HLM006474

目录号: V8769 纯度: ≥98%

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HLM006474是一种广谱（宽范围）E2F抑制剂，可以抑制A375细胞中E2F4 DAN的结合，IC50为29.8 µM。

HLM006474 CAS号: 353519-63-8
产品类别: New1

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

产品描述
生物活性&实验参考方法
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产品描述

HLM006474 是一种广谱（作用范围广）E2F 抑制剂，能够抑制 A375 细胞中 E2F4 与 DAN 的结合，IC50 值为 29.8 µM。

生物活性&实验参考方法

靶点	E2F family transcription factors (mainly E2F4/DP2 heterodimer); in vivo IC₅₀ for inhibiting E2F4 DNA-binding activity in A375 cells: 29.8 ± 7.6 μM[1]
体外研究 (In Vitro)	在浓度为 10 和 20 µM 时，HLM006474 对 A375 细胞中 E2F4 的 DNA 结合几乎没有影响。在 40 µM 时，它显著抑制 E2F4 的 DNA 结合，而在 60 和 80 µM 时，这种抑制作用逐渐减弱。HLM006474 (40 µM) 通过抑制 E2F4 的 DNA 结合活性并下调其表达来抑制 E2F4 的活性。在 A375 和 231 细胞系中，HLM006474 (40 µM) 在 24 小时内也显著诱导细胞凋亡。HLM006474 是 PARP 裂解的强效诱导剂，并显著降低细胞周期蛋白 D3 的表达 [1]。HLM006474 的 IC50 值范围为 15 至 75 µM，可降低小细胞肺癌 (SCLC) 和非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞系的活力。在H292和H1299细胞系中，HLM006474 (60 µM) 可暂时性地增加几种已知的E2F调控基因的表达。在H1299细胞中，HLM006474 (20 µM) 与紫杉醇表现出较弱的协同作用，但与顺铂和吉西他滨则表现出拮抗作用[2]。HLM006474可导致MAD2 mRNA水平下降。此外，在人肺癌A549细胞中，HLM006474显著降低了Mad2蛋白和pRb-S780信号的升高，但对Skp2蛋白水平没有影响[3]。 HLM006474以浓度依赖的方式抑制A375细胞中E2F4的DNA结合活性，在40 μM时抑制作用明显，在60–80 μM时抑制作用增强[1]。 HLM006474（40 μM）在9小时开始抑制A375细胞中E2F4的DNA结合活性，并在24小时降低总E2F4蛋白水平[1]。 HLM006474（40 μM，24小时）显著诱导A375和MDA-MB-231细胞凋亡，但在MCF-7细胞中未观察到明显的细胞凋亡。 HFF细胞[1] HLM006474在约9小时后诱导A375细胞凋亡，并在12小时观察到明显的PARP裂解[1] HLM006474通过p53非依赖性途径诱导细胞凋亡，下调细胞周期蛋白D3并轻微降低Mcl-1表达，这与顺铂、阿霉素和VP16的作用机制不同[1] HLM006474与顺铂、阿霉素或VP16在消除A375细胞中E2F4表达方面具有协同作用[1] E2F4缺失的MEF细胞对HLM006474诱导的细胞凋亡的敏感性低于野生型MEF细胞，证实了E2F4的部分缺失。依赖性[1] HLM006474抑制3D皮肤重建模型中A375黑色素瘤细胞的增殖和侵袭，降低E2F4水平和Ki-67阳性率[1]
酶活实验	采用电泳迁移率变动分析 (EMSA) 检测 E2F4 DNA 结合活性：将 20 μg 全细胞提取物与 ³²P 标记的 E2F 特异性寡核苷酸探针孵育；反应混合物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离；使用磷光成像仪采集凝胶信号，并用 ImageQuant 软件定量分析条带强度；定量分析重复三次[1] 使用针对 E2F4、Rb、p107、p130、E2F1、E2F2 和 E2F3 的特异性抗体进行超迁移 EMSA，以验证 E2F 复合物的组成[1]
细胞实验	细胞活力检测：将细胞接种于培养板中，用梯度浓度的HLM006474处理，并孵育一定时间；采用MTS法检测细胞活力以评估抗增殖作用[1] TUNEL法检测细胞凋亡：用HLM006474处理细胞，收集并固定；使用APO-BRDU试剂盒标记凋亡细胞，并通过流式细胞术进行分析[1] 细胞周期和亚G1期分析：消化、洗涤细胞，用70%乙醇固定，用RNase A和碘化丙啶处理；通过流式细胞术检测DNA含量以评估细胞周期分布和亚G1期凋亡细胞比例[1] Western blot实验：每泳道上样50 μg全细胞提取物；蛋白质经SDS-PAGE分离后转移至膜上，并与针对E2F4、E2F1、PARP、cyclin D3、p53、Mcl-1和β-actin的一抗孵育；信号通过HRP标记的二抗和化学发光法显色[1] 3D细胞培养实验：将A375细胞和正常人表皮角质形成细胞以1:10的比例混合，接种于成纤维细胞收缩的胶原凝胶上；在无血清培养基中分化约7天后，用0、40或80 μM的HLM006474处理培养物，并在设定的时间点收集组织；组织经固定、包埋、切片后进行H&E染色或进行S-100、E2F4、活化caspase-3和Ki-67的免疫组化染色[1]
参考文献	[1]. A small-molecule E2F inhibitor blocks growth in a melanoma culture model. Cancer Res. 2008 Aug 1;68(15):6292-9. [2]. E2F inhibition synergizes with paclitaxel in lung cancer cell lines. PLoS One. 2014 May 15;9(5):e96357.
其他信息	细胞活力检测：将细胞接种于培养板中，用梯度浓度的HLM006474处理，并孵育一定时间；采用MTS法检测细胞活力以评估抗增殖作用[1] TUNEL法检测细胞凋亡：用HLM006474处理细胞，收集并固定；使用APO-BRDU试剂盒标记凋亡细胞，并通过流式细胞术进行分析[1] 细胞周期和亚G1期分析：消化、洗涤细胞，用70%乙醇固定，用RNase A和碘化丙啶处理；通过流式细胞术检测DNA含量以评估细胞周期分布和亚G1期凋亡细胞比例[1] Western blot实验：每泳道上样50 μg全细胞提取物；蛋白质经SDS-PAGE分离后转移至膜上，并与针对E2F4、E2F1、PARP、cyclin D3、p53、Mcl-1和β-actin的一抗孵育；信号通过HRP标记的二抗和化学发光法显色[1] 3D细胞培养实验：将A375细胞和正常人表皮角质形成细胞以1:10的比例混合，接种于成纤维细胞收缩的胶原凝胶上；在无血清培养基中分化约7天后，用0、40或80 μM的HLM006474处理培养物，并在设定的时间点收集组织；组织经固定、包埋、切片后进行H&E染色或进行S-100、E2F4、活化caspase-3和Ki-67的免疫组化染色[1]

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C25H25N3O2
分子量	399.484905958176
精确质量	399.195
CAS号	353519-63-8
PubChem CID	2895500
外观&性状	White to off-white solid powder
LogP	5.625
tPSA	67.27
氢键供体(HBD)数目	2
氢键受体(HBA)数目	5
可旋转键数目(RBC)	6
重原子数目	30
分子复杂度/Complexity	533
定义原子立体中心数目	0
SMILES	OC(C1=NC(C)=CC=C1C=C2)=C2C(NC3=NC=CC=C3)C(C=C4C)=CC=C4OCC
InChi Key	CYNZBLNMIJNBSF-UHFFFAOYSA-N
InChi Code	InChI=1S/C25H25N3O2/c1-4-30-21-13-11-19(15-16(21)2)23(28-22-7-5-6-14-26-22)20-12-10-18-9-8-17(3)27-24(18)25(20)29/h5-15,23,29H,4H2,1-3H3,(H,26,28)
化学名	7-[(4-ethoxy-3-methylphenyl)-(pyridin-2-ylamino)methyl]-2-methylquinolin-8-ol
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO : ~16.67 mg/mL (~41.73 mM)
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* 2.5 mg/mL (6.26 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More* 配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO : ~16.67 mg/mL (~41.73 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.26 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	2.5033 mL	12.5163 mL	25.0325 mL
	5 mM	0.5007 mL	2.5033 mL	5.0065 mL
	10 mM	0.2503 mL	1.2516 mL	2.5033 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

HLM006474 inhibits E2F4 DNA-binding in vivo A. The synthesis scheme and chemical structure of HLM006474 (Formula C24H25N3O2, MW 399.5). B. Human A375 melanocytes were treated for 9-hrs with the indicated concentration of HLM006474 (6474). Whole cell extracts were prepared and total E2F4 activity determined by EMSA (top panel). The identity of the E2F4 complex is demonstrated in Supplementary Fig 1. Identical extracts were examined in westerns using the indicated antibodies to E2F4 and E2F1. The actin western serves as a loading control. C. PhosphoImager EMSA results from multiple experiments are quantified and plotted. Signal intensities are normalized to the untreated sample. The error bars represent the standard deviation from the mean. Results reveal an in vivo IC50 of 29.8 µM (± 7.6 µM) for A375 cells.[1].Ma Y, et al. A small-molecule E2F inhibitor blocks growth in a melanoma culture model. Cancer Res. 2008 Aug 1;68(15):6292-9.

HLM006474 treatment leads to down regulation of total E2F4 protein A. A375 cells were treated with 40 µM HLM006474 and EMSA and Western analyses performed at the indicated time intervals. B. EMSA results from four independent experiments (as in A) were quantified and averages plotted as a function of time of treatment. The error bars represent the standard deviation from the mean.[1].Ma Y, et al. A small-molecule E2F inhibitor blocks growth in a melanoma culture model. Cancer Res. 2008 Aug 1;68(15):6292-9.

HLM006474 induces apoptosis in multiple cell lines A. A375, MD-MBA-231 (“231”), MCF-7 and HFFs were treated with 40 µM HLM006474 for various times as indicated. Levels of apoptosis were determined using an Apo-BrdU TUNEL assay (BD Pharmingen). B. A375 cells were treated with 40 µM HLM006474 for various times as indicated. Levels of apoptosis were determined based upon sub-G1 DNA content. C. A375 cells were treated as in B. Levels of PARP cleavage, E2F4, and E2F1 were determined by Western blotting. Actin served as a loading control.[1].Ma Y, et al. A small-molecule E2F inhibitor blocks growth in a melanoma culture model. Cancer Res. 2008 Aug 1;68(15):6292-9.