GW-7647

PPARα (EC50 = 6 nM); Chk2 (IC50 = 697.4 nM); PPARγ (EC50 = 1.1 μM); PPARδ (EC50 = 6.2 μM)
Peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARα) agonist. [1]

在存在和不存在 IL-1β 的情况下，GW7647 (1 μM) 都会导致 Caco2BBE 细胞中 PDZK1 蛋白表达显着增加，达到媒介物处理对照的 129.7 ± 6.5%[1]。 GW7647 还可减弱 IL-1β 介导的 PDZK1 表达减少。
GW7647 (50 nM) 通过刺激剥离的胃窦粘膜中 PI3K 和 Akt (Ser473) 的磷酸化，增加 NO 的释放量。在胃窦粘液细胞中，GW7647 (50 nM) 放大由 ACh 触发的 Ca2+ 调节的胞吐事件的第一阶段，但 GW7647 本身不会引起任何胞吐事件。在胃窦粘液细胞中，GW7647 加 ACh 可增加渥曼青霉素 (50 nM) 和 AKT-inh (100 nM) 对胞吐事件的影响[2]。
GW 7647 (100 nM) 使 AQP9 蛋白丰度降低 43%；然而，在 10 和 1,000 nM 时，它对 WIF-B9 肝细胞没有明显的作用。暴露于 GW 7647 (100 nM) 的 HepG2 细胞的 AQP9 蛋白丰度下降 24%；然而，HepG2肝细胞中L-FABP蛋白丰度并没有显着增加[3]。

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PPARα激动剂GW7647对PDZK1表达的影响[1]
转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）已被确定为PDZK1启动子的强激活剂（Tachibana等人，2008）。与异二聚体PPARα和RXRα结合的过氧化物酶体增殖物反应元件不位于PDZK1启动子的5'端，而是靠近98-86bp的转录起始位点，因此不在对IL-1β敏感的区域。有趣的是，IL-1β孵育也使Caco2BBE细胞中PPARα的表达在24小时孵育时降至65.5±9.6%（补充图4），而早些时候对PDZK1 mRNA表达有显著影响（图3A）。然而，PPARα激动剂能够在促炎环境中恢复PDZK1的表达是可行的，为药物干预提供了一个窗口。因此，我们在IL-1β存在和不存在的情况下，用PPARα激动剂GW7647孵育Caco2BBE细胞。在应用GW7647后24小时，PDZK1蛋白表达显著增加，达到载体处理对照组的129.7±6.5%（图8A、B），GW7647能够减弱IL-1β介导的PDZK1表达的降低（在没有GW7647的情况下为61.1±3.4%，在有GW7647存在的情况下则为33.9±2.3%）。

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PPARα（过氧化物酶体增殖激活受体α）激动剂（GW7647）激活一氧化氮合酶1（NOS1）产生NO，导致胃窦粘液细胞中cGMP积聚。在这项研究中，我们研究了PPARα如何激活NOS1。GW7647刺激的NO产生被PI3K（渥曼青霉素）和Akt（Akt 1/2激酶抑制剂，Akt inh）抑制剂抑制，尽管PPARα（GW6471）和NOS1（N-PLA）抑制剂也抑制了NO的产生。GW7647增强了通过NO介导的ACh（乙酰胆碱）刺激的胞吐（Ca（2+）调节的胞吐），这被GW6471、N-PLA、渥曼青霉素和AKT抑制。Western印迹显示，GW7647通过磷酸化胃窦粘液细胞中的PI3K/Akt来磷酸化NOS1。免疫荧光检查表明，PPARα与NOS1共存，与PI3K和Akt共定位于胃窦粘液细胞的细胞质中。单独使用ACh和花生四烯酸（AA）类似物AACOCF3通过PI3K/Akt诱导NOS1磷酸化产生NO，而GW6471抑制了NO的产生。由于AA是PPARα的天然配体，ACh可能通过AA刺激PPARα。总之，在ACh刺激期间，PPARα通过PI3K/Akt磷酸化激活NOS1，在胃窦粘液细胞中产生NO。[2]

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在 Caco-2BBE 细胞中，用 1 μM GW7647 预处理 1 小时，随后与 IL-1β (10 ng·mL⁻¹) 共孵育 48 小时，显著减弱了 IL-1β 介导的 PDZK1 蛋白表达下降。IL-1β 对 PDZK1 表达的抑制效应从（无 GW7647 存在时的）61.1 ± 3.4% 抑制降低到（有 GW7647 存在时的）33.9 ± 2.3% 抑制。此外，单独使用 GW7647 (1 μM, 24 小时) 能显著增加基础的 PDZK1 蛋白表达，达到溶剂对照组水平的 129.7 ± 6.5%。[1]

GW7647（每天 3 mg/kg）可抑制左心室射血分数的降低，但不能阻止体内心脏肥大的发展[4]。

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通过主动脉-腔静脉分流术在7天大的兔子中产生容量超负荷心肌肥大，之后，用或不用GW7647（每天3 mg/kg）治疗兔子14天。双心室工作心脏接受了35分钟的有氧灌注、25分钟的全脑无血流缺血和30分钟的有氧气再灌注GW7647治疗不能预防心肌肥大的发展，但确实可以预防体内左心室射血分数的下降。GW7647治疗增加了缺血前后心脏脂肪酸β氧化率，从而显著增加了总ATP的产生，并改善了缺血后的体外功能恢复。在GW7647治疗的心脏中，缺血后质子产生和内质网应激的减少，以及肌浆网钙ATP酶亚型2和柠檬酸合酶的激活是明显的。
结论：刺激新生儿心脏脂肪酸β-氧化可能是一种新的心脏保护干预措施，可以限制缺血后收缩功能障碍。[4]

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GW7647治疗改善了肥大新生兔心脏的体内和体外收缩功能GW7647治疗可防止心肌能量代谢的肥大引起的转变。GW7647治疗可提高肥厚心脏的ATP生成率和三羧酸循环活性。GW7647治疗可增加线粒体生物发生和脂肪酸氧化能力。GW7647治疗通过提高心肌的代谢率来降低心肌三酰甘油含量GW7647治疗激活钙处理蛋白，减少神经酰胺合成、内质网应激和炎症。[4]

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对喂食胆固醇/胆酸的大鼠5施用GW7647（3 mg/kg po bid）4天，导致HDL胆固醇增加60%，甘油三酯减少60%，血清载脂蛋白CIII减少40%[5]。

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在通过主动脉-腔静脉分流诱导容量超负荷性心脏肥大的新生兔中，使用 GW7647（3 mg/kg/天，腹腔注射，持续14天）治疗可预防肥大引起的左心室射血分数下降，使其恢复至与假手术组相当的水平。[4]
在离体双心室工作心脏灌注实验中，来自 GW7647 治疗组的肥大兔心脏，在经过25分钟全心无血流缺血后，再灌注期间的心脏功能恢复得到显著改善，恢复至与假手术组相似的水平，而溶剂治疗组的肥大心脏恢复则明显更差。[4]
GW7647 治疗增加了肥大心脏在缺血前和缺血后的脂肪酸β-氧化速率。[4]
与溶剂治疗组相比，GW7647 治疗显著增加了肥大心脏的整体ATP产生速率和三羧酸循环活性（通过乙酰辅酶A产生量衡量）。[4]
GW7647 治疗减弱了肥大引起的心脏糖酵解速率增加，尤其是在缺血后时期。[4]
因此，GW7647 治疗组肥大心脏的心肌质子产率（当糖酵解与葡萄糖氧化解偶联时会增加）显著降低，尤其是在缺血后。[4]
GW7647 治疗增加了肥大心脏中丙二酰辅酶A脱羧酶的表达，并降低了丙二酰辅酶A水平。[4]
它增加了放射性标记的棕榈酸掺入心肌甘油三酯池，降低了总甘油三酯含量，并增加了脂肪甘油三酯脂酶的表达，表明甘油三酯周转增加。[4]
GW7647 治疗增加了肥大心脏中甘油-3-磷酸脱氢酶的活性。[4]
它预防了肥大介导的肌浆网钙ATP酶2亚型蛋白表达下降，并增加了肥大心脏中磷酸化的受磷蛋白在Ser-16位点的水平。[4]
GW7647 治疗预防了肥大引起的左心室内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78和促凋亡蛋白BNIP3的增加。它还减弱了肥大引起的右心室中丝氨酸棕榈酰转移酶（SPT1和SPT2）表达的增加。[4]
GW7647 治疗减少了肥大心脏右心室中核因子-κB p65亚基的核滞留，并增加了其细胞质抑制剂IκBα的表达。[4]
GW7647 治疗增加了肥大心脏左心室中柠檬酸合酶的活性。[4]

细胞培养、接种密度和细胞因子处理[1]
Caco-2BBE细胞在37°C下在含有5%CO2和95%O2的加湿气氛中，在含有4.5 g·L-1 D-葡萄糖和丙酮酸钠的Dulbecco改良Eagle培养基中生长，补充了10%FCS、50单位青霉素/链霉素和1%非必需氨基酸。Huh-7细胞在含有4.5 g·L-1 D-葡萄糖和丙酮酸钠的Dulbecco改良Eagle培养基中生长，补充了10%FCS、50单位青霉素/链霉素。将0.25×106个细胞铺在6孔板中，生长24小时，血清饥饿（培养基中0.5%FCS）24小时，然后用IL-1β（0.1、1或10 ng·mL-1）、TNF-α（高达20 ng·mL-1）和IFN-γ（高达30 ng·mL−1）处理，处理时间如图所示。Caco-2BBE细胞中这些细胞因子的浓度反应曲线已在之前的一项研究中进行了测试（Yeruva等人，2008），并相应地应用于本研究。对于每个实验，针对每个实验条件研究两个（qPCR）或三个（Western Analysis）单独的培养皿，并将结果合并为n=1。每个实验在不同的细胞传代中重复三次。n表示不同细胞传代中的重复次数。由于细胞系的同质性，以及同一实验中的重复或三次测量，我们认为三次重复对于统计上有效的结论是可以接受的。

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瞬时转染和萤光素酶检测[1]
将3×104个细胞接种在24个孔中并生长过夜。将每孔250纳克质粒与10ng肾荧光素酶质粒混合，并根据制造商的方案使用Peqlab的Jet prime®polyplus转染试剂进行转染。细胞在加入细胞因子之前被血清饥饿过夜，然后在文中所示的时间段内用细胞因子处理。在室温下摇动15分钟，将处理细胞在1X被动裂解缓冲液中裂解。如前所述进行萤光素酶测定。

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患者选择[1]
在之前的一份报告中详细给出了提供UC患者活检的患者的详细信息（Yeruva等人，2015）。

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抑制NF-κB和MAPKs通路[1]
对于NF-κB和MAPK通路抑制实验，Caco-2BBE细胞用NF-κB抑制剂BAY11-7082（10μM）、p38MAPK抑制剂BIRB-796（μM）和JNK抑制剂SP600125（25μM）预处理1小时，然后暴露于IL-1β（10 ng·mL-1）48小时。细胞被裂解以进行蛋白质印迹分析，如下所述。

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9-顺式维甲酸治疗实验[1]
对于PDZK1 mRNA测量，Caco-2BBE细胞用浓度为1μM的9-顺式视黄酸（RA）或载体预处理30分钟，然后用IL-1β处理3、6、12和24小时。

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RNA分离和实时PCR[1]
使用Qiagen RNA分离试剂盒从细胞中分离RNA，并如前所述进行实时PCR（Yeruva等人，2015）。

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免疫印迹分析[1]
处理后，细胞在裂解缓冲液中裂解，用Bio-rad-Bradford测定法估算蛋白质浓度。在8-10%SDS聚丙烯酰胺凝胶上分离出20至40微克的总细胞蛋白，并转移到聚二氟乙烯膜上。抗体在含有5%脱脂奶粉的TBST中稀释，印迹在4°C下孵育过夜，用TBST洗涤，用与辣根过氧化物酶结合的二抗孵育，用TBSC洗涤，然后使用GE health sciences的增强化学发光试剂盒进行显影。

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WST-1细胞活力测定[1]
根据制造商的说明，使用试剂WST-1测定细胞存活率。简而言之，Caco-2BBE细胞以1×104个细胞的密度接种在96孔板的每个孔中，并按照“细胞培养、接种密度和细胞因子处理”一节所述进行生长和处理。细胞与各自的细胞因子一起孵育24小时。处理结束时，向每个孔中加入10μl WST-1，1小时后使用BioTek®Epoch Reader在450和630 nm处测量吸光度。在暴露于任何受试细胞因子或其组合期间，未检测到存活率降低（补充图5）。

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在人类肠上皮细胞系 Caco-2BBE 中评估了 GW7647 对 PDZK1 表达的影响。细胞在补充了 10% 胎牛血清、青霉素/链霉素和非必需氨基酸的 Dulbecco's Modified Eagle Medium 中培养。实验时，细胞铺板后培养 24 小时，随后血清饥饿（0.5% 胎牛血清）24 小时。然后用 1 μM GW7647（或溶剂）预处理 1 小时。预处理后，细胞在有或无 IL-1β (10 ng·mL⁻¹) 的条件下继续处理 48 小时。处理后，裂解细胞进行蛋白提取。总细胞蛋白通过 SDS-PAGE 分离，转印至膜上，并使用 PDZK1 特异性抗体进行免疫印迹分析。蛋白表达通过内参蛋白（β-肌动蛋白）进行标准化，并使用图像分析软件进行定量。[1]

新西兰新生七日龄白兔（体重90至200克）经2%异氟烷吸入麻醉后，行主动脉-腔静脉分流术以诱导容量负荷过重引起的心脏肥大。术后第7天和第13天，使用彩色多普勒血流显像，可在轴位和横断面图像上观察到下腔静脉与腹主动脉之间的物理分流，表明瘘管形成成功。下腔静脉扩张进一步证实了这一点。验证分流成功后，将分流组动物随机分为两组，分别接受GW7647（3 mg/kg/天；PPARα EC50=6 nM）或溶剂（二甲基亚砜，GW7647的溶剂）腹腔注射，每日两次，持续14天。接受分流手术的动物，如果分流管闭合或没有发挥作用，则不允许继续参加研究。术后第7天和第13天，采用经胸超声心动图测量左心室射血分数（%）和其他心脏参数。所有动物在21岁时（术后14天）用戊巴比妥钠麻醉，并取出心脏进行离体双心室工作心脏灌注。[4]

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心肌功能评估 [4]
新生新西兰白兔（7日龄，90-200克）雌雄不限，用吸入异氟烷（2%）麻醉，并进行主动脉-腔静脉分流术以诱导容量负荷过重性心肌肥大，如前所述。18 术后第7天和第13天，通过彩色多普勒血流显像验证瘘管是否成功形成，该方法可在轴位和横断面上显示腹主动脉和下腔静脉之间的物理分流。下腔静脉扩大进一步证实了这一点（详见在线数据补充材料中的方法部分）。验证后，分流组动物被随机分配接受腹腔注射赋形剂（二甲基亚砜，GW7647 的溶剂）或 GW7647（3 mg/kg/天；PPARα 的 EC50=6 nmol/L），每日两次，持续 14 天。接受分流手术但分流未形成或闭合的动物被排除在研究之外。术后第7天和第13天，采用经胸超声心动图评估左心室射血分数（%）和其他心脏参数，方法如前所述¹⁸。21日龄（术后14天）时，所有动物均用戊巴比妥钠安乐死，并取出心脏进行离体双心室工作心脏灌注实验²²。通过手术建立主动脉-腔静脉分流，在7日龄新西兰白兔中诱导容量负荷过重性心肌肥大。确认分流成功后，将动物随机分为两组，分别接受腹腔注射GW7647（3 mg/kg/天）或赋形剂（二甲基亚砜，DMSO），每日两次，持续14天。术后第7天和第13天，通过经胸超声心动图评估左心室功能。21日龄（术后14天）时，对动物实施安乐死，取出心脏进行离体双心室工作心脏灌注实验。[4]

[1]. IL-1β-Induced Downregulation of the Multifunctional PDZ Adaptor PDZK1 Is Attenuated by ERK Inhibition, RXRα, or PPARα Stimulation in Enterocytes. Front Physiol. 2017 Feb 7;8:61.

[2]. PPARα induced NOS1 phosphorylation via PI3K/Akt in guinea pig antral mucous cells: NO-enhancement in Ca(2+)-regulated exocytosis. Biomed Res. 2016;37(3):167-78.

[3]. Hepatic AQP9 expression in male rats is reduced in response to PPARα agonist treatment. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2015 Feb 1;308(3):G198-205.

[4]. Activating PPARα prevents post-ischemic contractile dysfunction in hypertrophied neonatal hearts. Circ Res. 2015 Jun 19;117(1):41-51.

[5]. Identification of a subtype selective human PPARalpha agonist through parallel-array synthesis. Bioorg Med Chem Lett. 2001 May 7;11(9):1225-7.

GW 7647 是一种单羧酸，即 2-(苯硫基)异丁酸，其中苯基的对位被 3-氮杂-7-环己基庚-1-基取代，该基团的氮原子被 (环己基氨基)羰基酰化。它是一种 PPARα 激动剂。它属于脲类化合物、芳基硫醚类化合物和单羧酸类化合物。

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背景：PDZ 衔接蛋白 PDZK1 调节多种肠道受体和离子/营养转运蛋白的膜表达和功能。在小鼠和炎症性肠病 (IBD) 患者的炎症肠黏膜中，PDZK1 的表达显著降低。目的与方法：我们通过用TNF-α、IFN-γ和IL-1β处理肠道Caco-2BBE细胞，并分析PDZK1启动子活性、mRNA和蛋白表达，来研究炎症相关的PDZK1下调是否是促炎细胞因子释放的直接结果。结果：我们发现IL-1β显著降低了Caco-2BBE细胞中PDZK1启动子活性、mRNA和蛋白表达。hPDZK1启动子的远端区域对基础表达和IL-1β反应性至关重要。该区域包含视黄酸反应元件RARE以及参与IL-1β下游信号传导的转录因子的结合位点。特异性MEK1/2抑制剂PD98059/U0126对ERK1/2的抑制显著减弱了IL-1β介导的PDZK1下调，而NF-κB、p38 MAPK和JNK抑制剂则无此作用。溃疡性结肠炎患者的炎症结肠黏膜和IL-1β处理的Caco2-BBE细胞中，核受体RXRα和PPARα的表达均降低。此外，RAR/RXR配体9-顺式维甲酸和PPARα激动剂GW7647刺激了PDZK1 mRNA和蛋白的表达，并减弱了IL-1β介导的抑制作用。结论：肠道炎症期间PDZK1表达的显著降低可能部分是由于IL-1β介导的RXRα和PPARα抑制所致，并且可以通过核受体激动剂或ERK1/2抑制剂来减弱。炎症诱导的PDZK1下调对上皮转运功能的负面影响可能可以通过药物治疗来改善。[1]

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过氧化物酶体增殖物受体α (PPARα) 是肝脏对禁食反应的关键调节因子，对脂质和碳水化合物代谢均有影响。研究还发现PPARα在肝脏甘油代谢中发挥作用；然而，相关结果存在一些矛盾。水通道蛋白9 (AQP9) 是一种形成孔道的跨膜蛋白，可促进肝脏对甘油的摄取。在雄性啮齿动物中，AQP9的表达受胰岛素的负调控，在禁食期间表达增加。既往研究表明，PPARα在禁食期间AQP9 mRNA的诱导中起着关键作用。本研究利用PPARα激动剂，通过体内和体外实验，探讨PPARα激活对肝脏AQP9表达以及甘油代谢相关酶丰度的影响。在自由摄食的雄性大鼠中，给予PPARα激动剂WY 14643（3 mg·kg⁻¹·day⁻¹）治疗后，肝脏AQP9丰度降低了50%，且该作用仅限于门静脉周围肝细胞中表达的AQP9。PPARα的药理学激活对GlyK的丰度没有影响，但可增加肝脏GPD1、GPAT1和L-FABP蛋白的表达。在WIF-B9和HepG2肝细胞中，WY 14643和另一种PPARα激动剂GW 7647均降低了AQP9蛋白的丰度。总之，药理学激活PPARα可显著降低门静脉周围肝细胞中AQP9的丰度。结合对甘油代谢酶系统的影响，我们的结果表明，在进食状态下，PPARα的激活会将甘油引导至甘油酯合成，而不是从头合成葡萄糖。[3]

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理由：缺血后收缩功能障碍是新生儿先天性心脏病手术矫正后发病率和死亡率的因素之一。新生儿心脏的既有肥大会加剧这些缺血性损伤，部分原因可能是脂肪酸β-氧化速率低导致心脏能量供应减少。目的：我们研究了使用过氧化物酶体增殖激活受体α (PPARα) 激活剂 GW7647 刺激脂肪酸β-氧化是否能改善容量负荷诱导的心脏肥大新生兔心脏的能量产生和缺血后功能恢复。方法和结果：通过主动脉-腔静脉分流术在7日龄兔中建立容量负荷心脏肥大模型，之后，将兔子随机分为两组，分别接受或不接受 GW7647（3 mg/kg/天）治疗，持续14天。双心室工作心脏依次进行35分钟的有氧灌注、25分钟的全心无血流缺血和30分钟的有氧再灌注。 GW7647治疗并未阻止心脏肥大的发生，但确实阻止了体内左心室射血分数的下降。GW7647治疗提高了缺血前后心脏脂肪酸β-氧化速率，从而显著增加了总ATP生成，并改善了体外缺血后功能恢复。在GW7647治疗的心脏中，缺血后质子生成和内质网应激降低，肌浆网钙ATPase 2亚型和柠檬酸合酶被激活。结论：刺激新生儿心脏脂肪酸β-氧化可能是一种新的心脏保护干预措施，有助于限制缺血后收缩功能障碍。 [4]

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采用固相平行阵列合成法，合成了一系列脲取代的硫代异丁酸，并测定了其对人PPAR亚型的活性。GW7647 (3) 被鉴定为一种强效的人PPARα激动剂，其对PPARγ和PPARδ的选择性约为200倍，并且在血脂异常动物模型中具有显著的降脂活性。GW7647 (3) 将成为研究人细胞和疾病动物模型中PPARα生物学的重要化学工具。
GW7647 (3) 是一种强效的人PPARα激动剂，其对其他亚型的选择性约为200倍，并具有体内降脂活性。为了进一步表征该化合物，我们对其针对三种小鼠PPAR亚型的活性进行了测定。化合物 3 对小鼠 PPARα、PPARγ 和 PPARδ 的 EC50 值分别为 0.001、1.3 和 2.9 μM。[5]

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GW7647 是一种药理学工具，属于 PPARα 激动剂，用于研究肠道炎症背景下 PDZ 衔接蛋白 PDZK1 的调控。它能够增加 PDZK1 的表达并减弱 IL-1β 诱导的下调，这表明 PPARα 的激活可能是一种对抗炎症相关上皮功能障碍的潜在治疗策略。PDZK1 启动子包含一个过氧化物酶体增殖反应元件 (PPRE)，PPARα 可与 RXRα 形成异二聚体并结合于该元件。[1]

C29H46N2O3S

502.75214

502.322

C, 69.28; H, 9.22; N, 5.57; O, 9.55; S, 6.38

265129-71-3

265129-71-3

3392731

White to off-white solid powder

1.1±0.1 g/cm3

693.9±55.0 °C at 760 mmHg

373.5±31.5 °C

0.0±2.3 mmHg at 25°C

1.569

8.59

94.94

2

4

12

35

636

0

CC(C)(SC1=CC=C(CCN(C(NC2CCCCC2)=O)CCCCC3CCCCC3)C=C1)C(O)=O

PKNYXWMTHFMHKD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C29H46N2O3S/c1-29(2,27(32)33)35-26-18-16-24(17-19-26)20-22-31(28(34)30-25-14-7-4-8-15-25)21-10-9-13-23-11-5-3-6-12-23/h16-19,23,25H,3-15,20-22H2,1-2H3,(H,30,34)(H,32,33)

2-[4-[2-[4-cyclohexylbutyl(cyclohexylcarbamoyl)amino]ethyl]phenyl]sulfanyl-2-methylpropanoic acid

GW 7647; GW-7647; 265129-71-3; 2-[(4-{2-[(4-cyclohexylbutyl)(cyclohexylcarbamoyl)amino]ethyl}phenyl)sulfanyl]-2-methylpropanoic acid; 2-[[4-[2-[[(cyclohexylamino)carbonyl](4-cyclohexylbutyl)amino]ethyl]phenyl]thio]-2-methylpropanoic acid; MFCD06798379; NTL2A9CAZ7; GW7647

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~100 mg/mL (~198.9 mM)
Ethanol: ~25 mg/mL (~49.7 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。