Ginkgolide K

别名: GKGinkgolide K
目录号: V9551 纯度: ≥98%
从银杏叶中提取的银杏内酯K可以通过AMPK/mTOR/ULK1信号通路诱导保护性自噬(autophagy)。
Ginkgolide K CAS号: 153355-70-5
产品类别: New1
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
50mg
100mg
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产品描述
银杏内酯K可从银杏叶中提取,它能通过AMPK/mTOR/ULK1信号通路诱导保护性自噬。银杏内酯K具有神经保护作用。
生物活性&实验参考方法
靶点
AMPK/mTOR/ULK1 signaling pathway [2]
体外研究 (In Vitro)
GK预处理(50 μM,24 h)促进了氧糖剥夺(OGD)后星形胶质细胞的增殖,表现为细胞活力(CCK-8检测)和EdU阳性细胞数量的增加,与单独OGD组相比[2]。

GK预处理增强了OGD后星形胶质细胞的迁移,表现为迁移细胞数量(Transwell实验)和迁移距离(划痕实验)的增加[2]。

GK预处理上调了OGD后星形胶质细胞中自噬相关蛋白7(ATG7)、Beclin-1和LC3-II/LC3-I比值的表达,同时下调了p62蛋白的表达,表明诱导了自噬[2]。

GK预处理增加了OGD后星形胶质细胞中磷酸化AMPK(p-AMPK)和磷酸化ULK1(p-ULK1)的水平,并降低了磷酸化mTOR(p-mTOR)的水平。证实了 AMPK/mTOR/ULK1 信号通路的激活[2]。

与 Compound C(10 μM,一种 AMPK 抑制剂)共同处理可逆转 GK 诱导的 p-AMPK 和 p-ULK1 上调、p-mTOR 下调,并阻断 GK 诱导的自噬通量(逆转 ATG7、LC3-II、Beclin-1 和 p62 的变化);此外,Compound C 还消除了 GK 对 OGD 后星形胶质细胞增殖和迁移的促进作用[2]。
细胞实验
从2日龄大鼠的大脑皮层半球分离出原代星形胶质细胞。将细胞置于含5%马血清的胶质细胞培养基中,在37℃、5% CO₂的加湿培养箱中培养至90%汇合度,然后以180 rpm的转速振荡过夜,去除少突胶质细胞和小胶质细胞。为了模拟缺血/再灌注损伤,将星形胶质细胞用无血清、无葡萄糖的胶质细胞培养基洗涤三次,然后在37℃的厌氧培养箱(94% N₂、5% CO₂、1% O₂)中培养3小时。 OGD处理后,细胞在正常神经胶质培养基中于常氧条件(95%空气,5% CO2)下进行复氧,时间分别为6、12或24小时[2]。

药物处理前,星形胶质细胞在OGD处理前24小时用GK(50 μM)预处理。在某些实验中,在OGD处理前24小时,除了GK外,还加入了AMPK抑制剂Compound C(10 μM)。在 OGD 后 24、48、72 和 96 小时,使用 CCK-8 法评估细胞活力:向每个孔中加入 10 μL CCK-8 试剂,在 37°C 下孵育 1 小时,并在 450 nm 处测量光密度值 [2]。

使用 EdU 法检测细胞增殖:将星形胶质细胞在含有 50 μM EdU 的培养基中培养 2 小时,用甲醇固定 15 分钟,用 0.5% Triton X-100 处理 20 分钟,用 Apollo® 反应混合物染色 30 分钟,再用 Hoechst33342 染色 30 分钟,然后观察并计数 EdU 阳性细胞 [2]。

使用 Transwell 小室实验评估细胞迁移:将迁移插入物包被纤连蛋白; OGD处理24小时后,将细胞重悬于含1% FBS的神经胶质培养基中,取100 μL细胞悬液(10^4个细胞/mL)接种于上室,计数迁移细胞[2]。

划痕实验:OGD处理后,将生长至90%汇合度的星形胶质细胞在无血清神经胶质培养基中饥饿培养24小时,然后用微量移液器吸头划痕;用PBS冲洗去除残留细胞,并在孵育后12小时和24小时拍照以测量迁移距离[2]。

Western blot分析:用冰冷的RIPA裂解缓冲液提取总蛋白;取30 μg总蛋白进行15% SDS-PAGE电泳分离,并将蛋白转移至PVDF膜;将膜用 5% 脱脂奶粉封闭,然后用针对 ATG7、LC3、Beclin-1、p62、AMPK、p-AMPK (Thr172)、mTOR、p-mTOR (Ser2448)、ULK1、p-ULK1 (Ser757)、GFAP 和 β-actin 的一抗进行孵育,随后用 HRP 标记的二抗进行孵育;检测信号并分析条带强度 [2]。
参考文献

[1]. Ginkgolide K promotes astrocyte proliferation and migration after oxygen-glucose deprivation via inducing protective autophagy through the AMPK/mTOR/ULK1 signaling pathway. Eur J Pharmacol. 2018 Aug 5;832:96-103.

其他信息
银杏内酯K (GK) 是从银杏叶中提取的银杏内酯B的衍生物。由于其神经保护作用,GK已被用于治疗缺血性脑卒中。本研究发现,GK通过AMPK/mTOR/ULK1信号通路诱导保护性自噬,促进氧糖剥夺和复氧后星形胶质细胞的增殖和迁移,提示GK可能是一种治疗脑缺血/再灌注损伤的潜在药物[2]。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C20H22O9
分子量
406.39
精确质量
406.126
CAS号
153355-70-5
PubChem CID
101553595
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.6±0.1 g/cm3
沸点
743.5±60.0 °C at 760 mmHg
闪点
269.8±26.4 °C
蒸汽压
0.0±5.6 mmHg at 25°C
折射率
1.649
LogP
0.48
tPSA
129
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
9
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
29
分子复杂度/Complexity
946
定义原子立体中心数目
9
SMILES
CC1=C2[C@H]([C@@H]([C@@]34[C@@]25C(=O)O[C@@H]3C[C@H]([C@@]46[C@H](C(=O)O[C@H]6O5)O)C(C)(C)C)O)OC1=O
InChi Key
MGXAKXRVQRODDX-GNQXGQJISA-N
InChi Code
InChI=1S/C20H22O9/c1-6-9-10(27-13(6)23)11(21)19-8-5-7(17(2,3)4)18(19)12(22)14(24)28-16(18)29-20(9,19)15(25)26-8/h7-8,10-12,16,21-22H,5H2,1-4H3/t7-,8+,10+,11-,12-,16-,18-,19-,20-/m0/s1
化学名
(1R,3R,6R,7S,8S,10R,11R,12R,13R)-8-tert-Butyl-6,12-dihydroxy-16-methyl-2,4,14,19-tetraoxahexacyclo[8.7.2.01,11.03,7.07,11.013,17]nonadec-16-ene-5,15,18-trione
别名
GKGinkgolide K
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~123.04 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中,混合均匀。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;再向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.12 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.4607 mL 12.3035 mL 24.6069 mL
5 mM 0.4921 mL 2.4607 mL 4.9214 mL
10 mM 0.2461 mL 1.2303 mL 2.4607 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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