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FITC

别名: Fluorescein isothiocyanate isomer I Fluorescein 5-isothiocyanate FITC 异硫氰酸荧光素酯; 荧光素-5-异氰酸酯;异硫氰酸荧光酯异构体;异硫氰酸荧光橙红;异硫氰酸荧光红;异硫氰酸荧光黄;异硫氰酸荧光素(异构体I);FITC 异硫氰酸荧光素;Fluorescein 5-Isothiocyanate (isomer I) 异硫氰酸荧光素(异构体I);异硫氰酸荧光素;异硫氰酸荧光素 Fluorescein isothiocyanate
目录号: V21039 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
FITC，英文全称Fluorescein Isothiocyanate，中文名称异硫氰酸荧光素，是生物学中应用最广泛的绿色荧光素类似物。
FITC CAS号: 3326-32-7
产品类别: Fluorescent Dye
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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纯度: ≥98%

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产品说明书
产品描述
FITC，英文全称Fluorescein Isothiocyanate，中文名称异硫氰酸荧光素，是生物学中应用最广泛的绿色荧光素类似物。 FITC具有吸收率高、荧光量子产率优异、水溶性好的特点。 FITC的异硫氰酸酯基团可以与蛋白质上的氨基、巯基、咪唑基、酪氨酰基、羰基等基团结合，实现包括抗体、凝集素在内的蛋白质标记。除了用作蛋白质标记物外，FITC 还可用作蛋白质荧光示踪剂，通过标记抗体快速识别病原体，或用于蛋白质和肽的微测序 (HPLC)。 FITC 的最大激发波长为 494 nm。一旦激发，它会在最大发射波长520 nm处显示黄绿色荧光。
生物活性&实验参考方法
靶点
Green fluorescent dye
体外研究 (In Vitro)
储备液的制备
1.蛋白制备：
制备浓度为1 mg/mL的蛋白（抗体），以达到最佳标记效果
1） 蛋白溶液的pH值应为8.5±0.5。如果pH值低于8.0，用1M NaHCO3调节pH值
2） 如果蛋白含量低于1 mg/mL，标记效率将显著降低。建议最终蛋白浓度范围在1至10 mg/mL之间，以实现最高的标记效率
3） 为了确保最佳的标记效果，蛋白需要在含有伯胺（如Tris或甘氨酸）和铵离子的透明缓冲液中
2.染料的准备
将无水DMSO加入到FITC小瓶中，摇动以制备10mM溶液
注意：FITC需要遮光并新鲜制备
3.染料用量计算
待标记的蛋白的量决定了标记反应需要多少FITC。FITC与蛋白的质量比大约为1:50是理想的
例如，假如所需标记蛋白为 1 mL，2 mg/mL 的 IgG (MW=150,000)，用 1 mL DMSO 溶解一管 1 mg FITC，则所需 FITC 体积为 40 μL。
以下公式可用于计算：
摩尔F/P=（MW/389）*（A495/195）/｛[A280-（0.35*A495）]/E0.1%｝=（A495*C）/[A280-（0.35*A495）]
C=（MW*E0.1%280）/（389*195）
*注意：
C表示蛋白常数；MW是蛋白的分子量；389：FITC 的分子量； 195：FITC 偶联物在 pH=13, 490 nm 处的吸光值 E0.1%； （0.35×A495）：基于 FITC A280 的校正因子； E0.1%：蛋白（1.0 mg/mL）在 280 nm 处的吸光值。
使用指南
1.标记反应
1） 将50μL新制备的FITC加入1mL蛋白样品溶液中，轻轻摇晃并混合，然后短暂离心，在反应管底部收集样品。避免剧烈混合，以防止蛋白样品变性和失活
2） 将反应管放在黑暗的地方，在室温下轻轻孵育8小时。每隔30分钟，轻轻翻转反应管数次，使两种反应物充分混合，提高标记效率
3） 加入5M的NH4Cl至50mM的最终浓度，并在4℃下终止反应2小时
2.蛋白纯化和脱盐
以下方案以使用Sephadex G-25柱纯化染料-蛋白偶联物为例
1） 按照生产说明配制Sephadex G-25柱
2） 将反应混合物装入Sephadex G-25柱的顶部
3） 当样品到达顶部树脂表面以下时，立即加入PBS（pH 7.2-7.4）
4） 向所需样品中加入更多的PBS（pH 7.2-7.4）以完成柱纯化。该复合物包含染料-蛋白复合物所需的组分
安全注意事项：
1.FITC对光照和湿度敏感。立即准备FITC溶液并丢弃未使用的零件
2.低浓度叠氮化钠（≤3 mM或0.02%）或硫柳汞（≤0.02 mM或0.01%）不会显著干扰蛋白标记；但是20-50%的甘油会降低标记效率
3.避免使用含有伯胺（如Tris、甘氨酸）或铵离子的缓冲液，因为它们会与标记的蛋白竞争
4.本产品仅限专业人员进行科学研究，不得用于临床诊断或治疗，也不得用于食品或药物
5.为了您的安全和健康，操作时请穿戴实验室服和一次性手套
细胞实验
实施例1:FITC可用作具有绿色荧光的纳米复合材料的荧光探针
方法：用于纳米复合材料的连接
1.将纳米复合材料加入EDC和NHS中（摩尔比：1:5:5），调节pH以活化羧基
2.将FITC溶解在二甲基亚砜中，并加入上述混合物中，在黑暗中振荡过夜
3.通过冷冻干燥获得最终的FITC标记的纳米复合材料
4.使用基于探针的共焦激光内窥镜（Cellvizio，Mauna Kea Technologies，France）进行测定
实施例2:FITC可用作具有绿色荧光的纳米复合材料的荧光探针
方法：用于纳米复合材料的连接
1.将纳米复合材料（20 mg）与FITC（1 mg）悬浮在PBS（20 mL）中，并将混合物在黑暗中搅拌过夜。
2.用PBS洗涤纳米复合材料五次以去除过量的FITC
3.将测试细胞以105/孔的密度接种到6孔微孔板中，并在37°C、5%CO2中培养过夜
4.将培养基更换为所制备的含有纳米复合FITC的培养基。在共培养1、2、4和8小时后，用PBS冲洗测试细胞三次。
5.使用共焦激光扫描显微镜进行成像
实施例3：FITC可用作荧光探针，以绿色荧光连接到分子胶上
实施例4:FITC可用作用绿色荧光标记亲脂性植物毒素的荧光探针
实施例5:FITC可用作用绿色荧光标记漆酶的荧光探针
方法：漆酶标记
1.用二甲基亚砜制备FITC（1mg/mL）溶液
2.将FITC滴加到漆酶溶液（5 mg/mL）中，并在4°C下搅拌混合溶液4小时。
3.向混合溶液中加入NH4Cl水溶液（2mL，50mM）以停止反应
4.在4°C下，将磷酸盐缓冲液（50mM，pH 7）中的溶液透析48小时，以去除过量的FITC
5.使用共焦激光扫描显微镜（Leica SP8 STED 3X）进行成像。
药代性质 (ADME/PK)
代谢/代谢物
氰化物可通过口服、吸入和皮肤接触迅速吸收并分布于全身。氰化物主要通过硫氰酸酶或3-巯基丙酮酸硫转移酶代谢为硫氰酸盐。氰化物代谢物经尿液排出。(L96)
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
毒性概述
氰化物是电子传递链第四复合物（位于真核细胞线粒体膜上）中细胞色素c氧化酶的抑制剂。它与该酶中的三价铁原子形成复合物。氰化物与该细胞色素的结合会阻止电子从细胞色素c氧化酶传递到氧气。结果，电子传递链被破坏，细胞无法再进行有氧呼吸产生ATP供能。主要依赖有氧呼吸的组织，例如中枢神经系统和心脏，尤其容易受到影响。已知氰化物还可通过与过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、高铁血红蛋白、羟钴胺素、磷酸酶、酪氨酸酶、抗坏血酸氧化酶、黄嘌呤氧化酶、琥珀酸脱氢酶和铜/锌超氧化物歧化酶结合而产生一些毒性作用。氰化物与高铁血红蛋白中的铁离子结合，形成无活性的氰化高铁血红蛋白。(L97)
参考文献

[1]. Phosphorylation of osteopontin has proapoptotic and proinflammatory effects on human knee osteoarthritis chondrocytes. Exp Ther Med. 2016 Nov;12(5):3488-3494. Epub 2016 Oct 5.

[2]. Phosphorylation of osteopontin has proapoptotic and proinflammatory effects on human knee osteoarthritis chondrocytes. Exp Ther Med. 2016 Nov;12(5):3488-3494. Epub 2016 Oct 5.

[3]. Ratiometric, visual, dual-signal fluorescent sensing and imaging of pH/copper ions in real samples based on carbon dots-fluorescein isothiocyanate composites. Talanta. 2017 Jan 1;162:65-71.
其他信息
5-异硫氰酸荧光素是异硫氰酸荧光素的5-异构体。它是一种可与组织和蛋白质偶联的荧光探针，用于荧光抗体染色以及蛋白质和氨基酸结合技术中作为标记物。
异硫氰酸荧光素是一种由荧光素衍生的含氰化合物，用于流式细胞术。(L552)
可与组织和蛋白质偶联的荧光探针。它用于荧光抗体染色以及蛋白质和氨基酸结合技术中作为标记物。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C21H11NO5S
分子量
389.38
精确质量
389.035
元素分析
C, 64.78; H, 2.85; N, 3.60; O, 20.54; S, 8.23
CAS号
3326-32-7
相关CAS号
63469-13-6 (hydrochloride)
PubChem CID
18730
外观&性状
Light yellow to brown solid
密度
1.5±0.1 g/cm3
沸点
708.6±60.0 °C at 760 mmHg
熔点
>360 °C(lit.)
闪点
382.4±32.9 °C
蒸汽压
0.0±2.3 mmHg at 25°C
折射率
1.754
LogP
4
tPSA
120.44
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
28
分子复杂度/Complexity
668
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=C1OC2(C3=C(OC4=C2C=CC(O)=C4)C=C(O)C=C3)C5=C1C=C(N=C=S)C=C5
InChi Key
MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C21H11NO5S/c23-12-2-5-16-18(8-12)26-19-9-13(24)3-6-17(19)21(16)15-4-1-11(22-10-28)7-14(15)20(25)27-21/h1-9,23-24H
化学名
3',6'-dihydroxy-5-isothiocyanato-3H-spiro[isobenzofuran-1,9'-xanthen]-3-one
别名
Fluorescein isothiocyanate isomer I Fluorescein 5-isothiocyanate FITC
HS Tariff Code
2934.99.03.00
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~128.41 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (5.34 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.5682 mL 12.8409 mL 25.6819 mL
5 mM 0.5136 mL 2.5682 mL 5.1364 mL
10 mM 0.2568 mL 1.2841 mL 2.5682 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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