Ilomastat (GM6001, Galardin)   中文名称: 伊洛马司他

Fibroblast collagenase (Ki = 0.4 nM); MMP-1 (IC50 = 1.5 nM); MMP-2 (IC50 = 1.1 nM); MMP-3 (IC50 = 1.9 nM); MMP-9 (IC50 = 0.5 nM ); Thermolysin (Ki = 20 nM); Eastase (Ki = 20 nM)

体外活性：Ilomastat（也称为 GM6001 或 Galardin）是异羟肟酸类可逆金属肽酶抑制剂的成员，它是一种有效的、合成的、广谱的基质金属蛋白酶 (MMP) 抑制剂，适用于 MMP-1、MMP-2 、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-12、MMP-14 和 MMP-26，Ki 值为 0.4 nM、0.5 nM、27 nM、3.7 nM、0.1 nM、0.2 nM 、 3.6 nM、13.4 nM、0.36 nM，分别。使用合成硫羟酸酯底物 Ac-Pro-Leu-Gly-SCH(i-Bu)CO-Leu-Gly-OEt（pH 6.5），Ilomastat 可抑制人皮肤成纤维细胞胶原酶，Ki 为 0.4 nM。局部应用伊洛司他可预防严重碱损伤后的角膜溃疡，含有伊洛司他、表皮生长因子、纤连蛋白和抑肽酶的组合可促进中度碱损伤后角膜上皮的稳定再生。当在 pH 6.5 下使用合成硫酯底物进行测定时，GM6001 可抑制人皮肤成纤维细胞胶原酶，Ki 为 0.4 nM，其选择性比两种细菌酶（嗜热菌蛋白酶和铜绿假单胞菌弹性蛋白酶）高 50 倍。 GM 6001 (0.1 nM - 10 nM) 抑制 T 细胞产生的明胶酶 A 和明胶酶 B，从而抑制 T 细胞归巢。激酶测定：胶原酶测定使用合成硫羟酸酯底物 Ac-Pro-Leu-Gly-SCH(i-Bu)CO-Leu-Gly-OEt，pH 6.5。胶原酶浓度为1-2nM，底物浓度为0.1至0.7nM。发现 Km 在 1.5 至 4 mM 之间变化。细胞测定：在MDA-MB-435细胞中，GM 6001分别处理6小时和12小时时使呼吸频率增加80%，[3H]胸苷掺入增加50%，这表明GM 6001增加DNA合成。 GM 6001 还可以增加 ERK 活性和 p38 激酶活性。

局部应用Ilomastat (GM6001, Galardin)(400 μg/ml) 可预防严重碱损伤后的角膜溃疡。在支架植入后的兔模型中，GM6001 显着抑制内膜增生和内膜胶原含量，并增加支架动脉的管腔面积，而不影响增殖率。

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角膜碱伤的愈合仍然是一个严峻的临床挑战。作者评价了一种新的合成基质金属蛋白酶抑制剂Ilomastat (GM6001, Galardin)或N-[2（R)-2-（羟氨基羰基甲基）-4-甲基戊烷基]- l -色氨酸甲基酰胺）对兔角膜碱损伤后溃疡的预防作用。用400微克/毫升或40微克/毫升依洛司他(GM6001, Galardin)单独局部治疗严重碱损伤的角膜，可防止溃疡28天，尽管10个角膜中有8个角膜穿孔。用4微克/毫升依洛司他(GM6001, Galardin)治疗的角膜出现间质深度溃疡。用400微克/毫升GM6001处理的角膜含有很少的炎症细胞，与用载体处理的角膜相比，血管向内生长明显减少。还研究了中度碱损伤后上皮细胞的再生。兔角膜在中度碱损伤后第4天出现持续性上皮缺损，并在中度碱损伤后第27天逐渐增加到原始6 mm直径创面的平均20%。相比之下，使用含有依洛司他(GM6001, Galardin)（400微克/毫升）、表皮生长因子（10微克/毫升）、纤维连接蛋白（500微克/毫升）和抑蛋白蛋白（400微克/毫升）的配方处理的角膜上皮再生完全并持续了21天。在中度碱损伤后21-28天，20%的联合用药组角膜出现零星点状染色。这些结果表明，局部应用依洛司他(GM6001, Galardin)可预防重度碱损伤后角膜溃疡，而含有GM6001、表皮生长因子、纤维连接蛋白和抑蛋白蛋白的联合应用可促进中度碱损伤后角膜上皮的稳定再生。[3]

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与ba治疗的动脉相比，支架动脉在10周时胶原蛋白含量显著增加（2倍）。一周后，支架动脉的明胶酶活性增加了2倍以上，有72 kD和92 kD的明胶酶活性。血管支架也增加了内膜DNA含量（1.5倍）和绝对细胞增殖（4倍）。与安慰剂相比，Ilomastat (GM6001, Galardin)显著抑制内膜增生和内膜胶原含量，增加支架动脉管腔面积，但不影响增殖率。 结论：与BA相比，支架置入可引起更强烈的ECM和MMP反应，其涉及血管壁的所有层。MMP的抑制作用阻断了支架内内膜增生，为预防支架内再狭窄提供了新的途径。[4]

对于胶原酶测定，使用 Ac-Pro-Leu-Gly-SCH(i-Bu)CO-Leu-Gly-OEt（一种合成硫羟酸酯底物），pH 6.5。存在一到两纳米的胶原酶和一到七微米的底物。 Km 的范围为 1.5 至 4 mM。

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羟基肟酸HONHCOCH2CH(i-Bu)CO-L-Trp-NHMe，异构体6A （Ilomastat (GM6001, Galardin)）在pH为6.5时，利用合成巯基酯底物ac - proleu - gly - sch (i-Bu)CO-Leu-Gly-OEt抑制人皮肤成纤维细胞胶原酶，Ki为0.4 nM。另一个同分异构体6B在CH2CH(i-Bu)CO -碳原子上具有相反的构型，对该酶具有200 nM的Ki。Ilomastat (GM6001, Galardin)是目前报道的最有效的人皮肤成纤维细胞胶原酶抑制剂之一。Ilomastat (GM6001, Galardin)对热溶酶和铜绿假单胞菌弹性酶的Ki值为20 nM。同分异构体6B对热溶酶的Ki值为7 nM，对弹性酶的Ki值为2 nM。6A和6B是对这些细菌酶最有效的羟酸盐抑制剂。这三种酶的抑制模式表明，异构体6A是（R，S）化合物，在立体化学上类似于L，L-二肽，异构体6B是（S，S）化合物，类似于dl -二肽。热溶酶和弹性酶对D构型的耐受性使得这些抑制剂仅仅通过CH2CH(i-Bu)CO α -碳原子的构型反转就能区分人类酶和细菌酶。潜在的金属配位基团羧酸酯和肼取代羟基甲酸酯，产生了对这三种酶的弱得多的抑制剂[1]。

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T细胞归巢到血管外部位需要穿透内皮下基底膜，这是一种特殊的非纤维结缔组织结构，可将内皮细胞锚定在实质表面。在此，我们发现正常的人T细胞表达明胶酶A和B，这两种基质金属蛋白酶对主要的基底层成分、胶原型IV和v有活性，在mRNA和蛋白水平上都有表达。明胶酶B是组成性表达，而明胶酶A和B的表达是由T细胞激活诱导的。静息T细胞的体外迁移是由明胶酶B介导的，因为它被Ilomastat (GM6001, Galardin)特异性阻断，Ilomastat是一种基质金属蛋白酶的羟肟酸抑制剂。通过干扰明胶酶功能抑制T细胞归巢可能是治疗T细胞介导的自身免疫性疾病的一种有用方法。[2]

暴露于triapine/三硫平72小时并同时接受20μM伊洛司他后，评估细胞的活力。 将triapine与20µM伊洛司他共同处理72小时后测定细胞活力。测定不同细胞的IC50 [5]
细胞存活活力、凋亡和细胞周期测定：使用CCK8分析细胞活力。采用Annexin V-PE凋亡检测试剂盒和APC BrdU Flow试剂盒检测细胞凋亡和细胞周期。流式细胞仪产生的数据使用FlowJo软件进行分析。[5]

Animal Model 1:[4]
Rabbit
Doses: 100 mg/kg/day
Route of administration: subcutaneous (SC) injection
Animal Model 2:[6]
Mice
Doses: 150 mg/kg/day
Formulation: Ilomastat suspension solution was prepared by dissolving in Tween-80, PEG4000, absolute ethanol and distilled water.
Route of administration: injected intraperitoneally (IP) once either with 150 mg/kg Ilomastat or vehicle control 2 h before γ-ray radiation.

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In a double-injury rabbit model, adjacent iliac arteries in 87 animals received BA (3.0 mm diameter) or stenting (3.0 mm NIR). Rabbits were treated for 1 week postprocedure with either GM6001 (100 mg/kg per day), an MMP inhibitor or placebo and sacrificed at 1 week or at 10 weeks' postprocedure. Arteries were analyzed for morphometry, collagen content, gelatinase activity, cell proliferation and DNA content.[4]

[1]. Biochemistry . 1992 Aug 11;31(31):7152-4.

[2]. J Immunol . 1995 May 1;154(9):4379-89.

[3]. Invest Ophthalmol Vis Sci . 1992 Nov;33(12):3325-31.

[4]. J Am Coll Cardiol . 2002 Jun 5;39(11):1852-8.

[5]. Cell Death Discov . 2022 Apr 8;8(1):180.
[6] Oncotarget. 2017 Jun 15;8(37):60789-60808.

Ilomastat is an N-acyl-amino acid obtained by formal condensation of the carboxy group of (2R)-2-[2-(hydroxyamino)-2-oxoethyl]-4-methylpentanoic acid with the amino group of N-methyl-L-tryptophanamide. A cell permeable broad-spectrum matrix metalloproteinase (MMP) inhibitor It has a role as an EC 3.4.24.24 (gelatinase A) inhibitor, a neuroprotective agent, an anti-inflammatory agent, an antibacterial agent and an antineoplastic agent. It is a L-tryptophan derivative, a hydroxamic acid and a N-acyl-amino acid.
Ilomastat is a broad-spectrum matrix metalloproteinase inhibitor.

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Oncogene-induced tumorigenesis results in the variation of epigenetic modifications, and in addition to promoting cell immortalization, cancer cells undergo more intense cellular stress than normal cells and depend on other support genes for survival. Chromosomal translocations of mixed-lineage leukemia (MLL) induce aggressive leukemias with an inferior prognosis. Unfortunately, most MLL-rearranged (MLL-r) leukemias are resistant to conventional chemotherapies. Here, we showed that hydroxyurea (HU) could kill MLL-r acute myeloid leukemia (AML) cells through the necroptosis process. HU target these cells by matrix metallopeptidase 2 (MMP2) deficiency rather than subordinate ribonucleotide reductase regulatory subunit M2 (RRM2) inhibition, where MLL directly regulates MMP2 expression and is decreased in most MLL-r AMLs. Moreover, iron chelation of HU is also indispensable for inducing cell stress, and MMP2 is the support factor to protect cells from death. Our preliminary study indicates that MMP2 might play a role in the nonsense-mediated mRNA decay pathway that prevents activation of unfolding protein response under innocuous endoplasmic reticulum stress. Hence, these results reveal a possible strategy of HU application in MLL-r AML treatment and shed new light upon HU repurposing.[5]

C20H28N4O4

388.46

388.211

C, 61.84; H, 7.27; N, 14.42; O, 16.47

142880-36-2

132519

Beige to brown solid powder

1.228±0.06 g/cm3

1.590

0.83

123.32

5

4

9

28

554

2

O=C([C@@]([H])(C([H])([H])C(N([H])O[H])=O)C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])N([H])[C@]([H])(C(N([H])C([H])([H])[H])=O)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12

NITYDPDXAAFEIT-DYVFJYSZSA-N

InChI=1S/C20H28N4O4/c1-12(2)8-13(10-18(25)24-28)19(26)23-17(20(27)21-3)9-14-11-22-16-7-5-4-6-15(14)16/h4-7,11-13,17,22,28H,8-10H2,1-3H3,(H,21,27)(H,23,26)(H,24,25)/t13-,17+/m1/s1

(2R)-N'-hydroxy-N-[(2S)-3-(1H-indol-3-yl)-1-(methylamino)-1-oxopropan-2-yl]-2-(2-methylpropyl)butanediamide

Ilomastat; galardin; GM-6001; Galardin; CS 610; (R)-N1-((S)-3-(1H-indol-3-yl)-1-(methylamino)-1-oxopropan-2-yl)-N4-hydroxy-2-isobutylsuccinamide; GM 6001; GM6001

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.44 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: [1] ~11mg/mL (28.3 mM) in 2% DMSO + 40% PEG 300 + 2% Tween 80 + ddH2O
[2] ~3.3 mg/ml (8.7 mM) in 5% DMSO + 95% coil oil
[3] ~27.5mg/ml (70.8 mM) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween 80: 50% ddH2O

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配方 6 中的溶解度: 10 mg/mL (25.74 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。