Ginkgolic Acid C17-1   中文名称: 银杏酸 C17-1

JAK2; Src; STAT3; PTEN
Ginkgolic acid C 17:1 targets the STAT3 signaling pathway. It inhibits constitutive activation of STAT3 by abrogating upstream JAK2 and Src kinases (but not JAK1). It also induces the expression of protein tyrosine phosphatases PTEN and SHP-1, which negatively regulate STAT3 activation. [1]

银杏酸C 17:1 (GAC 17:1) 以浓度依赖的方式降低U266多发性骨髓瘤细胞的活力，24小时处理后IC50值约为64 μM，而在相同条件下，GAC 17:1对正常人外周血单核细胞(PBMC)的活力没有显著影响。[1] GAC 17:1 (50 μM，3小时) 可抑制U266细胞中Tyr705位点的组成型STAT3磷酸化，而GAC 15:1 (50 μM) 则无此作用。这种抑制作用呈剂量依赖性（30或50 μM，3小时）和时间依赖性（50 μM，1.5或3小时），且不影响STAT3蛋白总量。 [1]
GAC 17:1 (50 μM) 以时间依赖性方式（1.5 和 3 小时）减弱上游激酶 Src 和 JAK2 的组成型磷酸化，但不影响 U266 细胞中 JAK1 的磷酸化。[1]
免疫细胞化学显示，GAC 17:1 (50 μM，3 小时) 可抑制 U266 细胞中 STAT3 从细胞质向细胞核的转位。[1]
电泳迁移率变动分析 (EMSA) 显示，GAC 17:1 (50 μM，1.5 或 3 小时) 以时间依赖性方式抑制 U266 细胞中 STAT3 与 DNA 的结合活性。 [1]在MM.1S细胞中，用GAC 17:1（50 μM，3 h）预处理可抑制IL-6（10 ng/mL，15 min）诱导的STAT3磷酸化。[1]GAC 17:1对STAT3磷酸化的抑制作用是可逆的；去除该化合物后，STAT3磷酸化恢复。[1]用广谱蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠预处理可逆转GAC 17:1诱导的U266细胞中STAT3磷酸化的抑制，表明存在PTP参与。[1]在U266细胞中，GAC 17:1（50 μM，1.5或3 h）以时间依赖性方式诱导PTEN和SHP-1的蛋白（Western blot）和mRNA（RT-PCR）表达。 [1]
用PTEN特异性或SHP-1特异性siRNA（50 nM，24 h）转染U266细胞后，GAC 17:1诱导的PTEN和SHP-1上调被消除，GAC 17:1对STAT3磷酸化的抑制作用也被逆转。[1]
细胞周期分析显示，GAC 17:1（30或50 μM，24 h）以剂量依赖的方式增加U266细胞中亚G1期DNA的含量。[1]
Annexin V染色实验表明，GAC 17:1（30或50 μM，24 h）以剂量依赖的方式增加Annexin V阳性U266细胞的比例。[1]
TUNEL染色实验证实，GAC 17:1（30或50 μM，24 h）显著诱导U266细胞凋亡。 [1]
活/死细胞染色检测显示，GAC 17:1（50 μM，24 h）处理U266细胞后，细胞死亡率增加。[1]
GAC 17:1（30或50 μM，24 h）导致U266细胞线粒体膜电位丧失，这通过TMRE染色和流式细胞术检测证实。[1]
GAC 17:1（30或50 μM）以剂量和时间依赖的方式抑制U266和MM.1S细胞的增殖（通过MTT法在指定时间间隔内评估）。 [1]
蛋白质印迹分析显示，GAC 17:1（30或50 μM，24 h）下调了U266细胞中STAT3调控基因产物的表达，包括抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Survivin、IAP-1；增殖相关蛋白COX-2和Cyclin D1；血管生成因子VEGF；以及侵袭相关蛋白MMP-9和MMP-2。[1]
实时定量PCR证实，GAC 17:1（30或50 μM，24 h）降低了U266细胞中Bcl-2、Bcl-xL和Cyclin D1的mRNA表达。[1]
GAC 17:1（30或50 μM，24 h）以剂量依赖的方式诱导U266细胞中caspase-3和PARP的裂解。 [1]在转染了pMXs-STAT3C（组成型活性STAT3突变体）的MEF细胞中，GAC 17:1（100 μM，3 h）显著抑制了STAT3的磷酸化。此外，GAC 17:1（100 μM，24 h）诱导了MEF细胞的凋亡，而pMXs-STAT3C的转染消除了这种作用。[1]

采用电泳迁移率变动分析法 (EMSA) 分析 STAT3-DNA 结合活性。按照标准流程，从经银杏酸 C 17:1 处理的 U266 细胞（50 μM，处理 1.5 或 3 小时）中制备核提取物。将核提取物蛋白与 5′ 端生物素标记的 STAT3 寡核苷酸探针（序列：5′-GATCCTTCTGGGAATTCCTAGATC-3′ 及其互补链）孵育。将蛋白-寡核苷酸复合物在 5% 非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行分离，转移至尼龙膜，并根据制造商的说明使用化学发光 EMSA 试剂盒进行检测。[1] 对于磷酸化蛋白和总蛋白的 Western blot 分析，使用细胞裂解缓冲液制备全细胞提取物。等量的蛋白质（50 μg）经SDS-PAGE电泳分离后，转移至硝酸纤维素膜上，封闭后，与针对p-STAT3（Tyr705）、STAT3、p-JAK1（Tyr1022/1023）、JAK1、p-Src（Tyr416）、Src、PTEN、SHP-1和其他靶蛋白的一抗于4℃孵育过夜。用TBST洗涤后，将膜与HRP标记的二抗孵育1小时，最后用化学发光底物检测信号。[1]

采用 MTT 法测定细胞活力。将 U266 或 MM.1S 细胞（1-2 × 10⁴ 个细胞/孔）用不同浓度的银杏酸 C 17:1 处理指定时间（例如 24 小时）。然后，加入 30 μL MTT 溶液（2 mg/mL），继续孵育 2 小时。将生成的甲臜晶体溶解于 DMSO 中，并使用自动分光光度计在 570 nm 处测定吸光度。细胞活力以相对于未处理对照组的相对百分比进行标准化。[1] 对于 Western blot 分析，将细胞（5 × 10⁵ 个细胞/孔）用指定浓度和时间的银杏酸 C 17:1 处理。使用细胞裂解缓冲液制备全细胞提取物，取 50 μg 蛋白进行 SDS-PAGE 电泳，转移至硝酸纤维素膜，封闭后，与特异性一抗于 4°C 孵育过夜，随后与 HRP 标记的二抗孵育，最后进行化学发光检测。[1]
STAT3 定位的免疫细胞化学：U266 细胞经 GAC 17:1 处理（50 μM，3 小时）后，用 4% 多聚甲醛于室温固定 20 分钟，用 0.2% Triton X-100 透化，并用 5% BSA 封闭 1 小时。细胞与抗 STAT3 或抗磷酸化 STAT3 抗体于 4°C 孵育过夜，然后与 FITC 标记的二抗于室温孵育 1 小时，最后用 DAPI（1 μg/mL）染色。使用共聚焦显微镜采集图像，激发波长分别为 405 nm（DAPI）和 488 nm（FITC）。[1]
STAT3-DNA 结合的 EMSA 实验按酶活性测定部分所述进行。[1]
RNA 分离和逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR)：使用 Trizol 试剂提取总 RNA。PTEN 引物：正向引物 5′-TTTCTAACCGTCGACGCTCTT-3′，反向引物 5′-AGCTGTGGTGGGTTATTGGTCT-3′；SHP-1 引物：正向引物 5′-GGCTTCTGGGAGGAGTTTGAG-3′，反向引物 5′-CGGAGTTTGTATTCCGGTTGTG-3′。RT-PCR 反应条件按所述进行。 [1]
电穿孔介导的转染：将 U266 细胞 (1 × 10⁶) 悬浮于 120 μL 重悬缓冲液中，并与 50 nM PTEN、SHP-1 或对照 siRNA 混合，然后使用 1150 V 双脉冲转染系统进行转染。MEF 细胞则转染 2 μg pMXs-STAT3C（组成型活性 STAT3 突变体）或 pMXs-gw 对照载体。24 小时后，用 GAC 17:1 处理细胞（U266 细胞 50 μM，MEF 细胞 100 μM），并制备全细胞提取物用于蛋白质印迹分析。 [1]
细胞周期分析：将U266细胞（1 × 10⁶）用GAC 17:1处理24小时，用PBS洗涤，用70%乙醇固定，再洗涤后在含0.1% RNase A的PBS中于37℃孵育30分钟，用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析。[1]
Annexin V检测：将U266细胞（1 × 10⁶）用GAC 17:1处理24小时，用PBS洗涤，用FITC标记的Annexin V和碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析。 [1]
TUNEL 检测：将 U266 细胞用 GAC 17:1 (50 μM) 处理 24 小时，用 4% 多聚甲醛在室温下固定 30 分钟，重悬于 TUNEL 反应液中，并在黑暗中孵育 1 小时。通过流式细胞术分析 TUNEL 阳性细胞。[1]
线粒体膜电位测定：将 U266 细胞用 GAC 17:1 (50 μM) 处理 24 小时，用 PBS 洗涤，用 5 μM TMRE（四甲基罗丹明乙酯）孵育 30 分钟，并通过流式细胞术进行分析。[1]
活/死细胞检测：使用活/死细胞检测试剂盒评估细胞毒性，具体方法见文献。 [1]
实时定量PCR：使用Trizol试剂提取总RNA，取1 μg RNA用M-MLV逆转录酶反转录为cDNA。引物序列如下：Bcl-2（正向引物5′-TCCCTCGGTGCACAAATACTC-3′，反向引物5′-GACGACCCGATGGCCATA-3′）、Bcl-xL（正向引物5′-TACCAGCCTGACCAATATGGGC-3′，反向引物5′-TGGGTTCAAGTGATTCTCCTG-3′）、Cyclin D1（正向引物5′-AGAAGCTGTGCATCTACACCGACA-3′，反向引物5′-AGAAGCTGTGCATCTACACCGACA-3′）和GAPDH（正向引物5′-ACCTGACCTGCCGCTCTAGAAAA-3′，反向引物5′-ACGCCTGCTTCACCACCTT-3′）。计算2⁻ΔΔCt值。 [1]

银杏酸 C 17:1 对正常人外周血单核细胞 (PBMC) 的毒性极低。MTT 实验表明，浓度高达 50 μM 的银杏酸 C 17:1 处理 24 小时后，与未处理的对照组相比，PBMC 的活力并未显著降低（如图 1C 所示）。该化合物对正常细胞的毒性远低于对多发性骨髓瘤细胞的毒性。[1]

[1]. Molecules. 2017 Feb 13;22(2):276.

银杏酸C17-1是一种羟基苯甲酸。其功能与水杨酸相关。据报道，2-(10-十七碳烯基)-6-羟基苯甲酸存在于麻黄、银杏和余甘子中，相关数据可供参考。

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银杏酸C17:1是从银杏叶中分离得到的最丰富的银杏酸之一。此前研究表明，它能抑制多种肿瘤细胞（胰腺癌、乳腺癌、肺癌、白血病）的增殖，并通过调节脂肪生成途径、细胞周期阻滞和降低Bcl-2/Bax比值诱导细胞凋亡。它还能抑制SUMO化。本研究首次证实，GAC 17:1 通过抑制上游 JAK2 和 Src 的激活，并诱导蛋白酪氨酸磷酸酶 PTEN 和 SHP-1 的表达，从而抑制多发性骨髓瘤细胞中组成型和诱导型 STAT3 信号通路。这导致 STAT3 调控的基因产物（例如 Bcl-2、Bcl-xL、survivin、cyclin D1、VEGF、MMP-9）的表达下调，并诱导细胞凋亡。该研究提示，GAC 17:1 可能是一种具有良好安全性且有效的抗多发性骨髓瘤药物。[1]

C24H38O3

374.5567

374.282

111047-30-4

111047-30-4

5469634

White to off-white solid

1.0±0.1 g/cm3

499.1±33.0 °C at 760 mmHg

45 - 46 °C

269.7±21.9 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.522

10.5

57.53

2

3

16

27

391

0

O([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C(=C1C(=O)O[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C(/[H])=C(/[H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H]

MBYNDKVOZOAOIS-FPLPWBNLSA-N

InChI=1S/C24H38O3/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-16-18-21-19-17-20-22(25)23(21)24(26)27/h7-8,17,19-20,25H,2-6,9-16,18H2,1H3,(H,26,27)/b8-7-

2-[(Z)-heptadec-10-enyl]-6-hydroxybenzoic acid

Ginkgolic Acid C17-1; C17:1

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 75~100 mg/mL (200.2~267 mM)
Ethanol: ~75 mg/mL(~200.2 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.67 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。