| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
JMJD3/KDM6B (IC50 = 8.6); UTX/KDM6A (IC50 = 6.6 μM)
GSK-J4 is a prodrug of the selective histone H3K27 demethylase inhibitor GSK-J1. It targets the KDM6 subfamily of jumonji (JMJ) histone demethylases, specifically JMJD3 and UTX, which demethylate H3K27me3. GSK-J1 (the active form) shows an IC₅₀ of 60 nM against JMJD3 in an AlphaScreen assay, and selectively inhibits JMJD3 and UTX over other JMJ family demethylases and a panel of 100 protein kinases (no significant inhibition at 30 µM) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 Flag-JMJD3 转染的 HeLa 细胞中，GSK-J4 盐酸盐通过避免 JMJD3 诱导的核 H3K27me3 免疫染色减少而表现出细胞活性。在未转染的细胞中，GSK-J4 给药提高了总核 H3K27me3 的水平。肿瘤坏死因子-α (TNF-α) 是 16 种 LPS 驱动的细胞因子之一，GSK-J4 可显着降低其表达 [1]。在小鼠足细胞中，GSK-J4 盐酸盐使 H3K27me3 的量增加了三倍以上。在培养的足细胞中，GSK-J4 降低 Jagged-1 蛋白和 mRNA 的水平，同时升高 H3K27me3。同样，当足细胞接受去分化诱导剂 TGF-β1 处理时，GSK-J4 预处理可抑制细胞内 N1-ICD 水平的增加、α-SMA 的增加以及足细胞蛋白 mRNA 水平的降低 [2]。盐酸盐 GSK-J4 虽然对 Th1 和 Th17 细胞分化影响不大，但盐酸盐 (10, 25 nM) 对 DC 起作用，可增强 Treg 细胞的分化、稳定性和抑制能力 [3]。盐酸 GSK-J4 盐酸可抑制 TGF-β1 诱导的 JMJD3 表达 [4]。盐酸盐 GSK-J4 在雌性胚胎干细胞中，盐酸盐抑制 Xist、Nodal 和 HoxC13 的 H3K4 去甲基化 [5]。
GSK-J4（GSK-J1的乙酯前药）可被巨噬细胞酯酶快速水解，在细胞内释放活性酸形式GSK-J1。在人原代巨噬细胞中，通过PCR阵列评估，GSK-J4（30 µM）能显著降低LPS诱导的34种细胞因子中16种的表达，包括TNF-α。GSK-J4以剂量依赖性方式抑制TNF-α蛋白的产生，IC₅₀为9 µM，而其非活性异构体GSK-J5则无此效果。在转染了Flag-JMJD3的HeLa细胞中，GSK-J4（25 µM）能维持核内H3K27me3的染色信号，而GSK-J5则不能。GSK-J4还能阻断来自类风湿关节炎患者的巨噬细胞产生TNF-α[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
盐酸盐 GSK-J4 在糖尿病小鼠中，给予盐酸盐（10 mg/kg；腹腔注射；每周 3 次，持续 10 周）以预防肾损伤 [2]。盐酸盐 GSK-J4 在小鼠模型中，盐酸盐（0.5 mg/kg，腹腔注射）可显着减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎的严重程度并推迟其发展[3]。
在BALB/c小鼠的阿霉素诱导肾毒性模型（局灶节段性肾小球硬化模型）中，给予 GSK-J4（10 mg/kg，腹腔注射，每周三次，持续10天）可显著减轻蛋白尿的升高。治疗还使肾脏H3K27me3含量增加约4倍（通过肾组织匀浆的免疫印迹显示），并通过双重免疫荧光显微镜检测到podocyte核内H3K27me3水平增加。GSK-J4治疗限制了肾小球Jagged-1的上调和podocyte蛋白nephrin的丢失。在db/db小鼠（肥胖的2型糖尿病）的糖尿病肾病模型中，用GSK-J4治疗（10 mg/kg，腹腔注射，每周三次，持续10周）减轻了肾小球损伤的发展。具体来说，它减少了蛋白尿和肾小球系膜内基质的积聚，减轻了podocyte足突融合（通过透射电子显微镜测量），并降低了肾小球α-SMA和Jagged-1的上调。在阿霉素模型的晚期干预研究中，在注射阿霉素4天后（此时podocyte H3K27me3水平已经降低，蛋白尿已形成）开始GSK-J4治疗（10 mg/kg，腹腔注射，在第4、7、11天），防止了podocyte H3K27me3的进一步丢失，并在随后的8天内阻止了蛋白尿的进展。在肾次全切除（SNx）模型中的类似延迟干预也减轻了肾小球Jagged-1含量的增加和蛋白尿 [2] |
| 酶活实验 |
组蛋白去甲基化酶的jumonji（JMJ）家族是Fe2+-和α-酮戊二酸依赖性加氧酶，是调控转录染色质复合物的重要组成部分。这些酶在甲基化状态和序列特异性背景下使组蛋白中的赖氨酸残基去甲基化。人们已经付出了相当大的努力来获得组蛋白赖氨酸去甲基化酶在真核转录、基因组完整性和表观遗传以及发育、生理和疾病中的作用的机制理解。然而，由于缺乏任何选择性抑制剂，JMJ酶的去甲基化酶活性在调节细胞反应中的相关性仍知之甚少。在这里，我们提出了一种结构导向的小分子和化学蛋白质组学方法来阐明H3K27me3特异性去甲基化酶亚家族（KDM6亚家族成员JMJD3和UTX）的功能作用。人和小鼠JMJD3的配体结构为KDM6去甲基酶亚家族识别辅因子、底物和抑制剂的特异性决定因素提供了新的见解。我们利用这些结构特征产生了第一个对H3K27me3特异性JMJ亚家族具有选择性的小分子催化位点抑制剂。我们证明，这种抑制剂以一种新的方式结合，并减少脂多糖诱导的人类原代巨噬细胞产生的促炎细胞因子，这一过程依赖于JMJD3和UTX。我们的研究结果解决了与H3K27特异性JMJ在调节疾病相关炎症反应中的催化功能相关的模糊性，并为设计小分子抑制剂以允许在JMJ家族中进行选择性药物干预提供了鼓励。[1]
使用AlphaScreen法检测JMJD3抑制活性。该法通过使用识别去甲基化产物的抗体，检测重组JMJD3对生物素化H3K27me3肽段的去甲基化作用。在此检测中，GSK-J1的IC₅₀确定为60 nM。针对其他JMJ去甲基化酶的选择性通过热位移实验、基于质谱的去甲基化实验以及基于抗体的实验进行评估。在热位移实验中，仅UTX和JMJD3显示出显著的稳定化（>1°C），表明GSK-J1对KDM6亚家族具有选择性结合[1] |
| 细胞实验 |
对于细胞内化合物定量，用人原代巨噬细胞分别与30 µM的GSK-J1、GSK-J2、GSK-J4或GSK-J5处理1小时。裂解细胞后，测量裂解液中GSK-J1和GSK-J2的浓度。与直接给予酸形式相比，酯前药GSK-J4和GSK-J5在细胞内产生了更高水平的活性酸。对于细胞因子分析，来自健康供体的人原代巨噬细胞先用化合物（例如30 µM GSK-J4或GSK-J5）预处理1小时，然后用LPS刺激2-6小时。通过ELISA定量上清液中的TNF-α蛋白，并通过定量PCR阵列分析细胞因子的mRNA表达。对于H3K27me3免疫染色，将HeLa细胞转染Flag-JMJD3，用25 µM GSK-J4或GSK-J5处理，固定后用抗Flag和抗H3K27me3抗体染色，通过荧光显微镜采集图像。对于siRNA敲低实验，将人原代巨噬细胞转染乱序、JMJD3特异性或UTX特异性的siRNA。48小时后，用化合物处理并用LPS刺激细胞，然后测量TNF-α的产生[1]
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| 动物实验 |
Animal/Disease Models: Eightweeks old male db/m and db/db mice on a BKS background[2]
Doses: 10 mg/kg Route of Administration: ip; thrice-weekly for 10 weeks Experimental Results: Attenuated the development of kidney disease in diabetic mice. For the adriamycin nephrotoxicity model in BALB/c mice, eight-week-old male BALB/c mice received a single tail-vein injection of adriamycin (10 mg/kg in PBS) or PBS (vehicle). Mice were then randomly allocated to receive GSK-J4 (10 mg/kg) or vehicle (0.1% DMSO in PBS) by intraperitoneal (i.p.) injection thrice weekly for 10 days (total of 5 injections). For the late-intervention study, mice received adriamycin as above, and four days later, they were stratified by albuminuria level to receive GSK-J4 (10 mg/kg) or vehicle by i.p. injection on days 4, 7, and 11. For the diabetic nephropathy model, eight-week-old male db/m (non-diabetic control) and db/db (diabetic) mice were randomly allocated to receive GSK-J4 (10 mg/kg in 0.1% DMSO in PBS) or vehicle alone by thrice-weekly i.p. injections for 10 weeks. For the subtotal nephrectomy (SNx) delayed intervention model, C57BL/6 mice underwent SNx surgery. Six weeks later, they were randomized to receive GSK-J4 (10 mg/kg, thrice weekly i.p.) or vehicle for an additional 4 weeks. Urine was collected using metabolic cages for albumin and creatinine measurement [2] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
GSK-J4 是一种乙酯前药，旨在提高其细胞渗透性，优于极性羧酸 GSK-J1。在人原代巨噬细胞中，给予 30 µM GSK-J4 1 小时后，细胞内 GSK-J1 浓度达到 11.8 ± 0.6 µM，而直接给予 30 µM GSK-J1 则仅使细胞内 GSK-J1 浓度达到 1.6 ± 1.6 µM。这证实了前药在细胞内能被酯酶高效水解为活性酸 [1]。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在所用的实验条件下，用浓度高达 30 µM 的 GSK-J4 处理人原代巨噬细胞，未观察到细胞毒性（通过细胞毒性试验评估）。[1]
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
组蛋白修饰在正常发育过程中控制细胞命运的决定，并在疾病过程中导致细胞去分化。本研究旨在探究组蛋白动态变化对通常处于静止状态的成年肾小球足细胞分化表型的影响程度。为此，我们研究了改变足细胞中抑制性组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）标记平衡所产生的后果。阿霉素肾毒性和部分肾切除术（SNx）研究表明，足细胞中组蛋白甲基化酶EZH2的缺失会降低H3K27me3水平，并使小鼠对肾小球疾病更加敏感。H3K27me3在足细胞中Notch配体Jag1的启动子区域富集，而通过抑制或敲低EZH2解除对Jag1的抑制会促进足细胞去分化。相反，抑制含Jumonji C结构域的去甲基化酶Jmjd3和UTX可增加足细胞的H3K27me3含量，并减轻阿霉素肾毒性、肾切除术（SNx）和糖尿病引起的肾小球疾病。局灶节段性肾小球硬化症或糖尿病肾病患者的肾小球足细胞表现出H3K27me3含量降低和UTX含量升高。与人类疾病类似，抑制Jmjd3和UTX可减缓已建立肾小球损伤的小鼠的肾病进展，并降低H3K27me3水平。这些发现共同表明，表面上稳定的染色质修饰在静止细胞中可以受到动态调控，并且表观遗传重编程可以通过抑制发育通路的重新激活来改善肾小球疾病的预后。[2]
GSK-J4是GSK-J1的乙酯前药，GSK-J1是首个H3K27me3特异性去甲基化酶JMJD3和UTX（KDM6亚家族）的选择性催化位点抑制剂。GSK-J1是通过基于JMJD3与底物和辅因子共晶结构的结构导向方法发现的。GSK-J4在实验中用于抑制细胞内JMJD3/UTX的去甲基化酶活性。其无活性的区域异构体GSK-J5用作重要的阴性对照。该研究表明，JMJD3 和 UTX 介导的 H3K27 去甲基化是人原代巨噬细胞中促炎基因（例如 TNF-α）激活所必需的。使用 GSK-J4 进行抑制可阻断 LPS 诱导的 TNFA 转录起始位点 H3K27me3 的丢失以及 RNA 聚合酶 II 的募集，但不影响上游 NF-κB 信号通路。这提示靶向 KDM6 去甲基化酶可能具有调节炎症反应的潜力 [1] |
| 分子式 |
C24H27N5O2.HCL
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|---|---|---|
| 分子量 |
453.96
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| 精确质量 |
453.193
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| 元素分析 |
C, 63.50; H, 6.22; Cl, 7.81; N, 15.43; O, 7.05
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| CAS号 |
1797983-09-5
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| 相关CAS号 |
GSK-J4;1373423-53-0
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| PubChem CID |
71729974
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solids at room temperature
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| tPSA |
80.2Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
8
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| 重原子数目 |
32
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| 分子复杂度/Complexity |
546
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O(CC)C(CCNC1=CC(=NC(C2=CC=CC=N2)=N1)N1CCC2=CC=CC=C2CC1)=O.Cl
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| InChi Key |
WBKCKEHGXNWYMO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H27N5O2/c1-2-31-23(30)10-14-26-21-17-22(28-24(27-21)20-9-5-6-13-25-20)29-15-11-18-7-3-4-8-19(18)12-16-29/h3-9,13,17H,2,10-12,14-16H2,1H3,(H,26,27,28)
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| 化学名 |
ethyl 3-((2-(pyridin-2-yl)-6-(1,2,4,5-tetrahydro-3H-benzo[d]azepin-3-yl)pyrimidin-4-yl)amino)propanoate hydrochloride
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 2% DMSO+dd H2O:10mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.2028 mL | 11.0142 mL | 22.0284 mL | |
| 5 mM | 0.4406 mL | 2.2028 mL | 4.4057 mL | |
| 10 mM | 0.2203 mL | 1.1014 mL | 2.2028 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
LD-110
LSD1-IN-45
DDP-38003
NCD-25
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COA
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463611831
