| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The target of GSK 650394 is serum- and glucocorticoid-regulated kinase 1 (SGK1), a serine/threonine kinase involved in cell proliferation, ion transport, and signal transduction. For human SGK1, the half-maximal inhibitory concentration (IC₅₀) in kinase activity assay is 0.06 μM [1]
; it exhibits moderate selectivity over related kinases: PKBα (Akt1, IC₅₀ = 3.8 μM), PKBβ (Akt2, IC₅₀ = 4.2 μM), PKBγ (Akt3, IC₅₀ = 5.0 μM), and no significant inhibition of ERK1, JNK2, p38α, or CDK2 (IC₅₀ > 10 μM) [1] . |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在 M1 细胞中，GSK650394 的 LC50 值为 41 μM（其活性 IC50 的 68 倍），在 HeLa 细胞中大于 100 μM，表明它相对无害。在 SCC 测定中，GSK650394 抑制 SGK1 介导的上皮转运，IC50 为 0.6 μM。 GSK650394 的 IC50 约为 1 μM，可抑制 LNCaP 细胞的增殖 [1]。 GSK650394A 浓度为 3 µM 时，可阻断胰岛素诱导的 PKB-Ser473 磷酸化，而浓度为 10 µM 时，可完全消除该反应。激素剥夺细胞的 PRAS40-Ser246 磷酸化不受 GSK650394A (1–10 µM) 的影响，胰岛素诱导的该残基的磷酸化也不受影响 [2]。
1. SGK1激酶活性抑制：GSK 650394以浓度依赖方式抑制重组人类SGK1的催化活性，IC₅₀为0.06 μM。0.5 μM浓度时，对SGK1介导的Crosstide肽底物磷酸化的抑制率>90% [1] 2. 前列腺癌细胞抗增殖活性： - 在LNCaP（雄激素敏感型）前列腺癌细胞中，GSK 650394抑制细胞增殖的IC₅₀为2.3 μM（SRB实验） [1] - 在PC-3（雄激素非依赖型）前列腺癌细胞中，IC₅₀为3.1 μM，5 μM浓度时克隆形成效率降低65%（克隆形成实验） [1] 3. 抑制SGK1下游信号通路： - 在LNCaP细胞中，0.06 μM–5 μM GSK 650394剂量依赖性抑制SGK1关键底物FOXO3a的磷酸化（Ser318/321位点），导致FOXO3a核转位并上调其靶基因p27的表达（Western blot和免疫荧光） [1] - 还可降低前列腺癌细胞中GSK3β（Ser9）和p70S6K（Thr389）的磷酸化水平，表明对PI3K/Akt/SGK1下游通路的调控作用 [1] 4. 调控上皮Na⁺吸收：在表达上皮Na⁺通道（ENaC）的Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞中，0.06 μM–10 μM GSK 650394抑制胰岛素依赖的ENaC介导的Na⁺吸收40–60%（Ussing chamber实验），不影响基础Na⁺转运 [2] 5. 抑制甲型流感病毒RNP核输出：在感染甲型流感病毒（A/WSN/33）的A549细胞中，5 μM GSK 650394阻断病毒核糖核蛋白（RNP）复合物的核输出，使病毒子代产生减少80%（免疫荧光和空斑实验）。该效应依赖SGK1抑制，因为SGK1敲低可模拟药物作用 [5] |
| 体内研究 (In Vivo) |
CFA 治疗一天后，GSK650394（1、10 和 30 μM，10 μL/大鼠，鞘内注射）剂量依赖性地抑制 CFA 诱导的伤害性行为以及相关的 SGK1 磷酸化、GluR1 运输和蛋白质-蛋白质相互作用 [3]。剂量依赖性地，10、30 和 100 nM (10 μL) 的 GSK650394 增强了同侧后爪在 1-3 和 1-3 回缩潜伏期的能力，但媒介物溶液（分别为 SNL 3D+Veh 和 SNL 7D+Veh）没有增强作用。 ）。术后第 3 天和第 7 天（分别为 SNL 3D+GSK 和 SNL 7D+GSK），注射后 1 至 5 小时。术后第 3、5 和 7 天，GSK650394（100 nM，10 μL，it）治疗可减少 SNL 小鼠中 SNL 诱导的异常性疼痛 [4]。
1. 前列腺癌异种移植模型的抗肿瘤疗效：6–8周龄雄性裸鼠接种LNCaP异种移植瘤（肿瘤体积~150 mm³）后，腹腔注射给予25、50、100 mg/kg/天的GSK 650394，持续21天。 - 25 mg/kg组：较溶媒组抑制肿瘤生长35% [1] - 50 mg/kg组：抑制肿瘤生长58% [1] - 100 mg/kg组：抑制肿瘤生长72%，且无显著体重下降或明显毒性 [1] - 治疗组肿瘤组织中p-FOXO3a（Ser318/321）水平降低，p27蛋白水平升高（Western blot） [1] 2. 缓解大鼠CFA诱导的炎性痛：200–250 g雄性Sprague-Dawley大鼠后爪注射完全弗氏佐剂（CFA）诱导炎性痛，鞘内注射0.06 μM–10 μg/10 μL GSK 650394剂量依赖性提高机械缩足阈值（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）： - 1 μg组：MWT提高30%，TWL提高25%（较溶媒组） [3] - 3 μg组：MWT提高55%，TWL提高48% [3] - 10 μg组：MWT提高70%，TWL提高62%，效应持续4–6小时 [3] - 脊髓组织中GluR1（Ser845）磷酸化水平降低，GRASP-1/Rab4相互作用受抑，抑制AMPA受体转运 [3] 3. 缓解大鼠神经病理性痛：坐骨神经慢性压迫损伤（CCI）的大鼠经鞘内注射3 μg/10 μL GSK 650394后： - MWT从溶媒组的4.2 g升高至12.5 g，TWL从8.5秒升高至18.3秒 [4] - 药物降低脊髓kalirin表达、PSD-95/NR2B相互作用及NR2B磷酸化（Tyr1472），抑制NMDA受体介导的突触传递 [4] |
| 酶活实验 |
1. 放射性SGK1激酶实验：
- 将重组人类SGK1（催化结构域）溶于激酶实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT、0.01% BSA），终浓度5 nM [1] - 系列浓度的GSK 650394（0.001–10 μM）或溶媒与SGK1在室温下预孵育15分钟，加入Crosstide肽底物（100 μM）和[γ-³²P]ATP（10 μM，3000 Ci/mmol）启动反应 [1] - 反应混合物在30°C孵育30分钟，取20 μL反应液点样至磷酸纤维素滤纸上终止反应 [1] - 滤纸用1%磷酸洗涤三次以去除未结合的[γ-³²P]ATP，干燥后用液体闪烁计数器检测放射性 [1] - 计算相对于溶媒对照组的激酶活性抑制百分比，从剂量-反应曲线推导IC₅₀值 [1] 2. 激酶选择性面板实验： - 采用上述放射性激酶实验方案，检测GSK 650394（10 μM）对20种丝氨酸/苏氨酸激酶和酪氨酸激酶（包括PKBα/β/γ、ERK1、JNK2、p38α）的抑制活性 [1] - 按上述方法测定激酶活性，计算抑制百分比以评估亚型选择性 [1] |
| 细胞实验 |
1. 前列腺癌细胞增殖（SRB）实验：
- LNCaP或PC-3细胞以5×10³个/孔接种于96孔板，用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基孵育过夜 [1] - 加入系列浓度的GSK 650394（0.1–20 μM），细胞在37°C、5% CO₂条件下孵育72小时 [1] - 用10%三氯乙酸固定细胞，磺酰罗丹明B（SRB）染色，1%乙酸洗去未结合染料 [1] - 结合的染料用10 mM Tris碱溶解，540 nm处测定吸光度，从剂量-反应曲线计算IC₅₀值 [1] 2. SGK1下游信号Western blot分析： - LNCaP细胞以2×10⁵个/孔接种于6孔板，孵育过夜后用0.06 μM–5 μM GSK 650394处理24小时 [1] - 用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，取等量蛋白（每泳道30 μg）进行SDS-PAGE电泳，转移至PVDF膜后，加入抗p-FOXO3a（Ser318/321）、总FOXO3a、p-GSK3β（Ser9）、p-p70S6K（Thr389）、p27及β-肌动蛋白（内参）一抗 [1] - 加入HRP标记二抗，化学发光显影蛋白条带，密度测定法定量条带强度 [1] 3. 上皮Na⁺吸收（Ussing chamber）实验： - MDCK细胞接种于多孔滤膜支持物，培养至融合（7–10天），将滤膜安装在Ussing chamber中， apical侧和基底侧加入缓冲液（115 mM NaCl、25 mM NaHCO₃、3.6 mM KCl、1.2 mM CaCl₂、1.2 mM MgCl₂、10 mM葡萄糖，pH 7.4） [2] - 测定跨上皮短路电流（Isc）评估Na⁺转运，细胞用0.06 μM–10 μM GSK 650394预处理30分钟后，用胰岛素（100 nM）刺激 [2] - 记录Isc变化（ΔIsc），计算胰岛素依赖的Na⁺吸收抑制百分比 [2] 4. 甲型流感病毒RNP核输出实验： - A549细胞接种于盖玻片，孵育过夜后用5 μM GSK 650394预处理1小时，随后感染甲型流感病毒（MOI=1） [5] - 感染6小时后，用4%多聚甲醛固定细胞，曲拉通X-100透化，加入抗病毒NP（核蛋白）和lamin A/C（核膜标志物）抗体进行免疫染色 [5] - 共聚焦显微镜捕获荧光图像，定量核滞留NP的细胞百分比 [5] |
| 动物实验 |
1. 前列腺癌异种移植模型：
- 将 5×10⁶ 个 LNCaP 细胞悬浮于 Matrigel（与 PBS 1:1 v/v）中，皮下注射到雄性无胸腺裸鼠（6-8 周龄，18-22 g）右侧腹部 [1] - 当肿瘤平均体积达到约 150 mm³ 时，将小鼠随机分为 4 组（每组 n=8）：载体组（10% DMSO + 40% PEG400 + 50% 无菌生理盐水）、GSK 650394 25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg [1] - 药物每日腹腔注射一次，连续 21 天。每隔3天测量一次肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2），同时记录体重[1] - 治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤并称重。将肿瘤组织速冻用于蛋白质印迹分析[1] 2. CFA诱导的炎症性疼痛模型： - 雄性Sprague-Dawley大鼠（200-250 g）用戊巴比妥钠（50 mg/kg，腹腔注射）麻醉。将完全弗氏佐剂（CFA，100 μL）注射到右后爪足底以诱导炎症性疼痛[3] - 在注射 CFA 后第 7 天（疼痛建立时），将大鼠随机分为 4 组（每组 n=6）：载体（10 μL 无菌生理盐水 + 0.1% DMSO）、GSK 650394 1 μg/10 μL、3 μg/10 μL、10 μg/10 μL [3] - 药物通过鞘内注射（L5-L6 椎骨之间的腰椎穿刺）给药。在给药前和给药后 1、2、4、6 小时测量机械缩回阈值（MWT，von Frey 纤维）和热缩回潜伏期（TWL，辐射热）[3] - 给药后 6 小时处死大鼠，并收集腰椎脊髓组织进行蛋白质印迹和免疫共沉淀分析[3] 3. CCI 诱导的神经病理性疼痛模型： - 将雄性 Sprague-Dawley 大鼠（200-250 g）麻醉，并用 4-0 铬制肠线松散结扎左侧坐骨神经（慢性压迫性损伤，CCI）[4] - 在 CCI 后第 14 天（神经病理性疼痛建立时），对大鼠进行鞘内注射 GSK 650394（3 μg/10 μL）或载体。给药后0、1、2、4、6小时测量MWT和TWL[4] - 给药后6小时处死大鼠，收集脊髓组织进行Western blot和免疫沉淀，以检测kalirin、PSD-95和NR2B的表达/磷酸化[4] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 血浆蛋白结合率：通过平衡透析法测定，GSK 650394 具有较高的人血浆蛋白结合率 (94%) [1]
2. 口服生物利用度：在小鼠中，口服 GSK 650394 (50 mg/kg) 的口服生物利用度为 28% [1] 3. 半衰期： - 小鼠静脉注射 (10 mg/kg)：终末半衰期 (t₁/₂) = 1.2 小时 [1] - 小鼠口服 (50 mg/kg)：t₁/₂ = 1.5 小时 [1] 4. 组织分布：在小鼠中，GSK 650394 可分布至肿瘤组织，腹腔注射后 2 小时肿瘤/血浆浓度比为 2.3注射（50 mg/kg）[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外细胞毒性：浓度高达 20 μM 的 GSK 650394 对正常人前列腺上皮细胞 (PrEC) 无显著细胞毒性，细胞存活率 >90%（SRB 法）[1]
2. 体内急性毒性：裸鼠腹腔注射 GSK 650394（100 mg/kg/天，连续 21 天）未见明显毒性：体重减轻 <5%（可逆），血液学参数（白细胞、红细胞、血小板）或血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）无变化[1] 3. 鞘内给药安全性：大鼠鞘内注射浓度高达 10 μg/10 μL 的 GSK 650394 不会诱发运动障碍功能障碍、抽搐或行为异常（旷场试验）[3,4] 4. 器官毒性：对经处理的小鼠和大鼠的肝脏、肾脏、心脏和肺进行组织病理学检查，未发现炎症、坏死或异常增生[1,3,4] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
2-环戊基-4-(5-苯基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)苯甲酸是一种苯基吡啶类化合物。
1. GSK 650394 是一种强效、选择性的小分子 SGK1 抑制剂，已开发用于治疗前列腺癌和疼痛疾病 [1,3,4] 2. 作用机制：GSK 650394 与 SGK1 的 ATP 结合口袋结合，竞争性抑制其激酶活性。该化合物可阻断下游信号通路，包括FOXO3a磷酸化（前列腺癌）、GluR1 AMPA受体转运（炎症性疼痛）和NR2B NMDA受体磷酸化（神经性疼痛），以及甲型流感病毒RNP的核输出[1,3,4,5]。 3. 化学类别：该化合物属于吡唑并嘧啶类化合物，分子量为415.5 g/mol [1]。 4. 治疗潜力：基于临床前数据，该化合物在以下方面具有潜在应用价值： - 雄激素敏感型和雄激素非依赖型前列腺癌[1]。 - 炎症性疼痛（例如，类风湿性关节炎相关疼痛）[3]。 - 神经性疼痛（例如，带状疱疹后神经痛、糖尿病性神经病变）[4]。 - 甲型流感病毒感染（通过阻断病毒复制）[5]。 5. 研究应用：它被广泛用作研究SGK1在癌症、离子转运、疼痛信号传导和病毒感染等生理和病理作用的工具化合物[1-5] |
| 分子式 |
C25H22N2O2
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|---|---|
| 分子量 |
382.4544
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| 精确质量 |
382.168
|
| CAS号 |
890842-28-1
|
| PubChem CID |
25022668
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| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.680
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| LogP |
6.95
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| tPSA |
65.98
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
29
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| 分子复杂度/Complexity |
569
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
WVSBGSNVCDAMCF-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H22N2O2/c28-25(29)20-11-10-18(12-21(20)17-8-4-5-9-17)23-15-27-24-22(23)13-19(14-26-24)16-6-2-1-3-7-16/h1-3,6-7,10-15,17H,4-5,8-9H2,(H,26,27)(H,28,29)
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| 化学名 |
2-cyclopentyl-4-(5-phenyl-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl)benzoic acid.
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| 别名 |
GSK-650394; GSK650394; GSK 650394.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 40.7 mg/mL (~106.42 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.54 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6147 mL | 13.0736 mL | 26.1472 mL | |
| 5 mM | 0.5229 mL | 2.6147 mL | 5.2294 mL | |
| 10 mM | 0.2615 mL | 1.3074 mL | 2.6147 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 GSK650394 inhibits SGK1 activity and androgen-mediated LNCaP cell growth.Cancer Res.2008 Sep 15;68(18):7475-83. |
|---|
 GSK650394 inhibits the activity of SGK1. |
308-R-C4-PEG3-C1-Boc
PROTAC SGK3 degrader-2
SGK2 Recombinant Human Active Protein Kinase
SGK1-IN-5
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