| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Probe to detect intracellular ROS
Reactive oxygen species (ROS) including hydrogen peroxide, hydroxyl radicals, and peroxynitrite. H2DCFDA itself does not target a specific enzyme or receptor; it is a chemical probe that is oxidized by ROS to become fluorescent. The compound is cell-permeable and non-fluorescent until it is de-esterified and oxidized within cells. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
使用指南（以下是我们的建议方案，请根据您的具体需求进行调整，仅供参考）。
1. 配制 10 mM 提取液：将 H2DCFDA 溶解于 DMSO 中。使用前再次提取。 2. 将细胞在 37°C 避光条件下用含 5 μM H2DCFDA 和 0.05% 胰蛋白酶-EDTA 溶液的 PBS 溶液染色 30 分钟后，将细胞悬浮于新鲜培养基中，并立即进行流式细胞术分析。 3. 如有需要，可将 H2DCFDA 探针与 ROS 不敏感的荧光素染料 DCFDA 修饰剂联用，作为更优的对照。染色过程与 H2DCFDA 相同 [1]。 H2DCFDA 是一种细胞渗透性探针，在细胞内经酯酶脱酯化后形成非荧光化合物 DCFH。在活性氧（ROS）存在的情况下，DCFH 会被氧化成高荧光性的 2',7'-二氯荧光素（DCF）。荧光强度与细胞内 ROS 的产生水平成正比。该化合物可用于检测 ROS、一氧化氮（NO）以及测定总氧化应激水平。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
结果：我们的研究发现：(1) TBI后第3天和第7天，脾脏和骨髓中树突状细胞(DC)的频率和绝对数量发生改变；(2) TBI后第3天和第7天，DC表面抗原呈递关键分子的表达受到影响；(3) TBI后，循环系统和淋巴系统中组织特异性DC亚群的分布和功能失衡；(4) TBI后，DC的早期分化程序，特别是造血干细胞向共同DC祖细胞(CDP)的分化，受到调控；(5) TBI后第3天和第7天，DC祖细胞和分化DC中的细胞内活性氧(ROS)水平降低。[2]
结论：我们的数据首次证明，TBI会影响DC的分布模式，并导致淋巴和非淋巴器官中DC亚群的失衡。此外，本研究表明，TBI后第3天和第7天树突状细胞（DC）中活性氧（ROS）水平降低，这可能解释了TBI后DC分化模式的改变。深入了解导致TBI后DC缺陷的分子机制对于治疗急性中枢神经系统（CNS）损伤（如TBI、中风和脊髓损伤）患者的感染至关重要且有益。[2] H2DCFDA并非治疗药物，不具有直接的体内活性。它是一种用于测量细胞和组织中ROS产生的化学探针。该化合物可用于体内评估各种疾病模型中的氧化应激水平，但其主要用途是作为检测ROS的研究工具。 |
| 酶活实验 |
染色示例 1：
H2DCFDA (DCFH-DA) 是一种具有绿色荧光的 ROS 生成探针。 1. 移除细胞培养基，换用含有 H2DCFDA 的新鲜培养基，并与培养细胞孵育 30 分钟。 2. 用 PBS 洗涤细胞三次。 3. 使用共聚焦激光扫描显微镜检测细胞内 ROS 的生成。 染色示例 2： 1. 将待测细胞以 10⁵ 个/孔的密度接种于 6 孔微孔板中，并在 37°C、5% CO₂ 条件下培养过夜。向每个孔中加入含有 50 μg/mL 不同物质的新鲜培养基，培养 16 小时。 2. 用 PBS 洗涤细胞，并用 H2DCFDA（20 μM；1 小时；37°C；避光）染色。 3. 用胰蛋白酶消化细胞，洗涤，重悬于 0.2 mL PBS 中，用流式细胞仪分析，并使用共聚焦激光扫描显微镜（FV1000，奥林巴斯，东京，日本）成像。 染色示例 3： 1. 用 PBS 洗涤培养的细胞三次。 2. 在细胞培养箱中，用 H2DCFDA 处理待测细胞 0.5 小时。 3. 使用共聚焦激光扫描显微镜（奥林巴斯，FV3000）成像。使用 BD LSRI Fortessa 流式细胞仪分析细胞，以量化结果。 由于 H2DCFDA 并非酶抑制剂，因此不适用体外酶活性测定。它被用作探针来测量活性氧 (ROS) 的产生。将该化合物与含有 ROS 的样品孵育，并测量氧化产物 (DCF) 的荧光强度。荧光强度的增加与 ROS 浓度成正比。 |
| 细胞实验 |
操作指南（以下是我们推荐的方法，仅供参考，请根据您的具体需求进行调整）。
1.1 配制储备液 用无水DMSO配制5 mM的H2DCFDA储备液。 注意：分装后，建议将H2DCFDA储备液避光保存于-20℃或-80℃。 1.2 配制工作液 用预热的无血清细胞培养基或PBS稀释储备液，配制1-10 μM的H2DCFDA工作液。 注意：请根据您的具体需求调整H2DCFDA工作液的浓度，并按需配制。 2. 细胞染色（悬浮细胞） 2.1 离心收集细胞，用PBS洗涤两次，每次5分钟。细胞密度为 1 × 10⁶/mL。 2.2 加入 1 mL 染料工作液，室温孵育 5-30 分钟。 2.3 400 g 离心 3-4 分钟，弃上清。 2.4 用 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。 将细胞重悬于 1 mL 无血清培养基或 PBS 中，使用荧光显微镜或流式细胞仪观察。 3. 细胞染色（贴壁细胞） 3.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。 3.2 将盖玻片从培养基中取出，去除多余的培养基。 3.3 加入 100 μL 染料工作液，轻轻摇晃使染料完全覆盖细胞，孵育 5-30 分钟。 3.4 去除染料工作液，用培养基洗涤 2-3 次。每次用培养基孵育 5 分钟，然后使用荧光显微镜或流式细胞仪观察。 注：如果需要进行流式细胞术检测，则需要在染色前用胰蛋白酶消化并重悬细胞。 H2DCFDA 的体外细胞检测包括用探针加载细胞并测量 ROS 的产生。将细胞与 H2DCFDA（通常为 1-10 μM）在 37°C 下孵育 30-60 分钟。洗涤后，用 ROS 诱导剂刺激细胞或用测试化合物处理细胞。使用荧光酶标仪或流式细胞仪在 488/525 nm 激发/发射波长下测量荧光强度。 |
| 动物实验 |
从接受中度皮质冲击（CCI）或假手术的小鼠中采集长骨、脾脏、外周淋巴结（pLNs）、肠系膜淋巴结（mLNs）、肝脏、肺脏、皮肤和血液样本，采集时间为创伤性脑损伤（TBI）后第1、3或7天。通过冲洗法从后肢胫骨和股骨中分离骨髓细胞。组织样本用胶原酶D和DNase I消化。皮肤活检样本在利贝酶+DNase I存在下消化。制备单细胞悬液，用氯化铵（Stem Cell Technology）裂解红细胞，然后用70 μM尼龙网过滤。通过基于10色流式细胞术的免疫表型分析，鉴定组织中的树突状细胞（DC）亚群和骨髓中的DC祖细胞。细胞内活性氧（ROS）可通过H2DCFDA染色进行鉴定。[2]
H2DCFDA的体内动物研究包括使用该探针来测量组织中ROS的产生。该化合物可通过静脉注射或口服给药，并测量组织荧光以评估氧化应激水平。然而，H2DCFDA主要用作体外研究工具。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
作为一种化学探针，H2DCFDA 的药代动力学数据有限。该化合物的分子量为 487.29，分子式为 C24H16Cl2O7。应储存于 -20°C 并避光。H2DCFDA 可溶于 DMSO，通常配制成 DMSO 储备液用于细胞培养实验。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
H2DCFDA是一种化学探针，而非治疗药物。其毒性研究仅限于作为研究工具的用途。该化合物在用于活性氧（ROS）检测的浓度范围内（通常为1-10 μM）通常被认为无毒。然而，在处理该化合物时，仍应采取适当的安全预防措施。
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| 参考文献 |
[1]. Redox environment in stem and differentiated cells: A quantitative approach. Redox Biol. 2017 Aug;12:758-769.
[2]. J Neuroinflammation. 2022 Oct 1;19(1):238. |
| 其他信息 |
另见：二乙酰二氯荧光素（注：已移至此处）。
H2DCFDA (DCFH-DA) 是一种细胞渗透性非荧光探针，广泛用于检测细胞内活性氧 (ROS) 的产生。它在细胞内脱酯并氧化为高荧光性的 2',7'-二氯荧光素 (DCF)，其激发/发射波长为 488/525 nm。该化合物是一种通用的氧化应激指示剂，用于监测细胞氧化还原过程、检测 ROS 和 NO 以及确定总氧化应激水平。它并非治疗药物，而是一种重要的研究工具。 |
| 分子式 |
C24H16CL2O7
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|---|---|
| 分子量 |
487.2856
|
| 精确质量 |
486.027
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| CAS号 |
4091-99-0
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| 相关CAS号 |
4091-99-0;
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| PubChem CID |
77718
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| 外观&性状 |
Typically exists as white to off-white solids at room temperature
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
593.5±50.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
209-210ºC(lit.)
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| 闪点 |
312.7±30.1 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.8 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.635
|
| LogP |
4.62
|
| tPSA |
99.13
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
717
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1=C(C([H])=C2C(=C1[H])C([H])(C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C(=O)O[H])C1=C([H])C(=C(C([H])=C1O2)OC(C([H])([H])[H])=O)Cl)OC(C([H])([H])[H])=O
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| InChi Key |
PXEZTIWVRVSYOK-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C24H16Cl2O7/c1-11(27)31-21-9-19-15(7-17(21)25)23(13-5-3-4-6-14(13)24(29)30)16-8-18(26)22(32-12(2)28)10-20(16)33-19/h3-10,23H,1-2H3,(H,29,30)
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| 化学名 |
2-(3,6-diacetyloxy-2,7-dichloro-9H-xanthen-9-yl)benzoic acid
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~256.52 mM)
Ethanol : ~20 mg/mL (~41.04 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (4.27 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.27 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0522 mL | 10.2608 mL | 20.5217 mL | |
| 5 mM | 0.4104 mL | 2.0522 mL | 4.1043 mL | |
| 10 mM | 0.2052 mL | 1.0261 mL | 2.0522 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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COA
粤公网安备 44011102003439号
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