萄糖和D-[1-14C]甘露醇进行测定。[1]
小鼠趾长伸肌和比目鱼肌与EX-229（100 μM，孵育60分钟）孵育后，AMPK活性和葡萄糖摄取（额外孵育20分钟）均增加。[1] 在L6肌管中，脂肪酸氧化通过与EX-229（0.05-1 μM）孵育4小时，并加入[9,10-3H]棕榈酸进行测定。在用 EX-229 (0.05-1 μM) 预孵育 2 小时后，使用 2-脱氧-D-[1-3H]葡萄糖在 10 分钟内测定葡萄糖摄取量。[1] 在 AMPK α1/α2 双敲除肌管细胞中，EX-229 (0.5-1 μM，孵育 2 小时) 未能增加葡萄糖摄取，证实了其对 AMPK 的依赖性。[1] 在 HEK293T 细胞中，使用 50 μM 的 EX-229 (991) 处理 60 分钟，以检测转染 Myc-Rabep1 WT 或 S407A 的细胞；进行 Myc 免疫沉淀，并用抗 AMPK pMOTIF 抗体进行检测。 [2] 在 AMPK 野生型 (WT) 和双敲除 (DKO) 小鼠的原代肝细胞中，使用浓度为 0、10、25 和 50 μM 的 EX-229 (MK-991) 处理 60 分钟；对细胞裂解液进行免疫印迹分析，检测 p-AMPK、p-ACC 和 STIM1/STIM2 的迁移率变化。[2] 在稳定表达空载体、flag-STIM1-WT 或 flag-STIM1-Ser521Ala 的 MEF 细胞（WT 或 AMPK DKO）中，用载体、50 μM EX-229 (MK-991) 或 2 mM 苯乙双胍处理 1 小时；对 flag 免疫沉淀物进行抗 p-STIM1 Ser521 抗体印迹分析。[2] EX-229 的体外 AMPK 激活实验使用纯化的重组 AMPK 复合物进行。将酶与ATP和肽底物在不同浓度的EX-229存在下孵育。通过检测底物的磷酸化来测定AMPK活性，磷酸化可通过基于发光或荧光的检测方法进行。EC₅₀值由剂量反应曲线计算得出。 |
| 细胞实验 |
将载体或 50 μM 991 应用于转染了 Myc-Rabep1 WT 或 Ser407Ala 的细胞，孵育 60 分钟。
分离肌肉孵育：将大鼠肱三头肌（110-130 g 雄性 Wistar 大鼠）置于含 0.1-0.2% DMSO（载体）或 EX-229（0.5-100 μM）的 Krebs-Henseleit 碳酸氢盐缓冲液中，于 30°C 孵育 90 分钟。为诱导肌肉收缩，施加电刺激（每 2 秒一次，每次 200 ms，频率 100 Hz，持续 30 分钟）。为诱导葡萄糖摄取，加入 2-脱氧-D-[1-3H]葡萄糖（0.25 μCi/ml）和 D-[1-14C]甘露醇（0.1 μCi/ml）。肌肉组织经吸干水分后，置于液氮中冷冻。[1] 小鼠肌肉孵育：将小鼠趾长伸肌（EDL）和比目鱼肌（3-4月龄C57/B16小鼠）分别与0.1% DMSO、100 μM EX-229、300 μM A769662或2 mM AICAR孵育60分钟。随后继续孵育20分钟，测定葡萄糖摄取量。[1] L6肌管脂肪酸氧化：将分化的L6肌管在低糖DMEM培养基中饥饿培养2小时，然后在含有2 mM丙酮酸和0.1 mM [9,10-3H]棕榈酸（2 μCi/孔）的无糖DMEM培养基中，分别与EX-229或AICAR孵育4小时。收集³H₂O。 [1] L6肌管葡萄糖摄取：将过夜血清饥饿的L6肌管与EX-229（0.05-1 μM）、2 mM AICAR或1 μM胰岛素孵育2小时，然后加入2-脱氧-D-[1-3H]葡萄糖（0.5 μCi/孔），室温孵育10分钟。[1] AMPK双敲除肌管：将对照组或AMPK α1/α2双敲除肌管血清饥饿4小时，然后与EX-229（0.5-1 μM）、2 mM AICAR或1 μM胰岛素孵育2小时。葡萄糖摄取量按上述方法测定。 [1] HEK293T细胞处理：将细胞转染Myc-Rabep1 WT或S407A突变体，然后用载体或50 μM EX-229 (991)处理60分钟。进行Myc免疫沉淀。[2] 原代肝细胞处理：将AMPK WT或DKO小鼠的原代肝细胞用剂量反应曲线的EX-229 (991)（0、10、25、50 μM）处理60分钟，或用2 mM苯乙双胍处理。[2] MEF细胞处理：将MEF细胞（WT或AMPK DKO）用载体、50 μM EX-229 (991)或2 mM苯乙双胍处理1小时。进行Flag免疫沉淀。 [2] EX-229 的体外细胞活性检测采用 L6 肌管细胞等细胞系进行。将细胞培养于适宜的培养基中，并用不同浓度的 EX-229 处理。通过蛋白质印迹法检测 AMPK 及其下游靶点 ACC 的磷酸化水平来评估 AMPK 的激活情况。葡萄糖摄取量通过放射性标记的 2-脱氧葡萄糖进行测定。脂肪酸氧化通过放射性标记的棕榈酸的氧化进行测定。 |
| 动物实验 |
对于大鼠肌肉：选用雄性Wistar大鼠（110-130 g）。为降低肌肉糖原含量，大鼠禁食24小时。按照“细胞实验”和“动物实验方案”部分所述，解剖并离体培养肱二头肌（epitrochlearis）。本研究未报告对活体动物进行EX-229体内给药的情况。[1]
对于小鼠肌肉：选用雄性C57/B16小鼠（3-4月龄）。按照所述方法解剖并离体培养趾长伸肌（EDL）和比目鱼肌（soleus）。本研究未报告对活体动物进行EX-229体内给药的情况。 [1] 对于原代肝细胞：将AMPKα1fl/flα2fl/fl小鼠（±Albumin-CreERT2）用他莫昔芬（隔日1 mg，共3次注射）处理，以构建AMPK双敲除（DKO）小鼠。约2周后分离原代肝细胞。在体外用EX-229（991）处理细胞。本研究未报告EX-229在活体动物体内给药的情况。[2] 对于MEF：使用来自野生型或AMPKα1/α2 DKO小鼠的小鼠胚胎成纤维细胞。未报告EX-229在动物体内给药的情况。[2] EX-229的体内动物研究通常采用代谢性疾病（例如肥胖或糖尿病）的啮齿动物模型。该化合物通过口服或腹腔注射给药。测量代谢参数，例如血糖、胰岛素和血脂水平。在肌肉和肝脏等组织中评估 AMPK 激活情况。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
现有文献并未详细描述EX-229的具体药代动力学特性，例如半衰期和口服生物利用度。它可溶于DMSO，通常配制成用于体内给药的制剂。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
关于EX-229的全面毒理学数据在公开文献中并不常见。作为一种研究化合物，它仅供实验室使用，不得用于人体治疗。处理该化合物时应遵循标准安全预防措施。该化合物的纯度≥98%。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
AMP激活蛋白激酶激活剂
EX-229是一种环状苯并咪唑衍生物，化学名称为5-({6-氯-5-(1-甲基吲哚-5-基)-1H-苯并咪唑-2-基}氧基)-2-甲基苯甲酸。它是一种直接的AMPK激活剂，结合于激酶结构域N端叶与β亚基糖原结合模块之间的界面。它通过变构作用和保护α亚基Thr172位点免于去磷酸化来激活AMPK。EX-229激活纯化AMPK的效力比A769662高5-10倍。 [1] EX-229（也称为化合物991）被用作工具化合物，以验证AMPK依赖的STIM1/STIM2和Rabep1磷酸化。它可直接激活AMPK，而不会改变细胞内ATP/AMP水平。[2] EX-229是一种强效的变构AMPK激活剂。它也被称为化合物991和AMPK激活剂991。它能增强AMPK活性和葡萄糖摄取。本产品仅供研究使用。 |
| 分子式 |
C24H18CLN3O3
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|---|---|---|
| 分子量 |
431.8710
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| 精确质量 |
431.103
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| 元素分析 |
C, 66.75; H, 4.20; Cl, 8.21; N, 9.73; O, 11.11
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| CAS号 |
1219739-36-2
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
45256693
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| 外观&性状 |
Off-white to pink solid powder
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| LogP |
5.6
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| tPSA |
80.1
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
666
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=C(C=C(C=C1)OC2=NC3=C(N2)C=C(C(=C3)C4=CC5=C(C=C4)N(C=C5)C)Cl)C(=O)O
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| InChi Key |
FHWSAZXFPUMKFL-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H18ClN3O3/c1-13-3-5-16(10-17(13)23(29)30)31-24-26-20-11-18(19(25)12-21(20)27-24)14-4-6-22-15(9-14)7-8-28(22)2/h3-12H,1-2H3,(H,26,27)(H,29,30)
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.3 mg/mL (3.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 13.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.3 mg/mL (3.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 13.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.3 mg/mL (3.01 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3155 mL | 11.5776 mL | 23.1551 mL | |
| 5 mM | 0.4631 mL | 2.3155 mL | 4.6310 mL | |
| 10 mM | 0.2316 mL | 1.1578 mL | 2.3155 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Effect of the small-molecule AMPK activator 991 on activity of a panel of 139 protein kinases.Am J Physiol Endocrinol Metab.2016 Oct 1;311(4):E706-E719. |
|---|
991 treatment enhances AMPK activity induced by 5-aminoimidazole-4-carboxamide riboside (AICAR) or C13 in hepatocytes.Am J Physiol Endocrinol Metab.2016 Oct 1;311(4):E706-E719. |
991 activator binding to AMPK.Nat Commun.2013;4:3017. doi: 10.1038/ncomms4017. |
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