| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Dystrophin (DMD) pre-mRNA. Golodirsen is an antisense oligonucleotide that binds to a specific sequence in exon 53 of the dystrophin pre-mRNA. By sterically blocking the spliceosome's access to this exon, it induces the exclusion (skipping) of exon 53 from the final mature mRNA. This restores the disrupted open reading frame (ORF) in patients with certain deletions (e.g., deletions of exon 50, 52, or 48-50). The mechanism converts a severe Duchenne phenotype to a milder, Becker-like phenotype by allowing the production of a shorter, internally deleted but partially functional dystrophin protein. The induction of dystrophin synthesis is the primary therapeutic effect.
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| 体外研究 (In Vitro) |
Golodirsen选择性地与肌营养不良蛋白前体mRNA的第53号外显子结合，阻止其被包含在最终的mRNA产物中。通过省略第53号外显子，mRNA的阅读框得以恢复，并产生一种部分内部缺失但C端和N端区域完整的肌营养不良蛋白[2]。
戈洛地尔森的无细胞检测方法与其他PMO类似。它并非酶抑制剂，而是与RNA结合。通过将PMO与一条对应于外显子53中靶序列的合成RNA寡核苷酸（通常为20-30个碱基）混合，测定其与互补RNA靶标的杂交效率。将混合物加热（25-95℃），并监测260 nm处的吸光度以确定熔解温度（Tm）。较高的Tm值（>60℃）表明结合稳定。由于PMO不募集RNase H，而是通过空间位阻发挥作用，因此RNase H切割试验不适用。通过检测与错配RNA序列的结合来验证其特异性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在基于细胞的检测中，golodirsen 用于 DMD 患者来源的成肌细胞，这些细胞具有可发生外显子 53 跳跃的缺失突变（例如，外显子 50 或外显子 52 的缺失）。细胞在分化培养基中培养以形成肌管。将 golodirsen 添加到培养基中（由于 PMO 无需转染即可被细胞渗透，因此可自由摄取，但摄取速度较慢），浓度为 0.1-100 uM，持续 48-96 小时。使用位于外显子 51 和 55 的引物，通过 RT-PCR 检测外显子跳跃。外显子 53 跳跃的百分比通过毛细管电泳进行定量。通过蛋白质印迹法和免疫荧光染色检测功能性肌营养不良蛋白，以确认其膜定位。Golodirsen 通常可将肌营养不良蛋白的表达恢复至正常水平的 1-5%，这被认为具有临床意义。外显子 53 跳跃的 EC50 值在低微摩尔范围内。
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| 酶活实验 |
可以使用微基因构建体在无细胞剪接分析中评估Golodirsen的活性。构建一个包含人类DMD基因52-54号外显子及其侧翼内含子的质粒。在体外转录该微基因以产生前体mRNA。将前体mRNA与添加了ATP和能量再生系统的核提取物（例如，来自HeLa细胞的核提取物）一起孵育。向反应中加入Golodirsen（0.1-10 uM）。2-4小时后，提取RNA，并使用覆盖52-54号外显子的引物进行RT-PCR。将产物进行凝胶电泳，以观察跳跃（缺失53号外显子）产物与全长产物。该分析直接证明了反义寡核苷酸抑制了53号外显子处的剪接体组装。
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| 细胞实验 |
细胞实验采用来自DMD患者的原代人成肌细胞，这些患者携带可发生外显子53跳跃的突变（例如，外显子48-50缺失、外显子52缺失）。将细胞接种于6孔或24孔板中，并在含2%马血清的DMEM培养基中分化为肌管，培养5-7天。在分化的最后48-72小时内，分别加入浓度为1、3、10、30和100 uM的Golodirsen。使用Trizol试剂提取RNA。采用嵌套RT-PCR定量外显子跳跃，首先进行一级PCR（外显子51正向引物，外显子55反向引物），然后进行二级PCR（使用荧光标记引物）。通过毛细管电泳分离PCR产物。根据峰面积计算跳跃百分比。采用单克隆抗体（DYS1、DYS2 或 DYS3）进行蛋白质印迹法定量肌营养不良蛋白，并以 α-辅肌动蛋白或 GAPDH 进行标准化。检测限通常低于正常值的 1%。肌管培养物的免疫荧光染色可显示肌营养不良蛋白在肌膜上的定位。
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| 动物实验 |
在mdx52小鼠模型中评估了golodirsen的体内疗效。该小鼠模型缺失第52外显子，且可进行第53外显子跳跃。小鼠接受golodirsen治疗，剂量分别为3、10、30或100 mg/kg，每周两次静脉注射（IV）或皮下注射（SC），持续4-12周。主要终点是骨骼肌（股四头肌、膈肌、心脏）中肌营养不良蛋白的恢复情况，通过Western blot和免疫荧光法进行检测。功能测试包括握力、转棒试验和跑步机疲劳试验。血清肌酸激酶（CK）水平作为肌肉损伤的生物标志物进行检测。肌肉切片的组织学分析包括H&E染色以观察中心核和纤维化（例如，天狼星红染色）。研究表明，Golodirsen 可使 mdx52 小鼠产生显著的肌营养不良蛋白表达（正常水平的 1-5%）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
在临床前药代动力学研究中，戈洛地尔森与其他PMO类似，血浆半衰期较短（小鼠为2-4小时），但在肌肉组织中滞留时间较长（数天至数周）。皮下或静脉给药后，主要分布于肾脏、肝脏和肌肉。PMO通过内吞作用和溶酶体降解清除。它不经CYP450酶代谢，因此药物相互作用极少。主要清除途径是尿液排泄。在人体中，批准的给药方案为每周一次静脉输注30 mg/kg。血浆末端半衰期约为2-5小时，但药效学效应（肌营养不良蛋白生成）持续存在。血浆AUC与剂量成正比增加。由于其高分子量（约8,647 Da）和亲水性，口服吸收受到限制。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在临床前毒理学研究中，golodirsen总体耐受性良好。动物试验的主要结果与PMO类药物的典型效应相关：高剂量下出现肾小球肾炎和肾小管空泡化，但这些症状是可逆的。未观察到明显的肝毒性、神经毒性或心脏毒性。在人体临床试验（I/II期4053-101试验和II/III期ESSENCE试验）中，最常见的不良事件为头痛、发热、咳嗽、呕吐和鼻咽炎。观察到注射部位反应和蛋白尿（短暂性）。未报告与药物相关的严重不良事件或死亡病例。该药物不具有遗传毒性。2022年，FDA扩大了golodirsen的适应症范围，使其适用于所有适合进行53号外显子跳跃手术的DMD患者。目前正在监测其长期安全性。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Vyondys 53（golodirsen）于2019年12月获得美国食品药品监督管理局（FDA）加速批准，用于治疗杜氏肌营养不良症患者，这些患者需携带已确诊的肌营养不良蛋白基因突变，且该突变可进行第53外显子跳跃。该药物由Sarepta Therapeutics公司研发。批准的依据是肌营养不良蛋白产量增加这一替代终点。其CAS号为1422959-91-8，分子量约为8647.00。它是一种合成的反义寡核苷酸，能够恢复阅读框。该药物通常以冻干粉末或溶液的形式提供，用于研究用途。该化合物不可用于人体实验室研究。给药方案为每周一次，每次30 mg/kg，静脉输注。
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| CAS号 |
1422959-91-8
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O : ~100 mg/mL (~11.56 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 50 mg/mL (5.78 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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