| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
BiP/GRP78/HSPA5
BiP (GRP78/HSPA5) – binds to and inhibits BiP ATPase activity; no IC50/Ki/EC50 values provided in these references. [1][2][3] BiP/GRP78/HSPA5 (immunoglobulin heavy-chain-binding protein / glucose-regulated protein 78 / heat shock 70 kDa protein 5). HA15 is a potent and specific inhibitor of the ER chaperone BiP/GRP78/HSPA5. It inhibits the ATPase activity of BiP. BiP is a key ER chaperone involved in protein folding and the unfolded protein response (UPR). Inhibition of BiP by HA15 induces ER stress, leading to cancer cell death. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
HA15（10 μM；1-24 小时）可诱导早期内质网应激（ER 应激）[1]。
HA15（0-10 μM；24 小时）在 A375 细胞中的 IC50 为 1-2.5 μM，与对照组（DMSO）相比，其以剂量依赖的方式降低黑色素瘤细胞的活力[1]。 HA15（1-10 μM；24 小时）可诱导 A375 细胞凋亡[1]。 HA15（1-24 μM；24 小时）可诱导自噬[1]。 HA15（10 μM；48 小时）对 BRAF 抑制剂耐药的黑色素瘤细胞具有高效的内质网应激诱导和细胞死亡作用。此外，HA15 通过内质网应激触发的细胞凋亡和自噬途径抑制肿瘤生长[1]。 低剂量或高剂量的 HA15 均未对人成纤维细胞或正常人黑素细胞的活力产生负面影响[1]。 HA15 (10 μM，48 小时) 降低了人黑色素瘤细胞系（A375、SKMel28、Mel501 等）的活力，IC50 值介于 1–2.5 μM 之间；浓度高达 100 μM 时，对正常人黑素细胞或成纤维细胞无细胞毒性。 [1] HA15 (10 μM) 可诱导黑色素瘤细胞 (A375) 快速发生内质网应激：1 小时内 PERK 和 eIF2α 磷酸化，ATF4 和 CHOP 表达增加，XBP1 剪接，以及内质网囊泡扩张（电镜观察）。HA15 与 ER Tracker（重叠率 82%）和 BiP（重叠率 64%）共定位。在无细胞实验中，HA15 以剂量依赖性方式（0–100 μM）抑制 BiP ATPase 活性。[1] HA15 可诱导 A375 细胞凋亡（Annexin V、cleaved caspase-3/9、PARP 表达增加）和自噬（LC3B-II 转化、Beclin1 表达增加、自噬小泡形成）。CHOP 敲低可阻断细胞凋亡和自噬，并挽救细胞活力。 [1] HA15（10 μM，48 小时）降低了 BRAF 抑制剂耐药的黑色素瘤细胞（A375-R、SKMel28-R、WM9-R）和患者来源的耐药细胞的活力，并增加了 CHOP 的表达。[1] HA15（10 μM，48 小时）杀死了多种其他癌细胞系：MIA PaCa-2（胰腺癌，对吉西他滨耐药）、ImarR（髓系白血病，对伊马替尼耐药）、MDA-MB-453（乳腺癌）、HT29（结肠癌）、HCT116 等。在所有细胞中均诱导了 CHOP 和 PARP 的裂解；LC3B 的转化程度各不相同。 [1] HA15（在H295R肾上腺皮质癌细胞中增殖IC50为3.8 μM）以剂量依赖的方式降低细胞活力和增殖。与米托坦具有协同作用（联合指数<1）。诱导DDIT3 mRNA、XBP1剪接、CHOP蛋白和ATF6核转位。通过下调类固醇生成酶（HSD3B2、CYP11A1、CYP21A2、CYP17A1）降低福斯克林刺激的皮质醇和DHEA-S生成。 [2] HA15（在 MPM 细胞系中 IC50 范围为 5.71–20.51 μM）选择性地抑制 MPM 细胞（MESO-1、MESO-4、H28、JL-1、MSTO-211H、H2052、原代 BE261T）的活力，而对正常成纤维细胞（hFb16Lu）和间皮细胞（Met-5A）的抑制作用较弱。[3] HA15（20 μM）诱导 MPM 细胞发生内质网应激/未折叠蛋白反应（EIF2AK3、ERN1、ATF4、DDIT3 mRNA 增加；p-eIF2α、CHOP 蛋白）、自噬（ATG5、BECN1、LC3B-II）和细胞凋亡（BCL2L11、BBC3、cleaved caspase-7、PARP）。 CHOP基因敲低减弱了这些效应并挽救了细胞活力。[3] HA15 (20 μM) 可有效降低经顺铂/培美曲塞长期暴露产生的化疗耐药性MPM细胞（MESO-1R、MESO-4R、H28R）的活力，并增加与亲代细胞相似的UPR和凋亡标志物。[3] 体外实验表明，HA15抑制BiP的ATPase活性，诱导内质网应激并导致癌细胞死亡。HA15对所有测试的黑色素瘤细胞均表现出抗癌活性，包括从患者体内分离的细胞和对BRAF抑制剂产生耐药性的细胞。该化合物对BRAF抑制剂耐药性黑色素瘤细胞的活性表明其具有克服耐药性的潜力。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
HA15（0.7 mg/只/天；ih；持续2周）可抑制小鼠黑色素瘤的生长，未观察到明显的毒性，且对小鼠的行为、体重或肝脏重量无影响，表明未出现肝肿大[1]。
HA15（0.7 mg/只/天；ip；每周5天）可抑制体内MPM肿瘤的生长[3]。 HA15（0.7 mg/只/天，ip，持续14天）可显著抑制裸鼠体内A375黑色素瘤异种移植瘤的生长，其效果与PLX4032（0.7 mg）相当。肿瘤重量减轻。小鼠体重、肝脏重量或血清AST/ALT水平无变化。肿瘤中TUNEL、CHOP和LC3B染色增强。 [1] HA15（0.7 mg/只/天，腹腔注射，每周5天，持续5周）可抑制裸鼠体内BRAF抑制剂耐药的A375异种移植瘤的生长，而PLX4032则无此作用。[1] HA15（0.7 mg/只/天，腹腔注射，每周5天，持续5周）可抑制NSG小鼠体内患者来源的异种移植瘤（BE261T）的生长，其效果优于顺铂/培美曲塞（3.75/83 mg/kg，每周腹腔注射）。未观察到明显的体重下降。肝脏组织学检查及AST/ALT水平正常。肿瘤组织显示CHOP、Beclin-1、LC3B-II、裂解型PARP/caspase-3/caspase-7表达升高。 [3]体内实验表明，HA15 在黑色素瘤小鼠异种移植模型中具有强大的抗癌活性，包括对 BRAF 抑制剂敏感或耐药的肿瘤。该化合物可诱导内质网应激和癌细胞死亡。这些体内疗效数据支持 HA15 作为黑色素瘤及其他 BiP 参与致病过程的癌症治疗药物的潜力。 |
| 酶活实验 |
BiP ATPase活性抑制测定：将重组人BiP（0.25 μM）与HA15（0–100 μM）在20 mM Tris（pH 7.5）、50 mM KCl、1.5 mM MgCl₂缓冲液中孵育。加入100 μM ATP启动反应（30分钟，37 °C）。采用孔雀绿-磷酸盐法测定释放的游离磷酸盐（吸光度620–640 nm）。HA15呈剂量依赖性地抑制BiP ATPase活性。[1] HA15的BiP ATPase活性测定包括将重组BiP蛋白与ATP在不同浓度的HA15存在下孵育。通过比色法或孔雀绿法定量ATP水解释放的无机磷酸盐来测定ATPase活性。IC₅₀值由剂量-反应曲线计算得出。或者，可以通过表面等离子体共振或等温滴定量热法来评估该化合物与 BiP 的结合情况。
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| 细胞实验 |
细胞系：A375细胞
浓度：1 μM、2.5 μM、5 μM、7.5 μM、10 μM 孵育时间：24小时 结果：与对照组（DMSO）相比，A375细胞中黑色素瘤细胞的活力呈剂量依赖性降低。 细胞活力检测：MTT法、酸性磷酸酶（APH）法或台盼蓝排除法。将细胞接种于96孔板中，用HA15处理24-72小时。计算IC50值。[1][2][3] 克隆形成实验：将细胞接种于6孔板（1000个/孔），用HA15处理14天（每3天更换一次培养基），用结晶紫染色并计数克隆。 [1][3] 细胞凋亡检测：Annexin V-FITC/PI染色后进行流式细胞术分析；或通过Western blot检测裂解型caspase-3、-7、-9和PARP。[1][2][3] Western blot：用RIPA缓冲液提取蛋白，经SDS-PAGE分离后转移至PVDF/硝酸纤维素膜，用针对BiP、PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP、IRE1α、LC3B、Beclin-1、裂解型caspase-7、PARP、β-actin等的抗体进行检测。[1][2][3] qRT-PCR：用RNeasy试剂盒提取RNA，进行cDNA合成，采用TaqMan或SYBR Green法检测UPR、自噬和细胞凋亡相关基因。以GAPDH或TBP作为内参进行标准化。 [1][2][3] XBP1 剪接分析：使用位于剪接位点两侧的引物进行 RT-PCR，产物在 4% 琼脂糖凝胶上进行电泳分离。[1][2] 免疫荧光：细胞固定、透化后，用抗 BiP、抗 LC3B、抗 ATF6 或 ER Tracker 以及 DAPI 染色；共聚焦显微镜观察。[1][2] 电子显微镜：细胞用戊二醛/四氧化锇固定，包埋、切片，检查内质网扩张和自噬空泡。[1] 黑色素瘤细胞系（包括 BRAF 抑制剂敏感和耐药细胞系）和患者来源的黑色素瘤细胞在合适的培养基中培养。细胞用浓度递增的 HA15（通常为 0.1 至 100 μM）处理 24-72 小时。采用 MTT、CCK-8 或 CellTiter-Glo 检测法评估细胞活力。通过蛋白质印迹法或定量 PCR 检测内质网应激标志物（例如 CHOP、BiP、ATF4），以确认靶点结合情况和作用机制。 |
| 动物实验 |
6周龄雌性BALB/c nu/nu（裸鼠）A375黑色素瘤细胞异种移植[1]
0.7 mg/只/天 皮下注射；持续2周 小鼠异种移植（黑色素瘤，参考文献1）：雌性无胸腺裸鼠（6周龄）。皮下注射A375细胞（1.5×10⁶）。8天后（肿瘤体积约50 mm³），分别腹腔注射载体（Labrafil）、PLX4032（0.7 mg/只/天）或HA15（0.7 mg/只/天），每日一次，持续14天。每3-4天测量一次肿瘤体积。实验结束时，称量肿瘤重量，采集血液样本进行AST/ALT检测，并固定肝脏进行H&E染色。 [1] 小鼠异种移植（BRAF耐药性黑色素瘤）：采用类似的方案，使用A375-R细胞（1.5×10⁶），从第7天开始治疗。[1] 小鼠PDX（间皮瘤，参考文献3）：NSG小鼠（NOD-scid IL2Rγnull）。将BE261T原代间皮瘤细胞（1×10⁶）与Matrigel混合后皮下注射。当肿瘤可触及时，将小鼠随机分为三组：载体组（对照组）、顺铂（3.75 mg/kg）+培美曲塞（83 mg/kg）腹腔注射组（每周一次，持续5周）或HA15（0.7 mg/只）腹腔注射组（每周5天，持续5周）。每3天测量一次肿瘤体积。在实验终点，采集血液样本检测AST/ALT水平，进行肝脏和肿瘤组织学检查，并进行caspase-3的免疫组化染色。 [3] 通过将黑色素瘤细胞（包括BRAF抑制剂耐药细胞系）皮下植入免疫缺陷小鼠体内，建立小鼠异种移植模型。当肿瘤达到一定大小后，以不同剂量和给药方案（通常为腹腔注射或口服）给予HA15。使用游标卡尺测量肿瘤体积，并监测小鼠体重。在研究结束时切除肿瘤，通过免疫组织化学和蛋白质印迹法分析内质网应激标志物和细胞凋亡。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
HA15 的分子量为 466.58 g/mol，分子式为 C₂₃H₂₂N₄O₃S₂。其详细的药代动力学参数尚未广泛发表。作为一种小分子，HA15 预计具有良好的口服生物利用度。该化合物通常以粉末形式储存于 -20°C。需要进行药代动力学研究以支持其进一步的开发。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
HA15在小鼠模型中未显示出明显的毒性：无体重减轻、无行为改变、肝脏组织学正常，且在给药剂量（0.7 mg/只/天，持续2-5周）下血清AST/ALT水平正常。[1][3]
体外实验表明，浓度高达100 μM的HA15对正常人黑素细胞、成纤维细胞（hFb16Lu）或间皮细胞（Met-5A）的活力没有影响。[1][3] 经治疗的小鼠肝酶和组织学未见显著变化。[1][3] 目前公开资料中关于HA15的详细毒理学数据有限。作为一种BiP抑制剂，该化合物的作用机制涉及诱导内质网应激，这可能对正常组织产生影响。需要进行临床前毒理学研究来评估HA15的安全性。该化合物已在黑色素瘤模型中表现出抗癌活性。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
HA15 是一种磺酰胺，由 5-(二甲氨基)萘-1-磺酸的磺酸基团与 3-(2-乙酰氨基-1,3-噻唑基)苯胺的苯胺氮缩合而成。据报道，HA15 可通过触发内质网 (ER) 应激反应降低黑色素瘤细胞的活力，且对正常细胞无毒性。它具有抗肿瘤活性。HA15 是一种磺酰胺类化合物，其结构包含 1,3-噻唑、乙酰胺、叔胺、氨基萘和联芳基等基团。HA15 是一种噻唑苯磺酰胺，靶向内质网分子伴侣 BiP/GRP78。它通过使 BiP 与 PERK、IRE1α 和 ATF6 解离来诱导内质网应激，从而导致持续的未折叠蛋白反应 (UPR) 激活。这可诱导癌细胞凋亡和自噬。HA15对黑色素瘤（包括BRAF抑制剂耐药型）、肾上腺皮质癌（与米托坦具有协同作用）和恶性胸膜间皮瘤（包括化疗耐药型）均有效。它对正常细胞和体内毒性较低。这些研究支持进一步的临床研究。[1][2][3]
HA15是内质网分子伴侣BiP/GRP78/HSPA5的强效特异性抑制剂。它抑制BiP的ATPase活性并诱导内质网应激，最终导致癌细胞死亡。HA15已证实对所有测试的黑色素瘤细胞（包括BRAF抑制剂耐药型细胞）均具有抗癌活性。该化合物的分子式为C₂₃H₂₂N₄O₃S₂，分子量为466.58 g/mol。 HA15 是一种有前景的治疗黑色素瘤和其他涉及 BiP/GRP78/HSPA5 的癌症的药物。 |
| 分子式 |
C23H22N4O3S2
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|---|---|---|
| 分子量 |
466.58
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| 精确质量 |
466.113
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| 元素分析 |
C, 59.21; H, 4.75; N, 12.01; O, 10.29; S, 13.74
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| CAS号 |
1609402-14-3
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
73890923
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| 外观&性状 |
Light yellow to green yellow solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.701
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| LogP |
4.56
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| tPSA |
128
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
32
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| 分子复杂度/Complexity |
757
|
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
S(C1=C([H])C([H])=C([H])C2C(=C([H])C([H])=C([H])C=21)N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])(N([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C(C2=C([H])SC(N([H])C(C([H])([H])[H])=O)=N2)=C1[H])(=O)=O
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| InChi Key |
LBSMEKVVMYSTIH-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C23H22N4O3S2/c1-15(28)24-23-25-20(14-31-23)16-7-4-8-17(13-16)26-32(29,30)22-12-6-9-18-19(22)10-5-11-21(18)27(2)3/h4-14,26H,1-3H3,(H,24,25,28)
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| 化学名 |
N-[4-[3-[[5-(dimethylamino)naphthalen-1-yl]sulfonylamino]phenyl]-1,3-thiazol-2-yl]acetamide
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.36 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1433 mL | 10.7163 mL | 21.4326 mL | |
| 5 mM | 0.4287 mL | 2.1433 mL | 4.2865 mL | |
| 10 mM | 0.2143 mL | 1.0716 mL | 2.1433 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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