Indole-3-carbinol (I3C)   中文名称: 3-吲哚甲醇

NF-κB; AhR; Human Endogenous Metabolite
Indole-3-carbinol (I3C) targets aryl hydrocarbon receptor (AhR) [1]
Indole-3-carbinol (I3C) targets nuclear factor-κB (NF-κB) signaling pathway [2]
Indole-3-carbinol (I3C) targets p53 signaling pathway [2]

研究发现，吲哚-3-甲醇 (I3C) 对健康单核细胞具有低毒性，并以剂量和时间依赖性方式抑制 THP-1 细胞的增殖。当暴露于 indole-3-carbinol 时，AhR 靶基因 CYP1A1 和 IL1β 过度表达（p<0.05 至 p<0.001）。 Indole-3-carbinol 的抗增殖特性与其编程细胞死亡的能力有关。在 THP-1 细胞中，indole-3-carbinol 下调 BCL2，同时上调 FasR（p<0.05 至 p<0.001）。使用流式细胞术，还可以看到 G1 细胞周期停滞。 Indole-3-carbinol 处理导致 G1 作用细胞周期基因（P21、P27 和 P53）过表达（p<0.05 至 p<0.001）和 CDK2 下调（p<0.01 至 p<0.001）[1]。在 pre-B 急性淋巴细胞白血病细胞中，Indole-3-carbinol 抑制 NF-κB 活性，同时促进 p53 通路[2]。

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吲哚-3-甲醇（Indole-3-carbinol，I3C）（25-100 μM）剂量依赖性诱导THP-1单核细胞G1期细胞周期阻滞和凋亡。它激活AhR，上调AhR靶基因（CYP1A1、CYP1B1）的mRNA及蛋白表达，增加细胞周期抑制剂p21和p27的水平。100 μM剂量下，凋亡率达38.6%（对照组4.2%），伴随caspase-3/9剪切激活及Bax/Bcl-2比值升高 [1]
吲哚-3-甲醇（Indole-3-carbinol，I3C）（50-200 μM）抑制pre-B急性淋巴细胞白血病细胞（NALM-6、Reh）增殖，IC50值分别为85 μM（NALM-6）和92 μM（Reh）。它抑制NF-κB活性（减少p65核转位和IκBα磷酸化），激活p53通路（上调p53和p21），并诱导凋亡（膜联蛋白V阳性细胞增多及caspase-3激活） [2]

B细胞前体急性淋巴细胞白血病(BCP-ALL)是儿童中最常见的癌症类型。儿童ALL初级治疗的显著改善使总治愈率达到80%，为创新的联合治疗策略提供了机会，这些策略将提高治愈率，同时减少当前强化治疗方案的毒副作用。在这项研究中，我们报道了十字花科蔬菜中发现的天然植物化学物质吲哚-3-甲醇(I3C)在BCP-ALL NALM-6细胞中具有抗白血病特性。I3C通过G1细胞周期阻滞诱导细胞生长抑制，并以剂量和时间依赖性方式触发细胞凋亡。I3C治疗后p53、p21、Bax蛋白表达增加。Real-time PCR分析促凋亡p53靶基因，发现PUMA、NOXA、Apaf-1表达上调。I3C还能抑制构成核因子-κB (NF-κB)的激活，抑制NF-κB调控的抗凋亡(IAP1、Bcl-xL、Bcl-2、XIAP)和增殖(c-Myc)基因产物的蛋白表达。与单独使用任何一种药物相比，I3C与拓扑异构酶II抑制剂阿霉素联合使用可增强细胞毒性作用。联合用药诱导凋亡与增强caspase-9活化和PARP切割有关。此外，I3C还能消除阿霉素诱导的NF-κB活性，这可以通过降低核p65的积累、抑制i -κB α磷酸化及其降解、降低NF-κB dna结合活性来证明。Western blot分析显示，I3C可抑制阿霉素诱导的Bcl-2蛋白表达。总的来说，我们的研究结果表明，使用无毒药物，如I3C与蒽环类药物联合使用，可能为开发儿童BCP-ALL的新型联合疗法提供新的见解。[2]

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AhR激活测定：THP-1细胞用吲哚-3-甲醇（Indole-3-carbinol，I3C）（25-100 μM）处理24-48小时。提取总RNA，RT-PCR检测CYP1A1和CYP1B1的mRNA水平；分离核蛋白，Western blot检测AhR核转位。通过转染AhR响应性荧光素酶报告基因质粒到THP-1细胞，经I3C处理后检测荧光素酶活性，完成AhR依赖性报告基因实验 [1]
NF-κB活性测定：pre-B白血病细胞用吲哚-3-甲醇（Indole-3-carbinol，I3C）（50-200 μM）处理24小时。分离核质组分，Western blot检测p65定位；用磷酸化特异性抗体通过Western blot分析IκBα磷酸化水平。转染NF-κB响应性质粒到细胞，经I3C处理后检测荧光素酶活性，进行NF-κB荧光素酶报告基因实验 [2]

在 5% CO2 的完全湿润环境中，THP-1 细胞在含有 10% FBS、100 U/mL 青霉素、100 mg/mL 链霉素和 2 mM Glutamax 的 RPMI 1640 中培养。将细胞 (2-5×105 mL-1) 接种到六孔板中，然后将细胞重悬于完全生长培养基中。然后，将 10 ng/mL 佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯添加到 THP-1 单核细胞中作为肿瘤促进剂，导致稳定分化为粘附巨噬细胞样细胞并过度表达 AhR。随后，用不同浓度的吲哚-3-甲醇（1、10、100μM 和 1 mM）处理细胞。在含有不同浓度吲哚-3-甲醇的24孔板中，以5 104个细胞/孔的密度接种HP-1细胞和富集正常单核细胞。 24和48小时后，进行MTT测定。将一式三份的细胞在最终体积为 200 mL 的无酚红 RPMI 1640 中孵育 20 小时。每个孔中填充 20 mL 的 MTT 溶液 (5 mg/mL)，然后静置4小时。甲臜晶体生长。然后，将 300 mL DMSO 添加到每个孔中作为细胞裂解液。 570 nm 分光光度法用于测量细胞活力百分比[1]。

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THP-1细胞周期及凋亡实验：THP-1细胞接种于6孔板，用吲哚-3-甲醇（Indole-3-carbinol，I3C）（25-100 μM）处理48小时。PI染色结合流式细胞术分析细胞周期分布；膜联蛋白V-FITC/PI双染色结合流式细胞术检测凋亡。Western blot检测AhR、CYP1A1、CYP1B1、p21、p27、Bax、Bcl-2、剪切型caspase-3/9蛋白表达；RT-PCR检测mRNA水平 [1]
pre-B白血病细胞增殖及信号通路实验：NALM-6和Reh细胞接种于96孔板，用吲哚-3-甲醇（Indole-3-carbinol，I3C）（25-200 μM）处理72小时。MTT法检测细胞活力并计算IC50值；膜联蛋白V-FITC染色结合流式细胞术分析凋亡。Western blot检测p53、p21、NF-κB p65（核/胞质）、磷酸化IκBα及剪切型caspase-3表达 [2]

rat LDLo subcutaneous 500 mg/kg

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Indole-3-carbinol (I3C) (up to 100 μM) showed no obvious cytotoxicity to normal human peripheral blood mononuclear cells (viability > 85%) [1]
Indole-3-carbinol (I3C) (up to 200 μM) did not induce significant necrosis in pre-B leukemia cells (necrotic rate < 5%) [2]

[1]. Indole-3-carbinol induces G1 cell cycle arrest and apoptosis through aryl hydrocarbon receptor in THP-1 monocytic cell line.J Recept Signal Transduct Res. 2017 Oct;37(5):506-514.

[2]. Indole-3-carbinol suppresses NF-κB activity and stimulates the p53 pathway in pre-B acute lymphoblastic leukemia cells. Tumour Biol. 2015 May;36(5):3919-30.

[3]. Reactivation of PTEN tumor suppressor for cancer treatment through inhibition of a MYC-WWP1 inhibitory pathway. Science. 2019 May 17;364(6441). pii: eaau0159.

Indole-3-methanol is an indolyl alcohol carrying a hydroxymethyl group at position 3. It is a constituent of the cruciferous vegetables and had anticancer activity. It has a role as a plant metabolite and an antineoplastic agent.
Indole 3 Carbinol is under investigation in clinical trial NCT00033345 (Indole-3-Carbinol in Preventing Breast Cancer in Nonsmoking Women Who Are at High Risk For Breast Cancer).
Indole-3-carbinol has been reported in Pinus sylvestris, Dalbergia, and other organisms with data available.
Indole-3-Carbinol is a naturally occurring, orally available cleavage product of the glucosinolate glucobrassicanin, a natural compound present in a wide variety of plant food substances including members of the family Cruciferae with antioxidant and potential chemopreventive properties. Indole-3-carbinol scavenges free radicals and induces various hepatic cytochrome P450 monooxygenases. Specifically, this agent induces the hepatic monooxygenase cytochrome P4501A1 (CYP1A1), resulting in increased 2-hydroxylation of estrogens and increased production of the chemoprotective estrogen 2-hydroxyestrone.

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Indole-3-carbinol (I3C) is a natural compound derived from cruciferous vegetables (broccoli, cauliflower, Brussels sprouts) via hydrolysis of glucobrassicin [1][2]
Indole-3-carbinol (I3C) exerts anti-leukemic effects through dual mechanisms: inhibiting NF-κB-mediated cell survival and activating p53-dependent cell cycle arrest and apoptosis [2]
Indole-3-carbinol (I3C) induces monocytic cell apoptosis in an AhR-dependent manner, which is associated with upregulation of AhR-targeted cytochrome P450 enzymes and cell cycle inhibitors [1]

C9H9NO

147.18

147.068

C, 73.45; H, 6.16; N, 9.52; O, 10.87

700-06-1

3712

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

360.6±17.0 °C at 760 mmHg

96-99 °C(lit.)

171.9±20.9 °C

0.0±0.8 mmHg at 25°C

1.705

0.96

36.02

2

1

1

11

138

0

O([H])C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12

IVYPNXXAYMYVSP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C9H9NO/c11-6-7-5-10-9-4-2-1-3-8(7)9/h1-5,10-11H,6H2

1H-indol-3-ylmethanol

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (16.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (16.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (16.99 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。