Target: Tubulin (β‑tubulin, colchicine‑binding site) – Fenbendazole binds to free tubulin and mildly inhibits polymerization; Competitive colchicine binding assay suggests binding at the colchicine site (Fig. S1) [1].
Target: Hypoxia‑inducible factor (HIF) pathway – Fenbendazole stabilizes HIF‑1α protein and induces HIF‑dependent gene expression (e.g., p21) via free tubulin binding, not via mitochondrial inhibition [2].
Fenbendazole targets β-tubulin in parasite cells, specifically binding to the colchicine-binding site on β-tubulin and preventing its polymerization into microtubules. Microtubules are essential for various cellular processes including cell division, intracellular transport, and maintenance of cell structure. By inhibiting microtubule formation, fenbendazole disrupts these processes, leading to impaired nutrient uptake, reduced motility, and eventual death of the parasite. The compound shows selective toxicity for parasite tubulin over mammalian tubulin, contributing to its safety in veterinary use. It may also have effects on glucose metabolism in parasites.

当应用于具有野生型p53的人类非小细胞肺癌（NSCLC）肿瘤细胞系（H460和A549）时，芬苯达唑（1 μM；24小时）可显著减缓细胞生长[1]。芬苯达唑（1 μM；24小时）可提高p53蛋白水平并诱导细胞植入[1]。人类NSCLC细胞在暴露于1 μM芬苯达唑24小时后，会进入细胞生命周期的有丝分裂期[1]。唑类化合物（1 μM；24 小时）可部分改变 A549 细胞的微管网络 [1]。体外实验：如免疫荧光（α-微管蛋白染色）所示，芬苯达唑（1 μM，24 小时）可部分改变 A549 人非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞的微管网络，导致细胞核周围微管笼的完整性丧失，但其作用不如秋水仙碱（50 ng/ml）显著，后者可导致微管完全解聚 [1]。在体外使用纯化牛微管蛋白（1.8 mg/ml）进行的微管蛋白聚合实验中，芬苯达唑（10 μM）对聚合作用有轻微抑制作用（通过 340 nm 处的浊度测定），而秋水仙碱（100 nM）的抑制作用更强 [1]。芬苯达唑（1 μM，24 小时）可适度降低聚合的微管蛋白。与对照组相比，芬苯达唑可显著降低A549细胞中的微管蛋白组分（可溶性/聚合微管蛋白测定），而诺考达唑和秋水仙碱几乎完全抑制了聚合微管蛋白的形成。与诺考达唑、秋水仙碱和长春新碱显著降低乙酰化微管蛋白水平不同，芬苯达唑对乙酰化微管蛋白水平没有影响[1]。
芬苯达唑（1 μM）可诱导细胞周期蛋白B1/CDK1水平早期升高（8小时 vs 对照组16小时），并在12-24小时增加磷酸化组蛋白H3（Ser10）水平，表明有丝分裂阻滞。流式细胞术显示亚G1期凋亡细胞随时间增加（32小时时约占30%）[1]。
芬苯达唑（1 μM）可显著抑制H460和A549非小细胞肺癌细胞的生长（MTT法）。与 p53 突变/缺失细胞相比，具有野生型 p53 的肿瘤细胞系对芬苯达唑更敏感。芬苯达唑诱导 p53 靶基因（p21、MDM2）的表达，并增加核内 p53 的积累。在转染了野生型 p53 的 p53 缺失型 H1299 细胞中，芬苯达唑增强了细胞凋亡[1]。
芬苯达唑（1 μM，4 小时）抑制 H460 和 A549 细胞的葡萄糖摄取（2-NBDG 荧光测定），并降低培养上清液中的乳酸水平。它降低了 GLUT-4 和己糖激酶 II (HKII) 的 mRNA 表达，并增加了 p53 调控的代谢基因（TIGAR、SCO2、GLS2、脯氨酸氧化酶）的表达[1]。
芬苯达唑（1 μM，24 小时）降低了细胞裂解液中己糖激酶 II 的酶活性（分光光度法测定）。体外实验表明，纯化的酵母HKII活性可被递增剂量的芬苯达唑（0-100 μM）抑制[1]。芬苯达唑（1 μM，24 h）可增加线粒体p53的转位（GFP-p53转染和线粒体组分的Western blot分析），并伴有线粒体膜去极化（JC-1染色）[1]。在小鼠原代皮层神经元中，芬苯达唑（1 μM，8 h）可增加p21 mRNA的表达（实时PCR），而1 μM（20 h）可增加p21蛋白的表达（Western blot分析）。它还能稳定HT22细胞中的HIF-1α蛋白（4小时），并以浓度依赖的方式（0.5-2 μM）增加ODD-Luc报告基因活性（HIF-1α稳定性的替代指标）[2]。
芬苯达唑（0.25-1 μM）以剂量依赖的方式保护胚胎皮层神经元免受同型半胱氨酸（HCA）诱导的氧化应激（MTT法）。用紫杉醇（0.1 μM）预处理可消除这种神经保护作用，紫杉醇可降低游离微管蛋白水平。在神经保护浓度（≤1 μM）下，芬苯达唑不破坏神经元形态（β-微管蛋白III免疫染色）[2]。芬苯达唑（10 μM）对分离的小鼠肝脏线粒体呼吸速率（状态4和状态3）、膜电位（番红O染色）或活性氧（ROS）释放（Amplex Red染色）均无影响，表明其HIF稳定作用并非由于直接的线粒体功能障碍[2]。芬苯达唑在体外不抑制延胡索酸酶活性（与甲苯达唑不同），该活性通过240 nm处的连续光密度测定法测定[2]。体外实验表明，芬苯达唑对多种胃肠道线虫（包括血矛线虫属、奥斯特线虫属、毛圆线虫属、库珀线虫属和线虫属）具有强效的驱虫活性。它能抑制寄生虫细胞提取物中的微管蛋白聚合。在寄生虫细胞培养中，它能破坏细胞骨架并抑制细胞增殖。它具有杀卵、杀幼虫和杀成虫活性。它对易感寄生虫的幼虫期和成虫期均有效。对某些耐药株的活性可能有限。该化合物的作用具有浓度依赖性和时间依赖性。

芬苯达唑（1 mg；口服；每日一次）治疗12天可显著降低肿瘤的重量和体积[1]。
体内研究：在携带A549人非小细胞肺癌异种移植瘤（肿瘤大小2-3 mm）的雌性无胸腺裸鼠（nu/nu）中，每隔一天口服芬苯达唑（1 mg/只），持续12天，与载体对照组（橄榄油）相比，肿瘤体积和重量显著降低。肿瘤血管生成（血红蛋白含量）减少，TUNEL染色显示细胞凋亡增加。免疫组织化学显示，芬苯达唑治疗组肿瘤中p53阳性细胞增加，CD31阳性内皮细胞减少[1]。
在另一项研究中，芬苯达唑未进行体内神经保护作用的测试；然而，甲苯咪唑（一种相关的苯并咪唑类药物）以 50 mg/kg 的剂量灌胃给药 5 天后，转基因小鼠脑内 ODD-Luc 活性增加，表明 HIF 稳定化 [2]。
据报道，芬苯达唑在实验动物中具有较高的安全性和较低的毒性（参考文献 [1]），但这些文献中并未提供针对神经系统模型的具体体内疗效数据 [1][2]。
在体内，芬苯达唑是一种有效的驱虫药，可用于治疗多种动物的胃肠道线虫感染。它以灌服剂、饲料添加剂或糊剂的形式口服给药。它对多种线虫有效，包括那些给牲畜造成重大经济损失的线虫。它在目标动物中具有较高的安全性。它对易感寄生虫的成虫和幼虫阶段均有效。它还用于治疗肺线虫和某些绦虫感染。其效果与剂量相关，剂量越高，对更具抗性的物种或阶段的疗效越好。

芬苯达唑的体外驱虫活性测定采用寄生虫卵、幼虫或成虫。卵孵化测定是将寄生虫卵与不同浓度的芬苯达唑（0.01-100 μg/mL）在水或缓冲液中于25-30℃孵育24-48小时，并在显微镜下计数孵化卵的百分比。幼虫发育测定是将L1期幼虫与该化合物孵育数天，并评估其发育至L3期幼虫的情况。幼虫运动性测定是观察L3期幼虫在化合物存在下的运动性。成虫运动性测定是将成虫与该化合物孵育，并评估其运动性和存活率。EC₅₀值由剂量-反应曲线计算得出。微管蛋白结合测定采用与[³H]-秋水仙碱的竞争性结合试验。

细胞周期分析 [1]
细胞类型： A549 细胞
测试浓度： 1 μM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 导致细胞周期蛋白 B1/CDK1 水平早期升高（8 小时，而未处理的对照细胞为 16 小时）。在 12 小时和 24 小时，磷酸化组蛋白 H3 (Ser10) 表达上调。

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细胞凋亡分析[1]
细胞类型： A549 细胞
测试浓度： 1 uM
孵育时间： 8、16、24、32、40、48 小时
实验结果： 凋亡细胞数量随时间推移而增加，细胞周期蛋白 B1 水平降低，约 30% 的细胞在 32 小时后发生凋亡。

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蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： H460 细胞
测试浓度： 1 μM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 导致线粒体组分中 p53 蛋白水平升高。

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细胞实验（癌细胞）：将人非小细胞肺癌 A549、H460 和 H1299 细胞培养于含 10% FBS 的 DMEM 培养基中。对于免疫荧光染色，将盖玻片上的细胞用芬苯达唑（1 μM）或秋水仙碱（50 ng/ml）处理 24 小时，进行透化、固定，用抗 α-微管蛋白一抗和 FITC 标记的二抗染色，并用碘化丙啶对细胞核进行复染 [1]。
微管蛋白聚合测定：将纯化的牛微管蛋白（1.8 mg/ml）溶于 PEM 缓冲液（80 mM PIPES、1 mM EGTA、0.5 mM MgCl₂、1 mM GTP）中，并与 DMSO、芬苯达唑（10 μM）或秋水仙碱（100 nM）孵育。聚合反应通过 340 nm 波长下的吸光度监测 30 分钟 [1]。
可溶性/聚合微管蛋白分级分离：将处理 24 小时的细胞在微管稳定缓冲液（0.1 M MES、1 mM EGTA、0.5 mM MgCl₂、0.1 mM EDTA、4 M 甘油、0.1% NP-40、1 mM GTP、1 mM PMSF、蛋白酶抑制剂）中裂解，在 100,000 g 下离心 30 分钟，分离可溶性（上清液）和聚合（沉淀）组分。用抗α-微管蛋白和β-肌动蛋白进行蛋白质印迹分析[1]。
细胞周期和凋亡：将同步化的A549细胞用1 μM芬苯达唑处理指定时间，用70%乙醇固定，用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析。细胞凋亡也通过膜联蛋白V/PI染色进行评估[1]。
MTT细胞活力检测：将细胞接种于96孔板中，用化合物处理24-48小时，然后加入MTT，用DMSO溶解甲臜，在570 nm处测定吸光度[1]。
蛋白质印迹：用NP-40缓冲液裂解细胞，通过SDS-PAGE分离蛋白质，转移至PVDF膜，用针对cyclin B1、CDK1、pH3(Ser10)、p53、p21、MDM2、Ac-α-微管蛋白、β-肌动蛋白、COX IV等的抗体进行检测[1]。
葡萄糖摄取：用1 μM芬苯达唑处理细胞4小时，然后用100 μM 2-NBDG孵育1小时，洗涤后测量荧光强度（激发/发射波长485/528 nm）。 [1].
乳酸和葡萄糖氧化测定：使用商业试剂盒（葡萄糖氧化酶/过氧化物酶和乳酸测定）检测培养上清液[1].
己糖激酶活性：将细胞裂解液或纯化的酵母HKII与反应混合物（8.3 mM甘氨酰甘氨酸、17 mM ATP、0.0011%甲酚红、14 mM MgCl₂、27 mM葡萄糖）孵育，测定A₅₆₀的减少量[1].
线粒体分离和p53易位：处理细胞24小时，使用商业试剂盒分离线粒体，并通过Western blot分析各组分[1].
细胞测定（神经元）：将E15 CD-1小鼠胚胎的原代皮层神经元培养在含10% FBS/5%马血清的MEM培养基中。为了进行神经保护，将神经元与 HCA (5 mM) 和 芬苯达唑 (0.125‐2 μM) 共同处理 16 小时，通过 MTT 或活/死染色 (钙黄绿素 AM/乙锭同型二聚体‐1) 评估活力。对于紫杉醇预处理，在HCA和FZ处理前30分钟加入0.1 μM紫杉醇[2]。
HT22 HRE-Luc和ODD-Luc报告基因检测：将稳定转染HRE-荧光素酶或ODD-荧光素酶的HT22细胞用化合物处理4-24小时，裂解细胞，测定荧光素酶活性并以蛋白浓度进行标准化[2]。
免疫细胞化学（神经元）：用4%多聚甲醛固定细胞，用抗β-微管蛋白III抗体和二抗染色，并通过荧光显微镜观察[2]。
线粒体检测：通过Percoll密度梯度离心分离小鼠脑非突触线粒体。使用Oxytherm血氧仪测量呼吸作用（状态4和ADP存在下的状态3）。通过番红O荧光（激发/发射波长495/586 nm）测量膜电位。活性氧（ROS）发射采用Amplex Red（激发/发射波长555/581 nm）结合辣根过氧化物酶（HRP）和超氧化物歧化酶（SOD）进行测定[2]。
延胡索酸酶活性：将线粒体裂解液与苹果酸（0.05-0.4 mM）和不同浓度的苯并咪唑孵育，在A₂₄₀处监测延胡索酸的生成[2]。
芬苯达唑的体外细胞活性测定采用寄生虫细胞系（例如，寄生线虫细胞）或哺乳动物细胞系进行选择性评估。将寄生虫细胞培养于合适的培养基中，并用不同浓度（0.01-100 μM）的芬苯达唑处理24-72小时。采用MTT或Alamar Blue法评估细胞活力。采用Western blot或β-微管蛋白免疫荧光染色评估微管蛋白聚合。采用共聚焦显微镜观察微管破坏。采用流式细胞术进行细胞周期分析。细胞凋亡通过 caspase-3/7 激活进行评估。为进行哺乳动物安全性评估，将哺乳动物细胞系（例如肝细胞）暴露于化合物中，并通过 MTT 法评估细胞毒性。

动物/疾病模型： 雌性无胸腺裸鼠（nu/nu）异种移植A549细胞[1]：1 mg/只
给药途径： 口服；隔日一次，持续12天
实验结果： 导致肿瘤体积和重量显著减少。肿瘤内血红蛋白含量的降低意味着肿瘤血管供应的减少。

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动物实验方案（异种移植）：雌性无胸腺裸鼠（nu/nu）（6周龄）适应环境3天后，将5 × 10⁶个A549细胞溶于100 μl PBS中，皮下注射至右侧腹部。当肿瘤直径达到 2-3 mm（约 4 周）时，小鼠每隔一天经口灌胃给予溶于橄榄油的芬苯达唑（1 mg/只），持续 12 天。对照组小鼠仅灌胃橄榄油。使用数字游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 宽度² × 长度/2）。实验结束时，切除肿瘤，称重，并进行血红蛋白测定（分光光度法，A₅₉₀）、TUNEL 染色、p53 和 CD31 免疫组化染色。所有实验程序均已获得机构动物伦理委员会批准[1]。
动物实验方案（HIF报告基因）：ODD-Luc转基因小鼠（ADU FB.129S6-Gt(ROSA)26Sortm2(HIF1A/luc)Kael/J）每日一次灌胃给予甲苯咪唑（50 mg/kg）或载体（PBS：芝麻油 1:1），连续5天。末次给药6小时后，小鼠腹腔注射D-荧光素（75 mg/kg），并用异氟烷麻醉，然后使用IVIS-100系统进行生物发光成像。对头部区域（ROI）的荧光素酶信号进行定量分析。（本研究中未提供芬苯达唑体内实验数据）[2]。
芬苯达唑的体内动物实验是在目标动物物种（牛、羊、山羊、马、猪、狗、猫）中进行的，以评估其疗效和安全性。为进行疗效研究，将感染自然或实验性寄生虫的动物用推荐剂量（例如，大多数物种为 5-10 mg/kg）的芬苯达唑进行治疗。在治疗前后采集粪便样本，进行粪便虫卵计数减少 (FECR) 检测。尸检时，检查胃肠道内的蠕虫数量。为进行安全性研究，将动物用数倍于治疗剂量的芬苯达唑治疗数天，并评估其临床症状、体重、采食量、血液学、临床化学和组织病理学指标。药代动力学研究包括采集血液和组织样本进行药物浓度分析。

芬苯达唑口服后在胃肠道吸收不良，大部分药物滞留在肠道内发挥驱虫作用。吸收的部分在肝脏代谢为芬苯达唑亚砜（奥芬达唑）和芬苯达唑砜，这两种代谢物也具有驱虫活性。母体化合物及其代谢物主要经粪便排泄，少量经肾脏排泄。该化合物在组织中半衰期较长，有助于其维持疗效。它分布于包括肝脏、肾脏和肌肉在内的多种组织。它能透过胎盘并分泌到乳汁中。不同物种和制剂的药代动力学特征有所不同。

毒性/毒代动力学：体外实验表明，浓度≥2 μM的芬苯达唑对原代皮层神经元的基础存活率有逐渐降低的负面影响（MTT 法）[2]。在癌细胞中，未提供更高浓度的详细数据。体内实验表明，裸鼠口服芬苯达唑（每只小鼠隔日1 mg，连续12天）耐受性良好，未见明显的毒性反应。根据既往报道（参考文献[1]），该药物在实验动物中具有较高的安全性和较低的毒性。但未提供LD₅₀、器官毒性或具体的毒代动力学数据[1][2]。
芬苯达唑在目标动物中具有较高的安全性。大鼠急性口服LD₅₀>10,000 mg/kg，表明其急性毒性极低。在治疗剂量下，不良反应罕见且轻微。高剂量（数倍于治疗剂量）可能导致某些动物出现胃肠道紊乱、采食量减少和骨髓抑制。极高剂量下，该药物对某些动物具有致畸性，因此不建议在某些动物的妊娠早期使用。治疗剂量下，该药物不会引起明显的肝毒性或肾毒性。高剂量下，该药物可能引起犬类呕吐或腹泻。该化合物具有良好的兽用安全性。

[1]. Fenbendazole acts as a moderate microtubule destabilizing agent and causes cancer cell death by modulating multiple cellular pathways. Sci Rep. 2018 Aug 9;8(1):11926.

[2]. Antihelminthic benzimidazoles are novel HIF activators that prevent oxidative neuronal death via binding to tubulin. Antioxid Redox Signal. 2015 Jan 10;22(2):121-34.

[3]. Fenbendazole as a potential anticancer drug. Anticancer Res. 2013 Feb;33(2):355-62.

芬苯达唑属于苯并咪唑类化合物，其结构为1H-苯并咪唑，2位和5位分别被（甲氧羰基）氨基和苯硫酰基取代。它是一种广谱驱虫药，尤其在兽医学中用于治疗线虫感染。芬苯达唑是一种抗线虫药物，属于苯并咪唑、氨基甲酸酯和芳基硫醚类化合物。它是一种具有广谱驱虫活性的苯并咪唑类化合物，可用于治疗多种胃肠道寄生虫感染，包括贾第鞭毛虫、蛔虫、钩虫、鞭虫、绦虫、蛲虫、肺圆线虫、肺吸虫病和粪类圆线虫感染。芬苯达唑获准在兽医指导下用于绵羊、牛、马、鱼、犬、猫、兔和海豹。
兽医学中使用的抗线虫苯并咪唑类药物。另见：杆菌肽亚甲基二水杨酸盐；芬苯达唑（成分）；芬苯达唑；伊维菌素；吡喹酮（成分）。

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适应症
用于治疗和控制猪的胃肠道线虫感染，包括：猪蛔虫（成虫、肠道和移行幼虫期）；线虫属（成虫期）；毛线虫属（成虫期）。用于治疗鸡的胃肠道线虫感染，包括：猪蛔虫（L5期和成虫期）；鸡异刺线虫（L5期和成虫期）；毛细线虫属。 （L5期和成虫期）。

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补充信息：芬苯达唑是一种苯并咪唑类驱虫药，用于兽医学。由于其能够干扰微管、激活p53并破坏葡萄糖代谢，因此已被重新开发为抗癌药物。与经典的微管毒素（例如秋水仙碱、长春花生物碱）不同，芬苯达唑仅引起轻微的微管解聚，且不影响乙酰化微管蛋白的水平。如维拉帕米罗丹明123积累试验所示[1]，它不是P-糖蛋白（P-gp）的底物或抑制剂。在神经元中，芬苯达唑通过与游离微管蛋白结合激活HIF-1α，从而导致p21上调并抵抗氧化应激。这种神经保护作用与线粒体抑制无关，并可被紫杉醇（一种降低游离微管蛋白的药物）阻断[2]。该化合物已用于动物和人类的口服寄生虫感染治疗，其安全性支持进一步研究其在癌症和神经系统疾病方面的应用[1][2]。
芬苯达唑（CAS# 43210-67-9）是一种广谱驱虫药，在兽医学中用于治疗动物的胃肠道寄生虫。它属于苯并咪唑类驱虫药。它对线虫、绦虫和某些吸虫有效。它用于牛、羊、山羊、马、猪、狗、猫和其他动物。它仅供兽用，未获准用于人类。它有多种口服制剂，包括灌服剂、饲料添加剂、糊剂和片剂。在许多地区，此药需要兽医处方。本产品仅供兽医使用，不可用于人类治疗。

299.072

43210-67-9

Fenbendazole-d3;1228182-47-5

3334

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

541.4±42.0 °C at 760 mmHg

233°C

281.2±27.9 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.679

4.34

92.31

2

4

4

21

363

0

S(C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])C1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])N([H])C(N([H])C(=O)OC([H])([H])[H])=N2

HDDSHPAODJUKPD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H13N3O2S/c1-20-15(19)18-14-16-12-8-7-11(9-13(12)17-14)21-10-5-3-2-4-6-10/h2-9H,1H3,(H2,16,17,18,19)

methyl N-(6-phenylsulfanyl-1H-benzimidazol-2-yl)carbamate

Hoe881vHoe-881v Fenbendazole FenbendazolPanacurFenbendazoleamine Phenbendasol Safe-quard Hoe 881v

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~10 mg/mL (~33.41 mM)
H2O : ~1 mg/mL (~3.34 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (3.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (3.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。