| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
HDAC6 (histone deacetylase 6; pIC50 = 7.2, IC50 ≈ 63 nM); HDAC10 (pIC50 = 6.8, IC50 ≈ 158 nM).
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| 体外研究 (In Vitro) |
在FRET实验中，HDAC-IN-4对HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC8和HDAC10的抑制pIC50值分别为5.5、4.6、5.4、5.4和6.7[1]。与曲巴司他汀A相比，HDAC-IN-4对HDAC6的抑制效率更高，表明HDAC-IN-4是一种更有用的HDAC6探针[1]。
HDAC-IN-4 是一种选择性 HDAC6 和 HDAC10 抑制剂，在 BRET 检测中，其对 HDAC6 和 HDAC10 的 pIC50 值分别为 7.2 和 6.8。该化合物具有抗肿瘤活性，且对 HDAC6 的抑制作用强于常用的选择性 HDAC6 抑制剂 Tubastatin A，表明 HDAC-IN-4 可能是一种更优的 HDAC6 研究探针。在 FRET 检测中，HDAC-IN-4 对 HDAC1、HDAC2、HDAC3、HDAC8 和 HDAC10 的抑制作用 pIC50 值分别为 5.5（IC50 ≈ 3.16 uM）、4.6（IC50 ≈ 25.1 uM）、5.4（IC50 ≈ 3.98 uM）、5.4（IC50 ≈ 3.98 uM）和 6.7（IC50 ≈ 0.2 uM）。该化合物对HDAC6/10的选择性优于I类HDAC（HDAC1、2、3、8）。HDAC6是一种主要位于胞质的去乙酰化酶，靶向非组蛋白，例如α-微管蛋白、皮质肌动蛋白和HSP90，并参与细胞运动、蛋白质聚集和自噬。HDAC10是一种去乙酰化酶，靶向多胺，参与DNA损伤修复和自噬。HDAC-IN-4通过抑制HDAC6和HDAC10，可能诱导α-微管蛋白过度乙酰化，破坏聚集体途径（该途径对于清除错误折叠蛋白至关重要），并抑制自噬，从而导致蛋白质聚集体的积累和癌细胞死亡。该化合物对多种癌细胞系均显示出抗增殖活性，IC50值在低微摩尔范围内。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
文献中关于HDAC-IN-4体内疗效的报道并不多。然而，由于其作为选择性HDAC6/10抑制剂的作用机制，HDAC-IN-4有望在癌症和神经退行性疾病的小鼠模型中发挥体内活性。HDAC6抑制剂已被证实可在多发性骨髓瘤、乳腺癌和其他癌症的异种移植模型中发挥抗肿瘤活性，并在帕金森病、阿尔茨海默病和夏科-马里-图斯病模型中发挥神经保护作用。典型的HDAC6抑制剂体内研究包括：将药物（口服或腹腔注射）以10-100 mg/kg的剂量，每日一次（QD）或隔日一次（QOD）给药，持续14-21天，用于携带肿瘤异种移植瘤（例如多发性骨髓瘤、乳腺癌）的小鼠。疗效评估指标包括肿瘤生长抑制率（TGI）和药效学标志物（例如，通过蛋白质印迹法检测肿瘤组织中乙酰化α-微管蛋白的水平）。由于HDAC-IN-4对HDAC6和HDAC10具有选择性，与泛HDAC抑制剂相比，其脱靶毒性（例如，对组蛋白和基因表达的影响较小）可能更低。然而，目前尚无HDAC-IN-4的体内具体数据公开。
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| 酶活实验 |
采用生物发光共振能量转移 (BRET) 和荧光共振能量转移 (FRET) 检测方法测定 HDAC-IN-4 对 HDAC 亚型的抑制活性。在 BRET 检测中，将 HEK-293 细胞转染融合构建体，该构建体由特定 HDAC 亚型（例如 HDAC6）与 BRET 供体（例如 Renilla 荧光素酶，RLuc8）融合而成，以及底物肽（例如含有乙酰化赖氨酸的特定肽）与 BRET 受体（例如 GFP2 或 YFP）融合而成。24-48 小时后，收集细胞，重悬于检测缓冲液（PBS）中，并转移至 96 孔白色板。加入不同浓度的HDAC-IN-4（0.0001-100 uM，溶于DMSO，最终DMSO浓度≤0.1%），30-60分钟后测量BRET信号（受体发射波长（515-530 nm）与供体发射波长（460-480 nm）的比值）。计算抑制率，并确定pIC50值。BRET检测可测量活细胞中肽底物的去乙酰化。对于FRET检测，将重组HDAC酶与带有荧光供体和受体的乙酰化肽底物孵育。HDAC对底物的去乙酰化作用可使蛋白酶切割底物，从而导致荧光强度增加。计算IC50值。HDAC6的pIC50值为7.2；HDAC10的pIC50值为6.8；HDAC1的pIC50值为5.5。 HDAC2 的 pIC50 值为 4.6；HDAC3 的 pIC50 值为 5.4；HDAC8 的 pIC50 值为 5.4；HDAC11 的 pIC50 值为 6.7。IC50 值由 pIC50 通过公式 IC50 = 10^(9 - pIC50) nM 转换而来。选择性指数（HDAC1 的 IC50 与 HDAC6 的 IC50 之比）>50，表明具有良好的选择性。
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| 细胞实验 |
使用癌细胞系（例如 HeLa、HCT116、U87 或多发性骨髓瘤细胞系）评估 HDAC-IN-4 的细胞活性。将细胞以每孔 5-10×10³ 个细胞的密度接种于 96 孔板中，培养基中含有 10% FBS。过夜贴壁后，更换新鲜培养基，加入不同浓度的 HDAC-IN-4（0.001-100 μM，3 倍系列稀释，用 DMSO 配制，最终 DMSO 浓度 ≤0.1%）。对照孔仅加入 DMSO。将培养板置于 37℃ 培养 48-72 小时。使用 MTT 法或 CellTiter-Glo 试剂盒检测细胞活力。计算抗增殖活性的 IC50 值。为评估 HDAC6 靶点结合情况，将细胞用 HDAC-IN-4（0.1-10 μM）处理 4-24 小时，然后裂解细胞，并使用抗乙酰化 α-微管蛋白 (K40) 抗体通过蛋白质印迹法检测 α-微管蛋白（HDAC6 的特异性底物）的乙酰化水平。HDAC6 抑制会增加 α-微管蛋白的乙酰化水平。为评估 HDAC10 靶点结合情况，将细胞用 HDAC-IN-4 处理，并检测 HDAC10 特异性底物（例如 p53 或多胺）的乙酰化水平。计算增加乙酰化水平的 EC50 值。细胞凋亡通过 Annexin V/PI 双染和流式细胞术进行评估。可以通过用蛋白酶体抑制剂（例如 MG-132）处理细胞以诱导蛋白质聚集，然后添加 HDAC-IN-4 并通过免疫荧光观察聚集体的形成，来评估该化合物对聚集体途径的影响。
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| 动物实验 |
目前尚无已发表的HDAC-IN-4体内动物实验方案。然而，对于选择性HDAC6/10抑制剂的标准体内疗效研究，可以使用小鼠异种移植模型。将5×10⁶个癌细胞（例如HCT116结肠癌细胞或MM.1S多发性骨髓瘤细胞）悬浮于100 μL PBS与Matrigel按1:1比例混合的溶液中，皮下注射到6-8周龄、18-22 g的雌性无胸腺裸鼠体内。当肿瘤体积达到100-200 mm³时，将小鼠随机分为治疗组（n=8-10）。 HDAC-IN-4 配制于合适的溶剂中（例如，10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80、45% 生理盐水；或 0.5% 甲基纤维素），并以 10-50 mg/kg 的剂量，每日一次 (QD) 或隔日一次 (QOD) 给药，持续 14-21 天。对照组仅接受溶剂。阳性对照组可接受 Tubastatin A（另一种选择性 HDAC6 抑制剂）或泛 HDAC 抑制剂（例如，SAHA）。每 2-3 天用游标卡尺测量肿瘤体积，并记录体重。采集血样进行药代动力学分析以及血液学（全血细胞计数）和血液生化（ALT、AST、BUN、肌酐）检测。研究结束时，处死小鼠，切除肿瘤，称重并进行后续处理。采用蛋白质印迹法分析肿瘤裂解液中乙酰化α-微管蛋白、乙酰化组蛋白（以确认选择性）和凋亡标志物（裂解型caspase-3、PARP）。肿瘤切片进行苏木精-伊红染色，并检测Ki-67（增殖）和裂解型caspase-3（凋亡）。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
HDAC-IN-4 的药代动力学 (PK) 数据尚未发表。根据其理化性质（分子量 335.4，可能具有中等亲脂性），预计其具有口服生物利用度。典型的 HDAC6 抑制剂在小鼠体内的半衰期为 1-4 小时，清除率中等。目前尚无详细的 PK 参数。其分布容积 (Vd) 可能中等。该化合物可能通过 CYP450 酶代谢。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
HDAC-IN-4的毒性特征尚未得到系统表征。基于其作为选择性HDAC6/10抑制剂的作用机制，预计其安全性优于泛HDAC抑制剂。泛HDAC抑制剂会抑制I类HDAC（HDAC1、2、3），从而导致显著的毒性（例如血小板减少症、中性粒细胞减少症、疲劳和心脏毒性）。HDAC6是一个相对安全的靶点，因为HDAC6基因敲除小鼠能够存活并具有生育能力，且无明显异常。然而，HDAC6抑制可能影响免疫系统（例如调节性T细胞功能），并可能引起轻微的胃肠道反应。HDAC10抑制可能影响DNA修复和自噬。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
在实验室操作中，应按照标准化学品安全预防措施处理 HDAC-IN-4：戴手套、穿实验服、佩戴护目镜。
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| 分子式 |
C20H22CLN3O2
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|---|---|
| 分子量 |
371.860583782196
|
| 精确质量 |
335.163
|
| CAS号 |
1252003-13-6
|
| PubChem CID |
46918825
|
| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| LogP |
2.3
|
| tPSA |
57.5
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
25
|
| 分子复杂度/Complexity |
478
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
Cl.O=C(C1C=CC(=CC=1)CN1C2C=CC=CC=2C2CCN(C)CC1=2)NO
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| InChi Key |
JVELXRPQMVXDDP-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C20H21N3O2/c1-22-11-10-17-16-4-2-3-5-18(16)23(19(17)13-22)12-14-6-8-15(9-7-14)20(24)21-25/h2-9,25H,10-13H2,1H3,(H,21,24)
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| 化学名 |
N-hydroxy-4-[(2-methyl-3,4-dihydro-1H-pyrido[3,4-b]indol-9-yl)methyl]benzamide
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| 别名 |
HDACIN4; HDAC IN 4
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~149.08 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6892 mL | 13.4459 mL | 26.8918 mL | |
| 5 mM | 0.5378 mL | 2.6892 mL | 5.3784 mL | |
| 10 mM | 0.2689 mL | 1.3446 mL | 2.6892 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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