HSF1A

HSF1

体外活性：HSF1A 是热休克转录因子 1 (HSF1) 的细胞渗透性小分子激活剂。 HSF1A 保护细胞免受应激诱导的细胞凋亡，在体内和体外结合 TRiC 亚基，并在不干扰 ATP 水解的情况下抑制 TRiC 活性。 TRiC 复合物的基因失活或耗竭会导致人类 HSF1 激活，并且 HSF1A 在体外抑制纯化的 TRiC 和 HSF1 之间的直接相互作用。热休克转录因子 1 (HSF1) 是一种进化上保守的转录因子，可保护细胞免受蛋白质错误折叠诱导的应激和细胞凋亡。激酶测定：使用补充有 1% Trition- 的生物素结合缓冲液（20 mM HEPES、5 mM MgCl2、1 mM EDTA、100 mM KCl、0.03% NP-40）从哺乳动物、酵母和大肠杆菌培养物中产生蛋白质提取物X100 和蛋白酶抑制剂。将大约 0.5 mg 蛋白质提取物与 100 μM HSF1A-生物素在 4°C 下孵育 4 小时，并用 NeutrAvidin 琼脂糖树脂捕获 HSF1A-生物素相关蛋白质。在生物素结合缓冲液中洗涤后，使用 50 μL 生物素洗脱缓冲液（100 mM Tris、150 mM NaCl、0.1 mM EDTA、2 mM D-生物素）洗脱蛋白质，在 4-20% SDS-PAGE 上解析并进行免疫印迹。对于纯化的 TRiC 和 Hsp70 分析，将 5 nM 蛋白质在生物素结合缓冲液+0.5% Triton X-100 中与 100 μM 生物素或 100 μM HSF1A-生物素在 4°C 下孵育 4 小时，并用 NeutrAvidin 树脂捕获。对于 NiNTA 纯化的酵母 Tcp1，将不同浓度的 Tcp1 0.5 μM、1 mM、2 mM、3 mM 和 4 mM 在 25 mM Hepes pH 7.5、150 mM NaCl 中与 0.5 μM 生物素或 HSF1A-生物素在 4° 下孵育 4 小时C 并用 NeutrAvidin 树脂捕获。细胞测定：HSF1A 保护细胞免受应激诱导的细胞凋亡，结合 TRiC 亚基并抑制 TRiC 活性，而不干扰 ATP 水解。 TRiC 复合物的基因失活或耗竭会导致人类 HSF1 激活，并且 HSF1A 在体外抑制纯化的 TRiC 和 HSF1 之间的直接相互作用。此外，使用 FITC 与 HSF1A 偶联的荧光各向异性实验表明，HSF1A-FITC 与 TRiC 的纯化 Tcp1 亚基结合，亲和力约为 600 nM。通过将纯化的 Tcp1 滴定到含有 500 nM 生物素或 HSF1A-生物素的结合反应中来定性验证这一点。通过计算含有聚集体的细胞数量作为细胞总数的函数进行定量，结果表明，在 HSF1A 浓度低至 2 µM 时，观察到含有聚集体的细胞数量减少。含有聚集体的细胞比例继续以剂量依赖性方式减少，因此用 12 µM HSF1A 预处理导致约 20% 的细胞表现出荧光显微镜可见的聚集体。将 PC12 细胞接种到 96 孔板（5×104 个细胞/孔）中，用浓度不断增加的 HSF1A（2、4、8 和 12 μM）处理 15 小时，此时通过在培养皿中孵育来刺激 httQ74-GFP 表达。 1 µg/mL 多西环素存在 5 d。通过 XTT 活力测定评估细胞活力

将 10 周大的 Wistar京都大鼠 (WKY) 饲养在恒温 (22°C)、12 小时光/暗循环下，并提供食物和自来水。将动物分为三组：WKY大鼠（对照组）、DOX大鼠和用HSF1A处理的DOX大鼠。每组包含五只动物。 DOX组连续6周腹腔注射DOX（5 mg/kg），以达到30 mg/kg的累积剂量，该剂量已被充分证明可实现心脏毒性。小分子HSF1激活剂HSF1A（100毫克/公斤/天）腹膜内注射。 HSF1A 增强 HSF1 活性，稳定 HSF1 表达并最大限度地减少阿霉素 (DOX) 引起的心脏损伤。 WKY大鼠用DOX（累积剂量：30mg/kgw）和DOX联合HSF1A（100mg/kgw/天）攻击。补充HSF1A可显着将心脏功能提升至对照组的水平。 HSF1A 已被证明可以刺激人类 HSF1 核易位、提高蛋白伴侣表达并改善神经退行性疾病模型中的蛋白错误折叠和细胞死亡。超声心动图结果表明，HSF1A 还可以减轻 DOX 引起的心功能衰竭。

使用生物素结合缓冲液（20 mM HEPES、5 mM MgCl₂、1 mM EDTA、100 mM KCl、0.03% NP-40），以及蛋白酶抑制剂和 1% Trition-X100、蛋白质提取物是从哺乳动物、酵母和大肠杆菌培养物中产生的。与 100 μM HSF1A-生物素在 4°C 下孵育 4 小时后，用 NeutrAvidin 琼脂糖树脂捕获约 0.5 mg 的蛋白质提取物，与 HSF1A-生物素的相关蛋白质相对应。一旦蛋白质在生物素结合缓冲液中得到净化，它们就会在 4–20% SDS-PAGE 上进行解析，并使用 50 μL 生物素洗脱缓冲液（100 mM Tris、150 mM NaCl、0.1 mM EDTA 和 2 mM D）进行免疫印迹。 -生物素）。为了分析纯化的 TRiC 和 Hsp70，将 5 nM 蛋白在含有 100 μM 生物素或 100 μM HSF1A-生物素的生物素结合缓冲液+0.5% Triton X-100 中于 4°C 孵育 4 小时。然后使用 NeutrAvidin Rinse 捕获蛋白质。将不同浓度的 Tcp1（0.5 μM、1 mM、2 mM、3 mM 和 4 mM）溶解在 25 mM Hepes pH 7.5、150 mM NaCl 中，与 0.5 μM 生物素或 HSF1A-生物素在 4°C 下孵育 4 小时，然后使用 NeutrAvidin 树脂捕获 NiNTA 纯化的酵母 Tcp1[1]。

将 PC12 细胞接种到 96 孔板（5 ×10⁴ 细胞/孔）中，用浓度递增的 HSF1A（2、4、8 和 12 μM）处理 15 小时。此后，在 1 µg/mL 强力霉素存在下将细胞孵育 5 天，刺激 httQ74-GFP 表达。 XTT 活力测定用于评估细胞活力[2]。

[1]. A direct regulatory interaction between chaperonin TRiC and stress-responsive transcription factor HSF1. Cell Rep. 2014 Nov 6;9(3):955-66.

[2]. Modulation of heat shock transcription factor 1 as a therapeutic target for small molecule intervention in neurodegenerative disease. PLoS Biol. 2010 Jan 19;8(1):e1000291.

[3]. Doxorubicin attenuates CHIP-guarded HSF1 nuclear translocation and protein stability to trigger IGF-IIR-dependent cardiomyocyte death. Cell Death Dis. 2016 Nov 3;7(11):e2455.

[4]. The chaperonin TRiC/CCT is essential for the action of bacterial glycosylating protein toxins like Clostridium difficile toxins A and B. Proc Natl Acad Sci U S A. 2018 Sep 18;115(38):9580-9585.

C21H19N3O2S2

409.52

409.09

C, 61.59; H, 4.68; N, 10.26; O, 7.81; S, 15.66

1196723-93-9

Solid powder

CCC1=CC=C(C=C1)S(=O)(=O)NC2=CC(=NN2C3=CC=CC=C3)C4=CC=CS4

KJTITGSAONQVPY-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H19N3O2S2/c1-2-16-10-12-18(13-11-16)28(25,26)23-21-15-19(20-9-6-14-27-20)22-24(21)17-7-4-3-5-8-17/h3-15,23H,2H2,1H3

4-ethyl-N-(2-phenyl-5-thiophen-2-ylpyrazol-3-yl)benzenesulfonamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Solubility in Formulation 1: ≥ 2.5 mg/mL (6.10 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

---

Solubility in Formulation 2: 2.5 mg/mL (6.10 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), suspension solution; with ultrasonication.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of 20% SBE-β-CD physiological saline solution and mix evenly.
Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.

---

View More

Solubility in Formulation 3: ≥ 2.5 mg/mL (6.10 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of corn oil and mix evenly.

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。