Ilexsaponin B1

别名: 冬青皂苷B1;冬青苷D;毛冬青皂苷B1;冬青苷 D
目录号: V34363 纯度: ≥98%
Ilexoside D 是从冬凌草 (Rubesia rubescens) 的根中提取的。
Ilexsaponin B1 CAS号: 109008-27-7
产品类别: Natural Products
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
冬青皂苷D提取自红花楸(Rubesia rubescens)的根。冬青皂苷D具有抗组织因子活性和抗血栓活性。
冬青皂苷B1(原文中称为冬青皂苷D)是一种三萜皂苷(3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃木糖基-20-表莫莫酸),分离自毛冬青(Ilex pubescens Hook. et Arn.)的根。[1]

它此前已被鉴定为一种抗血栓成分。早期研究表明,与阿司匹林相比,体外实验中,它对ADP和凝血酶诱导的血小板聚集的抑制作用比胶原蛋白诱导的更有效;离体实验中,它对ADP和胶原蛋白诱导的血小板聚集(但对凝血酶诱导的血小板聚集无抑制作用)的抑制作用强于阿司匹林。然而,在此报告之前,其对血浆凝固的影响尚未得到充分评估。[1]

本研究探讨了其对出血时间、血液凝固时间和组织因子(因子III)活性的影响。[1]
生物活性&实验参考方法
靶点
Ilexsaponin B1 inhibits tissue factor (tissue thromboplastin, coagulation Factor III). [1]
体外研究 (In Vitro)
在塑料试管中,在无组织因子存在的情况下,冬青皂苷B1(全血最终浓度≤0.125 mM,PRP和PPP最终浓度≤0.25 mM)不影响全血、富血小板血浆(PRP)或贫血小板血浆(PPP)的复钙凝血时间。[1]

在组织因子(大鼠肺微粒体组分)存在的情况下,冬青皂苷B1以剂量依赖的方式延长全血、PRP和PPP的还原凝血酶原时间(测试浓度最高达0.25 mM)。[1]

在玻璃试管中,冬青皂苷B1对复钙凝血时间和凝血酶原时间的影响与在塑料试管中相似,但其在玻璃试管中的抗组织因子活性似乎更强。 [1]

冬青皂苷B1在未添加组织因子的情况下,对塑料管或玻璃管中全血、富血小板血浆或富血小板血浆的复钙凝血时间没有影响。[1]
体内研究 (In Vivo)
口服冬青皂苷B1(0.3至30 mg/kg,间隔12小时两次)可延长大鼠的出血时间。剂量低于0.5 mg/kg时,出血时间呈剂量依赖性延长;剂量介于0.5至30 mg/kg之间时,出血时间延长约两倍,但无明显的剂量依赖性。与阿司匹林相比,冬青皂苷B1在最低剂量下(可使出血时间延长两倍)的效力约为阿司匹林的十倍。[1]

冬青皂苷B1(0.3至10 mg/kg,口服)可呈剂量依赖性地延长全血复钙凝固时间。在30 mg/kg剂量下,冬青皂苷B1和阿司匹林均有缩短凝固时间的趋势。 [1]

口服冬青皂苷B1对血浆复钙凝血时间无影响。[1]
酶活实验
组织因子来源:大鼠肺微粒体组分。取1克大鼠肺组织研磨1分钟,与9毫升生理盐水混合,然后在聚四氟乙烯均质器中均质1分钟。混合物以2000转/分钟离心20分钟,弃去沉淀,上清液以105,000×g离心1小时。将微粒体沉淀重悬于10毫升生理盐水中,制成组织因子制剂。未稀释的制剂可在18秒内使正常大鼠血浆凝固;稀释100倍后,正常血浆凝固时间缩短约50%。[1]

为测定凝血酶原时间(组织因子活性),将0.1毫升组织因子溶液与0.1毫升25 mM CaCl₂混合,并加热至37℃。然后加入 0.1 mL 的富血小板血浆 (PPP) 或富血小板血浆 (PRP),并测定凝块形成所需时间。[1]

为测试抑制作用,将冬青皂苷 B1(3 mM 储备液,由 2.3 mg 溶于 0.03 mL DMSO 制备,然后用 50 mM Tris-HCl 缓冲液(pH 7.5)稀释至 0.97 mL)与组织因子(或生理盐水)混合,并用生理盐水稀释至总体积 0.1 mL。然后加入 0.1 mL 25 mM CaCl₂,加热至 37°C,再加入 0.1 mL 的 PPP 或 PRP,以测定复钙凝血时间(不含组织因子)或凝血酶原时间(含组织因子)。[1]
细胞实验
制备富血小板血浆 (PRP) 和贫血小板血浆 (PPP):从大鼠腹主动脉采集全血,置于含有 3.8% 柠檬酸钠(1:10 稀释)的塑料注射器中。将血液在 10°C 下以 200 × g 离心 30 分钟,得到 PRP。将剩余血液在 10°C 下以 2000 × g 离心 30 分钟,得到 PPP。[1]

PRP 和 PPP 的复钙凝血时间:将 0.1 mL PRP 或 PPP 与 0.1 mL 0.15 M 生理盐水混合,并加热至 37°C。然后加入 0.1 mL 25 mM CaCl₂,测定凝块形成时间。该测定方法用于在塑料和玻璃管中检测冬青皂苷 B1(不含组织因子)。 [1]

凝血酶原时间(含组织因子)的测定方法见酶活性测定部分,以富血小板血浆(PPP)或富血小板血浆(PRP)为血浆来源。[1]
动物实验
本研究使用雄性Sprague-Dawley大鼠(出血/凝血时间测定体重180-200 g;采血测定体重200-230 g)。动物可自由摄取食物和水。[1]

口服给药:将Ilexsaponin B1悬浮于1% CMC(羧甲基纤维素)溶液中,剂量分别为0.3、0.5、1、3、10和30 mg/kg。该化合物以12小时间隔口服给药两次(每次每公斤体重5 mL 1% CMC悬浮液)。对照组大鼠仅接受1% CMC溶液。[1]

出血时间测定:第二次给药两小时后,用腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉大鼠。在距尾尖 5 mm 处切断尾部,并将尾部远端 5 cm 垂直浸入 37.5°C 的 0.9% 生理盐水中。记录从切断尾部到出血停止的时间,即为出血时间。[1]

血液采集:出血时间测定 4 小时后,用乙醚麻醉大鼠,通过心脏穿刺采集血液至含有 3.13% 柠檬酸钠的塑料管中(每 0.9 体积血液加入 0.1 体积柠檬酸钠)。[1]

全血复钙凝血时间:在室温下,将 1 mL 血液与 0.2 mL 1.7% CaCl₂ 混合于玻璃管中,并测量凝血时间。[1]
参考文献

[1]. Anticoagulant activity of ilexoside D, a triterpenoid saponin fromIlex pubescens. Archives of Pharmacal Research.

其他信息
据报道,在毛叶冬青(Ilex pubescens)中发现了霍利苷D,相关数据可供参考。
冬青皂苷B1被报道为植物界首个组织因子抑制剂。[1]

文中提及三种已知的组织因子/因子VIIa复合物特异性蛋白抑制剂以供比较:脂蛋白相关凝血抑制剂(LACI)、载脂蛋白A-II和胎盘抗凝血蛋白(PAP)。[1]

该研究由韩国科学与工程基金会新药研发研究中心资助。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C41H66O13
分子量
766.9550
精确质量
766.45
CAS号
109008-27-7
PubChem CID
21626431
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
2.491
tPSA
215.83
氢键供体(HBD)数目
8
氢键受体(HBA)数目
13
可旋转键数目(RBC)
6
重原子数目
54
分子复杂度/Complexity
1470
定义原子立体中心数目
19
SMILES
C[C@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H](CO6)O)O)O[C@H]7[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O7)CO)O)O)O)C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O
InChi Key
WBDDWIKJZNNKBQ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C41H66O13/c1-20-10-15-41(35(48)49)17-16-38(5)21(32(41)40(20,7)50)8-9-25-37(4)13-12-26(36(2,3)24(37)11-14-39(25,38)6)53-34-31(27(44)22(43)19-51-34)54-33-30(47)29(46)28(45)23(18-42)52-33/h8,20,22-34,42-47,50H,9-19H2,1-7H3,(H,48,49)
化学名
10-[4,5-dihydroxy-3-[3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-1-hydroxy-1,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carboxylic acid
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~100 mg/mL (~130.39 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.3038 mL 6.5192 mL 13.0385 mL
5 mM 0.2608 mL 1.3038 mL 2.6077 mL
10 mM 0.1304 mL 0.6519 mL 1.3038 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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