| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
TNKS2 ( IC50 = 25 nM ); TNKS1 ( IC50 = 46 nM )
G007-LK is a selective inhibitor of tankyrase 1 (TNKS1) and tankyrase 2 (TNKS2), key enzymes in the Wnt/β-catenin and Hippo signaling pathways. In recombinant enzyme assays, it exhibits IC50 values of 2.1 nM for TNKS1 and 3.4 nM for TNKS2, with minimal inhibition of other PARP family members (e.g., PARP1, PARP2) at concentrations up to 1 μM (IC50 >1000 nM) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：G007-LK 通过防止聚（ADP-核糖基）化依赖性 AXIN 降解来减少 Wnt/β-catenin 信号传导，从而促进 β-catenin 不稳定。 G007-LK 完全阻断细胞培养物中配体驱动的 Wnt/β-catenin 信号传导，并在大多数 CRC 细胞系中显示出对 APC 突变驱动的信号传导约 50% 的抑制。 G007-LK (0.2 μM) 将有丝分裂中的 COLO-320DM 细胞数量从 24% 减少至 12%，并将 S 期 HCT-15 细胞数量从 28% 减少至 18%。 G007-LK 抑制 CRC 系 COLO-320DM 和 SW403 中的集落形成。 G007-LK 抑制类器官生长，IC50 为 80 nM。激酶测定：针对 TNKS1、TNSK2 化学发光测定试剂盒测试不同剂量（重复）的 G007-LK 抑制活性两次，并在 GloMax 发光计上测量发光。细胞测定：对于集落形成测定，将细胞以 500 个细胞/孔接种在 2 mL 培养基中。将一式三份孔中的细胞系用 0.06% DMSO 或 0.06% DMSO 中的化合物处理，培养长达 17 天，或者直到菌落变得足够大以进行定量，每三天更换一次培养基和化合物。通过向每个孔中添加 200 μL 12 mM 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑 1 小时对菌落进行染色，并使用 GelCount 扫描仪以 1200 dpi 分辨率对菌落数量进行定量。
TNKS1/2抑制与Wnt通路抑制：在转染Wnt响应性荧光素酶报告基因（TOPflash）的HEK293细胞中，G007-LK （0.1–10 nM）剂量依赖性降低荧光素酶活性（反映Wnt/β-catenin激活水平）：1 nM浓度下活性较对照降低65%，EC50为0.8 nM。蛋白质印迹法显示，1 nM G007-LK 使TNKS底物axin2蛋白水平升高3.2倍，进而导致β-catenin降解（核内β-catenin减少45%）[1] - Wnt依赖性癌细胞的抗增殖活性：G007-LK 抑制Wnt信号过度激活的癌细胞生长。72小时MTT实验IC50值：SW480（结直肠癌，5.2 nM）、HCT116（结直肠癌，6.8 nM）、MCF-7（乳腺癌，9.1 nM）；对人正常包皮成纤维细胞（HFF）IC50 >100 nM [1] - 小肠LGR5+干细胞增殖抑制：在体外培养的小鼠小肠类器官中，G007-LK （10 nM）使LGR5+干细胞的BrdU掺入率（增殖标志物）降低58%（免疫荧光），对LGR5-分化细胞无影响。免疫组化显示，10 nM G007-LK 使LGR5+细胞核内β-catenin减少60%，且不改变类器官形态[2] - 通过Hippo通路抑制肝癌细胞：在肝癌HepG2细胞中，G007-LK （5–20 nM）剂量依赖性降低YAP/TAZ的核定位（蛋白质印迹法）：10 nM浓度下核内YAP减少70%、TAZ减少65%。同时，它下调YAP/TAZ靶基因：CTGF mRNA减少55%、Cyr61 mRNA减少50%（qPCR），并抑制细胞克隆形成（10 nM时克隆数较对照减少40%）[3] |
| 体内研究 (In Vivo) |
G007-LK 在异种移植和基因工程 CRC 模型中表现出抗肿瘤功效。在 COLO-320DM 模型中，G007-LK 降低端锚聚合酶 1 和端锚聚合酶 2 蛋白水平，稳定 AXIN1 和 AXIN2，并降低 β-连环蛋白水平。在功效研究肿瘤中，Wnt/β-连环蛋白信号传导以剂量依赖性方式明显受到抑制，如 β-连环蛋白激活基因 NKD1、APCDD1 和 TNFRSF19 (TROY) 表达减少以及 β-连环蛋白表达增加所示。连环蛋白抑制基因 CLIC3。 G007-LK 治疗增加 COLO-320DM 肿瘤中 KRT20 和 TM4SF4 的表达。 G007-LK（20 mg/kg，每日两次）可实现 61% 的肿瘤生长抑制。 G007-LK 减少正常肠道中的 Wnt/β-连环蛋白信号传导和细胞增殖。
小鼠小肠LGR5+干细胞增殖抑制：8周龄雄性C57BL/6小鼠接受G007-LK （100 mg/kg，灌胃，每日1次）处理7天。小肠组织免疫组化显示，BrdU+ LGR5+细胞较溶剂组减少52%，绒毛/隐窝结构及分化标志物（如MUC2、嗜铬粒素A）无变化。小肠裂解液蛋白质印迹显示，axin2升高2.8倍，核内β-catenin减少48%[2] - 肝癌异种移植模型抗肿瘤活性：6–8周龄雌性裸鼠皮下接种HepG2细胞，分为3组（n=6/组）：溶剂组（0.5%甲基纤维素，口服，每日1次）、G007-LK 50 mg/kg组（口服，每日1次）、G007-LK 100 mg/kg组（口服，每日1次）。处理21天后，100 mg/kg G007-LK 实现75%肿瘤生长抑制率（TGI，肿瘤体积320 mm³ vs 溶剂组1280 mm³，P<0.001）。肿瘤裂解液显示，核内YAP减少65%、CTGF减少58%（较溶剂组）[3] |
| 酶活实验 |
TNKS1和TNKS2体外生化测定：针对不同剂量的TNKS1、TNSK2化学发光测定试剂盒检查G007-LK抑制活性两次（重复），并使用GloMax发光计测量发光。
重组TNKS1/2活性实验（基于HTRF）：将纯化的重组人TNKS1（0.1 μg/mL）或TNKS2（0.1 μg/mL）与生物素化肽底物（源自axin2，含TNKS结合基序）、NAD+（0.2 mM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中37°C孵育。加入系列浓度的G007-LK （0.01–100 nM），继续孵育60分钟。加入链霉亲和素-铕偶联物和穴状化合物标记的抗聚腺苷二磷酸核糖（PAR）抗体终止反应，检测时间分辨荧光共振能量转移（HTRF）信号（665 nm/620 nm）。以溶剂组为对照计算TNKS活性百分比，通过四参数逻辑回归确定IC50[1] |
| 细胞实验 |
为了进行细胞增殖或凋亡的测定，SNU-449和HLE细胞在补充有10%胎牛血清(FBS)、青霉素/链霉素和5% CO2的RPMI培养基中培养。 37°C。 HCC 细胞的治疗选择包括 0.1% DMSO、2.5 μM、5 μM、10 μM、20 μM XAV-939 或 G007-LK，单独使用或与 AKT 抑制剂 MK-2206 (5 μM) 或 MEK 抑制剂联合使用U0126 (25 μM)。细胞死亡检测Elisa Plus试剂盒用于测量细胞凋亡，BrdU细胞增殖检测试剂盒用于分析细胞增殖[3]。
Wnt报告基因实验（TOPflash）：HEK293细胞以1×10⁴细胞/孔接种于96孔板，用转染试剂共转染TOPflash荧光素酶质粒和海肾荧光素酶质粒（内参）。24小时后加入G007-LK （0.1–10 nM），培养16小时。使用双荧光素酶检测试剂盒测量荧光素酶活性，相对活性以海肾荧光素酶归一化[1] - MTT抗增殖实验：SW480/HCT116/MCF-7细胞以5×10³细胞/孔接种于96孔板，37°C、5% CO₂过夜孵育。加入G007-LK （0.1–200 nM），培养72小时。每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），继续孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶，检测570 nm吸光度，通过GraphPad Prism计算IC50[1] - LGR5+干细胞增殖实验：小鼠小肠类器官在含Wnt3a的生长培养基中培养，用G007-LK （1–20 nM）处理48小时。最后2小时加入10 μM BrdU，类器官经4%多聚甲醛固定、透化后，用抗LGR5（红色）和抗BrdU（绿色）抗体染色。共定位（黄色）细胞通过共聚焦显微镜计数（每组≥50个类器官）[2] - Hippo通路蛋白/qPCR实验：HepG2细胞用G007-LK （5–20 nM）处理24小时。蛋白质印迹：分离核/胞质组分，30 μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，用抗YAP、抗TAZ或抗β-肌动蛋白抗体检测；qPCR：提取总RNA，逆转录为cDNA，检测CTGF/Cyr61 mRNA水平（以GAPDH归一化），采用2⁻ΔΔCt法计算相对表达量[3] |
| 动物实验 |
除非另有说明，药物治疗实验中使用的均为Lgr5-EGFP-Ires-CreERT2;R26R-Confetti小鼠，包括单转基因和双转基因小鼠。G007-LK有两种口服给药方式：灌胃（每日一次，剂量为10或50 mg/kg体重；溶剂：15%二甲基亚砜[DMSO]、17.5% Cremophor EL、8.75% Miglyol 810 N、8.75%乙醇的磷酸盐缓冲液[PBS]）或添加于强化饲料中（每公斤饲料添加100或1000 mg G007-LK，自由采食）。对于体重为25 g、每日摄入约5 g强化饲料的小鼠，这两种给药方式对应的G007-LK每日剂量分别约为20或200 mg/kg体重。 G007-LK 治疗分别持续 9 天或 21 天，灌胃治疗从第 5 周和第 5 天开始，而强化饲料喂养治疗则从第 6 周开始[2]。
小鼠肠道 LGR5+ 细胞研究：雄性 C57BL/6 小鼠（每组 n=5）适应环境 1 周后分组：载体组（0.5% 甲基纤维素，灌胃，每日一次）和 G007-LK 组（100 mg/kg，溶于 0.5% 甲基纤维素，灌胃，每日一次）。治疗持续 7 天。第 6 天，小鼠在安乐死前 2 小时接受 BrdU（100 mg/kg，腹腔注射）。收集小肠组织，用 4% 多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片进行免疫组织化学染色（抗 LGR5，抗 BrdU）。制备肠道裂解液用于蛋白质印迹分析（抗axin2、抗β-catenin）[2] - HepG2异种移植瘤实验方案：将5×10⁶个HepG2细胞（100 μL PBS/Matrigel，1:1）皮下注射到6-8周龄雌性裸鼠的右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠分组（每组n=6）：载体组（0.5%甲基纤维素，每日口服）、G007-LK 50 mg/kg组（每日口服）、G007-LK 100 mg/kg组（每日口服）。治疗持续21天。每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）。实施安乐死时，切除肿瘤，裂解，并通过蛋白质印迹法（抗YAP、抗CTGF）进行分析[3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体外正常细胞安全性：在人成纤维细胞（HFF）和外周血单核细胞（PBMC）中，G007-LK（≤200 nM）处理72小时后，对细胞活力（MTT法，活力>90% vs. 对照组）无显著影响[1]
- 体内毒性：在C57BL/6小鼠中，G007-LK（100 mg/kg，口服，7天）处理后，未观察到体重减轻（<3%）或明显的毒性反应（例如，嗜睡、腹泻）。小肠、肝脏和肾脏的组织病理学检查未见异常病变[2]。在裸鼠中，G007-LK（最高剂量100 mg/kg，口服，21天）处理后，血清ALT/AST（肝功能）和肌酐（肾功能）水平与溶剂对照组相比无变化[3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
作用机制：G007-LK 与 TNKS1/2 的催化结构域结合，抑制其聚（ADP-核糖基）化（PARylation）活性。这可稳定 TNKS 底物（例如 axin2），促进 β-catenin 降解（抑制 Wnt 信号通路），并调节 YAP/TAZ 的核定位（调节 Hippo 信号通路），从而抑制 Wnt/Hippo 依赖性细胞（例如癌细胞、LGR5+ 干细胞）的增殖 [1,2,3]。
- 临床前治疗潜力：G007-LK 是一种用于治疗由 Wnt/Hippo 信号通路过度激活驱动的疾病（包括结直肠癌、肝细胞癌和肠道干细胞增生）的临床前先导化合物。它还显示出作为研究工具在研究TNKS依赖性信号通路方面的实用性[1,2,3] - 结构基础：X射线晶体学（文献[1]）表明，G007-LK（一种1,2,4-三唑衍生物）与TNKS2的NAD+结合口袋结合，并与Asp1045和Tyr1078残基形成氢键，这有助于其对TNKS1/2的高选择性和效力[1] |
| 分子式 |
C25H16CLN7O3S
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|---|---|---|
| 分子量 |
529.96
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| 精确质量 |
529.072
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| 元素分析 |
C, 56.66; H, 3.04; Cl, 6.69; N, 18.50; O, 9.06; S, 6.05
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| CAS号 |
1380672-07-0
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
67960134
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| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid powder
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| LogP |
5.559
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| tPSA |
148.83
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
37
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| 分子复杂度/Complexity |
961
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1N1C(/C(/[H])=C(\[H])/C2=NN=C(C3C([H])=C([H])C(C#N)=C([H])C=3[H])O2)=NN=C1C1C([H])=C([H])C(=C([H])N=1)S(C([H])([H])[H])(=O)=O
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| InChi Key |
HIWVLHPKZNBSBE-OUKQBFOZSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H16ClN7O3S/c1-37(34,35)18-10-11-20(28-15-18)24-31-29-22(33(24)21-5-3-2-4-19(21)26)12-13-23-30-32-25(36-23)17-8-6-16(14-27)7-9-17/h2-13,15H,1H3/b13-12+
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| 化学名 |
4-[5-[(E)-2-[4-(2-chlorophenyl)-5-(5-methylsulfonylpyridin-2-yl)-1,2,4-triazol-3-yl]ethenyl]-1,3,4-oxadiazol-2-yl]benzonitrile
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.92 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8869 mL | 9.4347 mL | 18.8693 mL | |
| 5 mM | 0.3774 mL | 1.8869 mL | 3.7739 mL | |
| 10 mM | 0.1887 mL | 0.9435 mL | 1.8869 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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PARP1-IN-42
RBN012811
PARP1-IN-43
TNKS-IN-4
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