GSK0660

PPARβ/δ (IC50 = 22.9 μM)
Peroxisome proliferator-activated receptor beta/delta (PPARβ/δ, NR1C2): The IC50 value for human PPARβ/δ is 0.15 μM, and the IC50 values for human PPARα and PPARγ are both >10 μM[1]
- Peroxisome proliferator-activated receptor beta/delta (PPARβ/δ, NR1C2): The IC50 value for human PPARβ/δ is 0.155 μM, while the IC50 values for human PPARα and PPARγ are >10 μM[2]

体外活性：GSK0660 是 PPARβ 和 PPARδ 的有效拮抗剂，IC50 均为 155 nM，对 PPARα 和 PPARγ 几乎无活性，IC50 均 > 10 μM。GSK0660 (100 nM) 可降低 CPT1a（PPARβ/δ 靶标）基因）表达比基础载体处理水平低约 50%，但对 PDK4 表达没有影响，PDK4 表达也是骨骼肌细胞中的 PPARβ/δ 靶基因。GSK0660 (1 μM) 显着阻断 GW501516 介导的谷氨酸衰减GW501516 对 LPS 刺激的 BV-2 细胞中 ROS 生成的影响。GSK0660 (0.5 μM) 降低了 MC3T3-E1 细胞中 AMPK 和 eNOS 磷酸化水平以及 BMP-2、Runx-2 mRNA 表达。激酶测定：GSK0660 是 PPARβ 和 PPARδ 的有效拮抗剂，IC50 均为 155 nM，对 PPARα 和 PPARγ 几乎无活性，IC50 均 > 10 μM。 GSK0660 100% 拮抗 PPARβ/δ 活性，pIC50 为 6.8。 GSK0660 (100 nM) 将 CPT1a（PPARβ/δ 靶基因）表达降低约 50%，低于基础载体处理水平，但对 PDK4 表达没有影响，PDK4 也是骨骼肌细胞中的 PPARβ/δ 靶基因。细胞测定：GSK0660 溶解在 DMSO 中。通过 MTT 染料测定细胞活力。 MC3T3-E1 细胞与苯扎贝特 (1−1000 μM) 一起孵育 24、48 或 72 小时，并用 AMPK 抑制剂化合物 C (5 μM)、PPARβ 抑制剂 GSK0660 (0.5 μM)、PPARα 抑制剂 MK886 (10 μM) 或 NOS 抑制剂 L-NAME (1000 μM)，然后加入苯扎贝特 (100 μM) 孵育 48 小时。孵育后，向96孔微孔板的每孔中加入10μL MTT，并将微孔板置于37℃培养箱中4小时。

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1. 在原代人骨骼肌细胞中，GSK0660以剂量依赖性方式降低PPARβ/δ靶基因ANGPTL4和CPT1a的基础表达水平，但对PDK4的表达无影响。当人骨骼肌细胞同时用10nM的PPARβ/δ激动剂GW0742和不同浓度的GSK0660处理时，GSK0660能够与GW0742竞争，降低GW0742对PPARβ/δ靶基因表达的激动效应[1]
2. 在C2C12肌管中，用递增剂量的GSK0660处理后，脂肪酸氧化水平受到影响，与溶剂对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）[1]
3. 在含2%血清培养基中培养的人视网膜微血管内皮细胞（HRMECs）中，GSK0660（浓度分别为0.01μM、0.1μM、1.0μM）以剂量依赖性方式显著降低PPARβ/δ靶基因angptl4的mRNA表达水平（P值分别为0.0035、0.0092、0.0002）[2]
4. 对HRMEC增殖的影响：在含2%血清的培养基中培养HRMECs，用GSK0660（0.01μM、0.1μM、1.0μM）处理24小时后，血清诱导的HRMECs增殖呈剂量依赖性降低，在最高浓度（1.0μM）时增殖降低39%（P=0.0034）；当HRMECs用25ng/mL血管内皮生长因子（VEGF）和1.0μMGSK0660处理时，VEGF诱导的HRMECs增殖被抑制33.1%（P<0.0001）[2]
5. 对HRMEC管形成的影响：在含2%血清的培养基中培养的HRMECs，经GSK0660（0.1μM、1.0μM）处理后，血清诱导的平均管长度呈剂量依赖性减少，减少幅度分别为18.7%（P=0.04）和40%（P=0.0067）；当HRMECs用25ng/mL VEGF和1.0μMGSK0660处理时，VEGF诱导的管形成被抑制50.6%（P=0.0016）[2]

GSK0660 会迅速从血液中消除，并且不会在体内积聚[1]。当玻璃体内或腹膜内注射时，GSK0660 可以很好地对抗视网膜 NV。玻璃体内注射的好处包括能够将高剂量的药物输送到新生血管疾病的活跃部位；然而，这种给药方式也与有害的副作用有关，例如青光眼、白内障和眼内炎。全身给药可防止这些副作用，但由于需要重复剂量才能在患病组织中达到所需的活性药物水平，因此受到限制。此外，它使健康的组织和器官不必要地暴露于活性药物[2]。

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1. 在大鼠氧诱导视网膜病变（OIR）模型中：
- 玻璃体内注射：在出生后第14天（14(0)天）和14(3)天，给大鼠玻璃体内注射不同浓度的GSK0660（20nM、100nM、500nM），在14(6)天对视网膜前新生血管（NV）进行定量分析。结果显示，与溶剂组相比，GSK0660在20nM时使视网膜NV显著减少58.5%（P=0.0084），100nM时减少56.9%（P=0.0109），500nM时减少44.4%（P=0.0142）[2]
- 腹腔注射：在14(0)天、14(2)天和14(4)天，给大鼠腹腔注射不同剂量的GSK0660（0.2mg/kg、1.0mg/kg），14(6)天定量视网膜NV发现，与溶剂组相比，低剂量GSK0660使视网膜NV显著减少50.3%（P=0.0062），高剂量时减少59.4%（P=0.0017）[2]
2. 在大鼠OIR模型中，14(1)天玻璃体内注射500nMGSK0660后，于14(2)天收集视网膜检测Angptl4蛋白水平，结果显示GSK0660对视网膜中Angptl4蛋白的产生无影响[2]
3. 对7日龄正常空气环境饲养的大鼠，玻璃体内注射20nMGSK0660，3天后评估视网膜无血管区面积，GSK0660注射组与溶剂注射组相比，视网膜无血管区面积无显著差异，表明GSK0660对视网膜血管正常发育无影响，且无明显视网膜血管毒性[2]
4. 在大鼠OIR模型中使用GSK0660的实验过程中，药物注射组与溶剂注射组大鼠的体重无显著差异[2]

GSK0660 对 PPARα 和 PPARγ 几乎没有活性，IC50 均 > 10 μM，并且是 PPARβ 和 PPARδ 的强拮抗剂，IC50 均为 155 nM。 GSK0660 的 pIC50 为 6.8，完全抑制 PPARβ/δ 活性。虽然 PDK4 表达（骨骼肌细胞中的另一个 PPARβ/δ 靶基因）不受 GSK0660 (100 nM) 的影响，但它将 CPT1a（PPARβ/δ 靶基因）表达降低至基础载体处理水平以下约 50%。

将HRMEC以2×10⁵细胞/孔的密度接种在六孔板中后，在标准组织培养条件下进行培养。在 80% 汇合度下进行 12 小时血清饥饿期后，用 0.5% 含血清载体 (0.1% DMSO) 或 PPAR-β/δ 激动剂 GW0742（0.01、0.1 或 1.0 μM）处理细胞 6 小时。 ），或含 2% 血清的载体或 PPAR-β/δ 拮抗剂 GSK0660（0.01、0.1 或 1.0 μM）。冷PBS洗涤细胞两次后，提取总RNA。转录从培养孔中提取的总RNA以相反的方式进行。有定量RT-PCR。

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1. 原代人骨骼肌细胞基因表达检测：
- 细胞培养：将原代人骨骼肌细胞在适宜条件下培养，保证细胞正常生长存活。
- 药物处理：用不同浓度的GSK0660单独处理细胞，或与10nM GW0742联合处理细胞，同时设置溶剂对照组。
- RNA提取：药物处理一段时间后，用冷PBS清洗细胞两次，采用商品化RNA提取试剂盒按说明书操作提取总RNA。
- 基因表达分析：将提取的RNA逆转录为cDNA，然后采用Taqman实时定量聚合酶链反应（qRT - PCR）检测靶基因（ANGPTL4、CPT1a、PDK4）的表达水平，以内参基因作为参照计算基因的相对表达量[1]
2. C2C12肌管脂肪酸氧化实验：
- 细胞培养：将C2C12成肌细胞在特定培养条件下诱导分化为肌管。
- 药物处理：用递增剂量的GSK0660处理分化后的C2C12肌管，设置溶剂对照组。
- 脂肪酸氧化检测：药物处理后，采用特定检测方法测定肌管中的脂肪酸氧化水平，将结果与溶剂对照组比较，并进行统计学分析判断差异显著性[1]
3. HRMECs中angptl4 mRNA表达检测：
- 细胞接种与培养：将HRMECs以2×10^5个细胞/孔的密度接种于6孔板，在标准组织培养条件下培养至80%汇合度。
- 血清饥饿与药物处理：细胞饥饿12小时后，用含2%血清及不同浓度GSK0660（0.01μM、0.1μM、1.0μM）的培养基处理6小时，同时设置溶剂对照组（含2%血清和0.1% DMSO的培养基）。
- RNA提取与qRT - PCR：用冷PBS清洗细胞两次，采用商品化RNA提取试剂盒提取总RNA，使用高容量cDNA逆转录试剂盒将RNA逆转录为cDNA。之后进行双重qRT - PCR检测angptl4 mRNA的表达水平，以β - 肌动蛋白作为内参基因[2]
4. HRMEC增殖实验：
- 细胞接种与贴壁：将HRMECs以3×10^3个细胞/孔的密度接种于96孔板的生长培养基中，培养8小时使细胞贴壁。
- 血清饥饿与药物处理：细胞饥饿12小时后分为两组，一组用含2%血清及不同浓度GSK0660（0.01μM - 1.0μM）的培养基处理24小时，另一组用含25ng/mL VEGF及不同浓度GSK0660（0.01μM - 1.0μM）的培养基处理24小时，两组均设置溶剂对照组（含0.1% DMSO的培养基）。
- 增殖检测：药物处理后，用溴脱氧尿苷（BrdU）标记细胞12小时，采用比色法BrdU酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒按说明书操作定量BrdU的掺入量，实验重复4次[2]
5. HRMEC管形成实验：
- 培养板包被：在24孔组织培养板中加入400μL生长因子减少的基底膜基质，在适宜条件下使其凝固。
- 细胞接种与药物处理：将HRMECs以2.5×10^4个细胞/孔的密度接种于包被好的24孔板中，分为两组，一组用含2%血清及不同浓度GSK0660（0.01μM - 1.0μM）的培养基处理24小时，另一组用含0.5%血清、25ng/mL VEGF及不同浓度GSK0660（0.01μM - 1.0μM）的培养基处理12小时，两组均设置溶剂对照组（含0.1% DMSO的培养基）。
- 管长度测量：药物处理后，在倒置显微镜下观察细胞，按系统模式在×10放大倍数下每孔捕获6张图像，使用图像分析软件测量图像中的毛细血管样结构，确定每视野的平均管长度，并对数值进行标准化处理[2]

Sprague-Dawley 大鼠
\n0.2 或 1.0 mg/kg
\ni.p.

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\n1. 大鼠氧诱导视网膜病变 (OIR) 模型建立：
\n - 动物选择和分组：出生后 8 小时内，选择 Sprague-Dawley 大鼠幼崽及其母鼠，并将其转移至氧气暴露室。
\n - 氧气暴露：大鼠在 14 天内交替暴露于 50% 和 10% 的氧气浓度下，持续 24 小时。在出生后第 14 天（称为第 14(0) 天），将暴露于氧气的大鼠转移至室温空气中，并继续饲养 6 天（第 14(1) 天至第 14(6) 天）[2]
\n2.在 OIR 大鼠中进行 GSK0660 玻璃体内注射：
\n - 麻醉和眼部准备：大鼠吸入异氟烷麻醉，并在角膜上滴一滴 0.5% 丙美卡因以麻醉眼表。
\n - 注射操作：使用 30 号针头（19° 斜面）和 10 μL 注射器，在睫状体口后方约 0.5 mm 处穿刺眼球。针头以陡峭角度推进至后玻璃体，以避免与晶状体接触，并将5 μL GSK0660（浓度分别为20 nM、100 nM和500 nM，溶于0.1% DMSO的PBS溶液中）注射到视网膜后极部附近的玻璃体动脉干附近。
\n- 注射后治疗：注射后，在眼内滴用抗生素混悬液。未注射眼也滴用丙美卡因和抗生素，以控制这些药物对视网膜血管生长的潜在影响。注射分别于第14(0)天和第14(3)天进行[2]
\n3.在 OIR 大鼠中腹腔注射 GSK0660：
\n - 药物制备：将 GSK0660 溶解于 1% DMSO 的 PBS 溶液中，配制成 0.2 mg/kg 和 1.0 mg/kg 的剂量。
\n - 注射方案：分别于第 14(0) 天、第 14(2) 天和第 14(4) 天进行腹腔注射[2]
\n4. 在 OIR 大鼠中灌胃给药（仅供参考，并非专门针对 GSK0660）：
\n - 药物制备：将药物 (GW0742) 溶解于 10% 乙醇的玉米油溶液中，配制成 1.0 mg/kg 和 10 mg/kg 的剂量。
\n - 给药方案：从第 14(0) 天到第 14(5) 天，每天灌胃给药一次[2]
\n5. OIR大鼠视网膜新生血管的定量分析：
\n - 安乐死和视网膜解剖：第14(6)天，所有大鼠均被安乐死，并解剖出视网膜。
\n - ADPase染色：根据既定程序，对解剖出的视网膜进行腺苷二磷酸酶（ADPase）活性染色。
\n - 图像采集和分析：将ADPase染色后的视网膜图像数字化，并以20倍放大倍率采集。对于每张视网膜图像，用不规则多边形勾勒出视网膜前血管簇，统计多边形内的像素数，并将视网膜中每个多边形的总像素数相加，转换为平方毫米。数据以载体处理眼的新生血管值进行标准化[2]
\n6.检测氧诱导视网膜病变（OIR）大鼠视网膜中的Angptl4蛋白：
\n - 药物注射和视网膜收集：建立OIR模型后，于第14天(1)向大鼠玻璃体内注射500 nM GSK0660（溶于0.1% DMSO的PBS溶液中）。于第14天(2)收集视网膜。
\n - 蛋白提取和检测：将收集的视网膜在裂解缓冲液中进行超声处理，并使用比色夹心ELISA试剂盒测定Angptl4蛋白的浓度。视网膜中Angptl4的含量（pg/mL）根据视网膜裂解液的总蛋白浓度（mg/mL）进行标准化，总蛋白浓度采用BCA法测定[2]
\n7. GSK0660对正常视网膜血管发育的毒性评估：
\n - 动物选择和药物注射：选择在正常空气中饲养的7日龄大鼠，并向其眼内玻璃体腔注射20 nM GSK0660。
\n - 视网膜无血管区评估：注射三天后，处死大鼠并解剖其视网膜。评估视网膜无血管区面积，以确定GSK0660对正常视网膜血管发育的影响[2]

在一项铜诱导肝损伤小鼠的研究中，高达 10 mg/kg/天的 GSK0660 剂量未显示毒性[2]
- 在正常空气中饲养的 7 日龄大鼠中，玻璃体内注射 20 nM GSK0660 对视网膜血管的正常发育没有影响，也没有明显的视网膜血管毒性[2]
- 在大鼠氧诱导视网膜病变 (OIR) 模型实验中，药物注射组和溶剂注射组的体重没有显著差异，表明 GSK0660 对大鼠的生长没有明显的不良影响[2]

[1]. Mol Endocrinol . 2008 Feb;22(2):523-9.

[2]. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2013 Jun; 54(6): 4197–4207. Published online 2013 Jun 19.

3-[(4-苯胺基-2-甲氧基苯基)磺酰基]-2-噻吩甲酸甲酯是一种磺酰胺类化合物。

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1. GSK0660 是一种选择性小分子过氧化物酶体增殖物激活受体β/δ (PPARβ/δ, NR1C2) 拮抗剂。在发现 GSK0660 之前，仅有 PPARβ/δ 受体的激动剂配体被报道，而 GSK0660 是首个报道的 PPARβ/δ 小分子拮抗剂配体。它可以作为阐明 PPARβ/δ 生物学功能的有效工具[1]。
2. GSK0660 不仅是一种强效的 PPARβ/δ 竞争性拮抗剂，而且还表现出反向激动剂活性[2]。
3. PPARβ/δ 是能量代谢、炎症以及细胞生长和分化的重要调节因子。 GSK0660 的发现为研究 PPARβ/δ 在这些生物过程中的功能提供了一种新方法[1]
4. 在 PPAR 研究领域，大多数研究集中于激动剂，而拮抗剂的研究相对较少，且所有先前报道的拮抗剂均选择性地作用于 PPARα 或 PPARγ。GSK0660 的发现丰富了 PPAR 拮抗剂的类型，并为比较 PPAR 激动剂和拮抗剂在细胞和动物系统中的作用提供了一种新的研究工具，从而获得对 PPAR 生物学的新见解[1]
5. 眼部新生血管 (NV) 是早产儿视网膜病变 (ROP)、糖尿病视网膜病变 (DR) 和年龄相关性黄斑变性 (ARMD) 的特征性表现，这些疾病是发达国家导致不可逆性失明的主要原因。该研究发现，GSK0660 可减少大鼠氧诱导视网膜病变 (OIR) 模型中的视网膜新生血管 (NV)，提示 GSK0660 对 PPARβ/δ 的药理学抑制可能为开发靶向眼部 NV 的治疗策略提供理论基础[2]
6。GSK0660 减少视网膜 NV 的机制可能与其抑制 PPARβ/δ 介导的血管生成细胞行为有关。PPARβ/δ 可能通过依赖于 Angptl4 的促分化/成熟机制来调节视网膜前 NV。GSK0660 可能通过抑制 PPARβ/δ 来阻断该机制，从而减少视网膜 NV[2]
7。尽管 GSK0660 在减少视网膜 NV 方面显示出潜力，但在将其开发为治疗药物时仍应谨慎。 PPARβ/δ具有许多潜在的有益生物学功能，例如抗细胞凋亡、抗炎、神经保护和抑制肿瘤发生，并且PPARβ/δ的药理学激活可以保护内皮细胞免受功能障碍的影响。因此，在探索GSK0660对视网膜中PPARβ/δ的药理学抑制时，应仔细评估与视网膜炎症和视网膜细胞死亡相关的潜在不良副作用，并监测受试者的整体健康状况，同时考虑到PPARβ/δ对代谢稳态和心血管疾病的积极作用及其在致癌作用中的争议性[2]
8。GSK0660的给药途径是其治疗应用的关键因素。玻璃体内注射可以在新生血管病变部位达到较高的药物浓度，但与眼内炎、白内障和青光眼等潜在副作用相关。全身给药（例如腹腔注射）可以避免这些局部副作用，但需要重复给药以维持病变组织中的有效药物浓度，并且可能使健康器官和组织暴露于药物。因此，优化GSK0660的给药方式对其未来的临床应用至关重要[2]
9. 目前，许多视网膜新生血管（NV）患者从现有的血管内皮生长因子（VEGF）靶向药物中获益有限，这些药物存在潜在的神经毒性、眼压升高和难治性等缺点。GSK0660能够减少视网膜新生血管的发现表明，它可能成为治疗视网膜新生血管疾病（例如早产儿视网膜病变，ROP）的新型治疗药物，为视网膜新生血管患者提供新的治疗选择[2]

C19H18N2O5S2

418.49

418.065

C, 54.53; H, 4.34; N, 6.69; O, 19.12; S, 15.32

1014691-61-2

46233311

Light yellow to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

608.1±65.0 °C at 760 mmHg

321.5±34.3 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.650

2.75

130.35

2

8

8

28

618

0

S(C1C([H])=C([H])SC=1C(=O)OC([H])([H])[H])(N([H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1OC([H])([H])[H])N([H])C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])(=O)=O

NDFKBGWLUHKMFY-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H18N2O5S2/c1-25-16-12-14(20-13-6-4-3-5-7-13)8-9-15(16)21-28(23,24)17-10-11-27-18(17)19(22)26-2/h3-12,20-21H,1-2H3

methyl 3-[(4-anilino-2-methoxyphenyl)sulfamoyl]thiophene-2-carboxylate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。