| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 500mg |
|
||
| 1g |
|
||
| 5g |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
Aminoglycoside
Hygromycin B binds to helix 44 of 16S rRNA in the small ribosomal subunit, specifically interacting with nucleotides C1403, G1405, G1494, U1495, C1496, and U1498 (E. coli numbering). [3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)合成潮霉素B,这是一种氨基环醇类抗生素,能强烈抑制70S和80S核糖体[1]。浓度为0.38 mM时,潮霉素B可完全抑制酵母细胞在富营养培养基中的生长,这很可能是通过阻止胞质核糖体合成蛋白质实现的。低浓度的潮霉素B可显著抑制酵母、小麦胚芽和兔网织红细胞无细胞提取物中多肽的合成。该抗生素可阻止延伸因子EF-2的转位,而EF-2可抑制酵母多聚核糖体延伸肽链。潮霉素B对EF-2转位的抑制作用可能是由于其稳定了与核糖体受体位点相连的肽酰-tRNA[2]。
潮霉素B抑制无细胞体系中聚苯丙氨酸的合成。在链霉菌(Streptomyces lividans)的系统中,导致50%抑制的药物浓度约为0.5 μM;在产生菌吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的系统中,需要136 μM才能达到50%的抑制(表明吸水链霉菌的核糖体对该药物敏感,但S100组分中修饰酶的存在赋予了其耐药性)。[1] 潮霉素B在体内和体外均能诱导错读,从而促进表型抑制。[1] 潮霉素B在酶促磷酸化后对蛋白质合成无活性。磷酸化产物7″-O-磷酸基潮霉素B在体外完全缺乏生物活性(在浓度高达30 μM时,对链霉菌无细胞体系中聚苯丙氨酸的合成没有抑制作用)。用碱性磷酸酶去磷酸化后,其抑制活性完全恢复。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
潮霉素B通过阻止核糖体易位来抑制蛋白质合成,而不会显著改变体内核糖体的定位[3]。
在转基因小鼠中,通过组成型表达细菌hygR基因,可赋予其体内潮霉素B抗性[4]。 在耻垢分枝杆菌中,在含有50 μg/mL潮霉素B的培养基上分离出了自发产生的潮霉素B抗性突变株。16S rRNA基因测序鉴定出U1406C(35个突变株中的24个)、C1496U(35个突变株中的6个)和U1498C(35个突变株中的5个)位点的点突变。[3] -野生型耻垢分枝杆菌的MIC为0.03 μg/mL(33.4 μM)。U1406C突变株的MIC为1024 μg/mL(1.96 mM); C1496U 的 MIC 为 512 μg/mL (0.97 mM);U1498C 的 MIC 为 128–256 μg/mL (0.24–0.48 mM)。[3] - 与野生型(3.4 ± 0.4 h)相比,U1406C 和 C1496U 突变体的世代时间显著延长(分别为 5.3 ± 0.8 h 和 5.2 ± 1.1 h)。U1498C 的世代时间为 3.8 ± 0.3 h。[3] - 尝试从亲本耻垢分枝杆菌 SMR5(携带两个功能性 rRNA 操纵子)中分离耐药突变体均未成功(突变率 < 10⁻¹⁰),表明耐药突变以隐性方式发挥作用。 [3] - 利用 RecA 介导的同源重组分析,将携带抗性突变(U1406C、C1496U、U1498C)的质粒导入到非功能性 rRNA 片段中,并导入到耻垢分枝杆菌 rn⁻ 中。获得了对潮霉素 B 具有抗性的重组菌株,证实这些突变是导致抗性的原因。[3] |
| 酶活实验 |
潮霉素B是一种氨基糖苷类抗生素,对原核生物和真核生物的核糖体均有活性。目前尚未有关于细菌核糖体改变导致其对潮霉素B产生耐药性的报道,因此我们利用革兰氏阳性菌耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)的单一rRNA等位基因衍生物,研究真细菌核糖体对潮霉素B产生耐药性的分子机制。研究发现,耐药突变仅定位于16S rRNA。观察到的突变,即16S rRNA U1406C、C1496U和U1498C(以大肠杆菌编号为准),均位于16S rRNA保守螺旋44中潮霉素B结合位点附近。参与潮霉素B抗性的16S rRNA位点在生命的三大域中高度保守,这解释了潮霉素B缺乏特异性和普遍毒性的原因[3]。潮霉素B是一种氨基环醇类抗生素,能强烈抑制70S和80S核糖体,由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)合成。这种革兰氏阳性菌丝体的核糖体在体外可被该抗生素抑制。然而,由于该链霉菌具有潮霉素B磷酸转移酶活性,因此在体内对该药物具有高度耐药性。凝胶过滤法表明,该酶的分子量为 42000,能够修饰其抗生素底物生成 7″-O-磷酸基潮霉素 B,后者在体内和体外均完全缺乏生物活性[1]。
潮霉素 B 磷酸转移酶 (HPH) 活性测定:放射化学法使用 [γ-³²P]ATP 作为磷酸供体。反应混合物 (50 μL) 包含 10 μL 缓冲液 I(100 mM Tris/MES,pH 7.5,50 mM MgCl₂,500 mM NH₄Cl,2.5 mM 二硫苏糖醇),10 μL 酶制剂,1 μg 潮霉素 B 和 10 μL 1.5 mM [γ-³²P]ATP (15 mCi/mmol)。测定在 30°C 下进行 20 分钟,然后加热至 75°C 终止反应。取一定量样品滴加到磷酸纤维素滤纸(Whatman P-81)上,用自来水和蒸馏水洗涤,然后计数放射性。空白对照实验不添加潮霉素B。[1] 分光光度法:用于连续测定反应速率,使用0.8 U HPH、2.5-100 μM潮霉素B和30-3000 μM ATP。[1] 动力学常数:HPH对潮霉素B的Kₘ值约为2.35 μM(分光光度法)或1.5 μM(放射化学法);对ATP的Kₘ值约为57 μM(分光光度法)或76 μM(放射化学法)。当潮霉素B浓度高于5 μM时,观察到底物抑制。[1] 潮霉素B的磷酸化位点通过¹H NMR确定。是去甲氧甲酸部分的7″-羟基。[1] |
| 细胞实验 |
潮霉素B是一种不常见的氨基糖苷类抗生素,对原核细胞和真核细胞均有活性。浓度为0.38 mM的潮霉素B可完全抑制酵母细胞在富营养培养基中的生长,推测其机制是通过抑制胞质核糖体的蛋白质合成。低浓度的潮霉素B可强烈抑制兔网织红细胞、小麦胚芽和酵母无细胞提取物中的多肽合成。该抗生素通过阻止延伸因子EF-2依赖的转位来抑制酵母多聚核糖体对肽链的延伸,但它并不影响EF-2-GTP-核糖体复合物的形成,也不影响与转位无关的EF-2和核糖体依赖的GTP水解。潮霉素B对转位的抑制作用可能是由于其稳定了与核糖体受体位点结合的肽酰-tRNA,因为在潮霉素B存在下,[3H]Phe-tRNA-EF-1-poly(U)-核糖体和[3H]Phe-tRNA-poly(U)-核糖体复合物的稳定性均有所提高。网织红细胞核糖体对聚苯丙氨酸合成的抑制以及酵母多聚核糖体对肽酰-tRNA的酶促转位均可通过增加EF-2的浓度来逆转,这表明EF-2和潮霉素B在核糖体上的结合位点之间存在关联。在高钾浓度下发生的非酶促转位以及肽键形成步骤均不受潮霉素B的影响[2]。
最小抑菌浓度(MIC)在微量滴定板中测定。起始培养物中细菌细胞的 OD₆₀₀ 值为 0.025,并以两倍稀释度加入潮霉素 B。最小抑菌浓度 (MIC) 定义为在 37°C 下培养 72 小时(约 24 代)后完全抑制细菌生长的药物浓度。[3] - 生长速率通过测量液体培养中的世代时间来确定。[3] - 自发产生的耐药突变体在含有 50 μg/mL 潮霉素 B 的 LB 琼脂平板上进行筛选。[3] |
| 动物实验 |
将潮霉素B溶于无菌水中。对携带hygR基因的C57BL/6J-TgN(pPWL512hyg)1Em小鼠腹腔注射潮霉素B,起始剂量为2.7 mg/kg,之后每次剂量递增50%。对野生型C57BL/6J对照小鼠注射等体积的无菌生理盐水。总注射量为0.5 mL。连续10天,每天观察动物的体重和一般健康状况[4]。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
潮霉素B抑制古细菌、真细菌、真菌和高等真核生物的蛋白质合成,表明其具有普遍毒性。[3]
- 赋予其抗性的核苷酸(U1406、C1496、U1498)在所有生命域中普遍保守,这解释了其广谱毒性和缺乏选择性。[3] |
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
无定形固体或棕色粉末。(NTP, 1992)
潮霉素B是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)产生的一种氨基糖苷类抗生素。它通过抑制蛋白质合成来杀死细菌、真菌和高等真核细胞。 一种由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)产生的氨基糖苷类抗生素。它用作驱虫药,用于治疗猪的大型蛔虫、结节线虫和鞭虫感染。 另见:潮霉素B(注:已移至此处)。 潮霉素B是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)产生的一种氨基糖苷类抗生素。它通过阻断核糖体转位来抑制蛋白质合成,而不会在体内造成明显的错读。 [3] - 与经典的2-脱氧链霉胺类氨基糖苷类抗生素不同,潮霉素B具有独特的结构,其5位取代的N-甲基-2-脱氧链霉胺通过双醚键连接两个糖基,形成一个五元环。[3] - 该药物以序列特异性的方式结合于16S rRNA第44螺旋顶部附近,位于A位点和P位点之间,并与核苷酸C1403、G1405、G1494、U1495、C1496和U1498相互作用。[3] - 本研究首次报道了真细菌中针对潮霉素B的核糖体耐药突变,这些突变定位于16S rRNA的U1406、C1496和U1498位点。 [3] - 这些突变的隐性性质解释了为什么在具有多个 rRNA 操纵子的细菌中难以分离出抗性突变体。[3] - 原核生物和真核生物中抗性相关核苷酸的普遍保守性解释了潮霉素 B 缺乏物种特异性和普遍毒性的原因。[3] |
| 分子式 |
C20H37N3O13
|
|---|---|
| 分子量 |
527.52008
|
| 精确质量 |
527.232
|
| 元素分析 |
C, 45.54; H, 7.07; N, 7.97; O, 39.43
|
| CAS号 |
31282-04-9
|
| PubChem CID |
20054942
|
| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
|
| 密度 |
1.7±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
897.6±65.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
160-180ºC
|
| 闪点 |
496.7±34.3 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±0.6 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.672
|
| LogP |
0.64
|
| tPSA |
272.06
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
11
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
16
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
36
|
| 分子复杂度/Complexity |
756
|
| 定义原子立体中心数目 |
14
|
| SMILES |
CN[C@H]1C[C@H]([C@@H]([C@H]([C@@H]1O)O[C@H]2[C@@H]3[C@H]([C@H]([C@H](O2)CO)O)OC4(O3)[C@@H]([C@H]([C@H]([C@H](O4)C(CO)N)O)O)O)O)N
|
| InChi Key |
GRRNUXAQVGOGFE-HUCHGKBZSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C20H37N3O13/c1-23-7-2-5(21)9(26)15(10(7)27)33-19-17-16(11(28)8(4-25)32-19)35-20(36-17)18(31)13(30)12(29)14(34-20)6(22)3-24/h5-19,23-31H,2-4,21-22H2,1H3/t5-,6+,7+,8-,9+,10-,11+,12-,13+,14-,15-,16+,17+,18-,19+,20?/m1/s1
|
| 化学名 |
D-Streptamine, O-6-amino-6-deoxy-L-glycero-D-galacto-heptopyranosylidene(1-2-3)-O-beta-D-talopyranosyl-(1->)-2-deoxy-N3-methyl-
|
| 别名 |
HygromycinB, Hygrovetine, Hygromix 2.4, Antihelmycin, Hygromix-8;Hygromycin-B; AI3-29796; hygromycin b; 31282-04-9; Hygrovetine; MFCD06795479; (2S,3R,3A'S,4S,4'S,5R,6R,6'R,7'S,7a'S)-4'-(((1R,2S,3R,5S,6R)-3-amino-2,6-dihydroxy-5-(methylamino)cyclohexyl)oxy)-6-((R)-1-amino-2-hydroxyethyl)-6'-(hydroxymethyl)octahydro-4'H-spiro[pyran-2,2'-[1,3]dioxolo[4,5-c]pyran]-3,4,5,7'-tetraol; 1217468-11-5; C20H37N3O13; CHEMBL4647156; AI3 29796; AI329796
|
| HS Tariff Code |
2934.99.03.00
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~189.57 mM )
H2O : 50~100 mg/mL (~94.78 mM ) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (9.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (9.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (9.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.74 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 5 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.74 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。 配方 6 中的溶解度: ≥ 0.5 mg/mL (0.95 mM) (饱和度未知) in 1% DMSO 99% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 7 中的溶解度: 10% DMSO+40% PEG300+5% Tween-80+45% Saline: ≥ 5 mg/mL (9.48 mM) 配方 8 中的溶解度: 100 mg/mL (189.57 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8957 mL | 9.4783 mL | 18.9566 mL | |
| 5 mM | 0.3791 mL | 1.8957 mL | 3.7913 mL | |
| 10 mM | 0.1896 mL | 0.9478 mL | 1.8957 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|