| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
INH154 is particularly successful in treating breast cancers with increased expression of both Hec1 and Nek2. INH154 is the most effective tumor cell growth inhibitor. The IC50 values of INH154 in HeLa and MDA-MB-468 cancer cells were 0.20 and 0.12 μM, respectively. INH154 also suppresses the growth of leukemia, osteosarcoma, and glioblastoma cells [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
INH154 在治疗 Hec1 和 Nek2 表达增加的乳腺癌方面特别成功。 INH154是最有效的肿瘤细胞生长抑制剂。 INH154 在 HeLa 和 MDA-MB-468 癌细胞中的 IC50 值分别为 0.20 和 0.12 μM。 INH154 还抑制白血病、骨肉瘤和胶质母细胞瘤细胞的生长 [1]。
INH154 对多种癌细胞系表现出强大的生长抑制作用，在HeLa细胞中的IC₅₀为0.20 μM，在MDA-MB-468细胞中为0.12 μM，并且对白血病（K562）、骨肉瘤（U2OS）和胶质母细胞瘤（T98G）细胞也有效。相比之下，它对非致瘤性成纤维细胞（HS27）和乳腺上皮细胞（MCF10A）没有显著的生长抑制作用。[1] 克隆形成实验证实，INH154 以剂量依赖的方式有效抑制HeLa和MDA-MB-468癌细胞的生长。[1] 用 INH154 处理可诱导癌细胞发生有丝分裂灾难，其特征是染色体错排和多极纺锤体构型的增加，且呈时间依赖性。[1] 使用Annexin-V/碘化丙啶染色的流式细胞术分析显示，与DMSO处理的对照组相比，INH154 处理（1 μM，48小时）显著增加了凋亡和坏死细胞的百分比（14.7%凋亡，坏死的具体百分比未单独量化）。[1] 生物素标记的 INH154 在亲和下拉实验中特异性下拉野生型Hec1蛋白，但不能下拉Hec1突变体（W395A或WLK/AAA）或其他蛋白如Nek2和Nuf2，证实了其与Hec1的特异性结合。[1] 稳定表达Hec1突变体（W395A或WLK/AAA，这些突变体缺乏与 INH154 结合的能力）的细胞，对 INH154 的IC₅₀值显著升高，表明获得了耐药性。[1] 用 INH154（1 μM）处理可触发Nek2蛋白发生时间依赖性、蛋白酶体介导的降解（18小时后减少超过95%），且不影响Nek2 mRNA水平。与蛋白酶体抑制剂MG132共处理可阻止Nek2降解。[1] INH154 处理消除了Hec1丝氨酸165位点（pS165）的磷酸化，该修饰依赖于Nek2激酶活性，这通过Western印迹和动粒处的免疫荧光染色得以证明。[1] INH154 诱导的Nek2降解需要Hec1和Nek2之间的物理相互作用。表达不能结合Nek2的Hec1突变体（Δ3，缺失氨基酸408-422）或不能结合Hec1的Nek2突变体（R361L）的细胞，对 INH154 诱导的Nek2降解具有抗性。[1] 提出的作用机制是：INH154 与Hec1结合后形成一种“死亡陷阱”构象，当Nek2结合上来时，会触发Nek2的构象改变，从而导致其被蛋白酶体降解。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
与对照动物相比，接受 INH154 治疗的小鼠肿瘤生长明显减慢，呈剂量依赖性。通过 BrdU 染色评估的肿瘤增殖指数显示，与单独使用载体相比，INH154 治疗下残留肿瘤显着减少，这与肿瘤生长结果一致。与用媒介物治疗的肿瘤相比，INH154治疗的肿瘤表现出Nek2和Hec1 S165磷酸化的表达水平显着降低。然而，在 6.5 周的治疗期间评估小鼠体重时，治疗组和对照组之间几乎没有任何变化。此外，当使用高剂量 INH154 (20 mg/kg) 治疗正常 BALB/c ByJNarl 小鼠的 INH 毒性时，这些动物组的体重、血液化学或全血细胞计数 (CBC) 没有明显变化分析[1]。
在使用MDA-MB-468三阴性乳腺癌细胞（高表达Hec1和Nek2）的异种移植小鼠模型中，腹腔注射 INH154（5 mg/kg 或 20 mg/kg，每周三次，持续6.5周）与载体对照组相比，能剂量依赖性地显著抑制肿瘤生长。[1] 对来自 INH154 处理小鼠的残留肿瘤进行免疫组织化学分析显示，与载体处理的肿瘤相比，其增殖指数（BrdU染色）明显降低，Nek2蛋白水平大幅下降，并且Hec1 S165位点的磷酸化减弱。[1] |
| 细胞实验 |
对于细胞活力/抗增殖实验（XTT法），细胞在治疗前一天接种于96孔板中。然后用不同浓度的 INH154 处理细胞4天。测量细胞活力，并根据剂量反应曲线确定IC₅₀值。[1]
对于克隆形成实验，用不同剂量的 INH154 处理HeLa或MDA-MB-468细胞。经过一段允许克隆形成的孵育期后，对克隆进行染色和计数，以评估其对长期细胞增殖的抑制作用。[1] 为了分析有丝分裂缺陷，用 INH154 处理细胞后进行固定和染色。使用DNA染料（Hoechst 33342）评估染色体排列。通过免疫荧光染色γ-微管蛋白（中心体）、α-微管蛋白（微管）和DAPI（染色体）来评估纺锤体极性。量化具有错排染色体或多极纺锤体的细胞百分比。[1] 通过流式细胞术评估细胞凋亡。按照标准方案，用Annexin V和碘化丙啶（PI）对经 INH154 处理的细胞进行染色。确定早期凋亡细胞（Annexin V阳性，PI阴性）和晚期凋亡/坏死细胞（Annexin V阳性，PI阳性）的百分比。[1] 为了研究蛋白质降解和磷酸化，用 INH154 处理细胞指定的时间。对于蛋白酶体抑制实验，将细胞与 INH154 和MG132共处理。然后裂解细胞，并使用针对Nek2、磷酸化S165 Hec1、总Hec1和加载对照的特异性抗体，通过Western印迹分析蛋白水平。[1] 对于结合特异性研究（生物素下拉实验），在裂解缓冲液中制备表达GFP标记的Hec1或其突变体的细胞提取物。将澄清的裂解物与偶联了生物素-INH154 的中性亲和素树脂一起孵育。经过充分洗涤后，洗脱结合的蛋白质，并用抗GFP抗体进行Western印迹分析。[1] 为了通过免疫共沉淀研究蛋白质-蛋白质相互作用，裂解共表达标签蛋白（例如，GFP-Hec1和Myc-Nek2）的细胞。将裂解物与针对标签的抗体（例如，抗GFP）孵育，然后加入Protein G Sepharose。洗涤免疫沉淀物，洗脱，并用相关抗体进行Western印迹分析。[1] |
| 动物实验 |
将MDA-MB-468乳腺癌细胞（2 × 10⁶个细胞）注射到6～8周龄雌性裸鼠的乳腺脂肪垫中，建立无胸腺裸鼠异种移植瘤模型。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为治疗组（每组n=6～7只）。[1]
INH154配制成溶剂，溶剂成分为5% DMSO、7.5%乙醇、7.5% Cremophor EL、20% PEG400和60%生理盐水。[1] 小鼠分别接受腹腔注射（ip）溶剂、5 mg/kg INH154或20 mg/kg INH154。每周注射三次。 [1] 治疗持续6.5周。每周两次测量小鼠体重和肿瘤尺寸（长度和宽度）。肿瘤体积采用公式（长度×宽度²）/2计算。[1] 末次注射后一周，处死小鼠。取出肿瘤组织，固定，并进行免疫组织化学分析，检测BrdU掺入（增殖）、Nek2表达和磷酸化S165 Hec1水平。[1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在为期 6.5 周的异种移植疗效研究中，接受 5 mg/kg 或 20 mg/kg INH154 治疗的小鼠与载体对照组相比，体重差异甚微，表明在这些有效剂量下未观察到明显的全身毒性。[1]
在另一项毒性评估中，正常 BALB/c ByJNarl 小鼠接受了高剂量 INH154 (20 mg/kg) 治疗。与对照组相比，小鼠的体重、血液生化指标或全血细胞计数 (CBC) 分析均未观察到显著差异，表明毒性极低或无毒性。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
INH154是第三代INH（Nek2和Hec1结合抑制剂）小分子衍生物，其结构在INH1和INH41的基础上进行了优化，以提高效力。[1]
对乳腺癌患者基因表达数据库的分析表明，Hec1和Nek2的共表达高度相关，且与最差的远处转移无进展生存期（DMFS）和无复发生存期（RFS）相关。这为靶向具有此特征的癌症中的Hec1/Nek2相互作用提供了理论依据。[1] 其作用机制涉及一种新型的“死亡陷阱”模型：INH154与Hec1结合，药物结合的Hec1界面随后将Nek2诱入复合物。随后的结合诱导Nek2发生构象变化，使其被蛋白酶体介导降解，同时阻断其对Hec1 S165的激酶活性。 [1] 与第一代化合物INH1相比，INH154抑制癌细胞生长的效力大约高出100倍。[1] |
| 分子式 |
C22H24N4OS
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|---|---|
| 分子量 |
392.517163276672
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| 精确质量 |
392.167
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| CAS号 |
1587705-63-2
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| PubChem CID |
91669222
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| LogP |
4.4
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| tPSA |
86.4
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
28
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| 分子复杂度/Complexity |
509
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
S1C(NC(C2C=CN=CC=2)=O)=NC(=C1)C1C(C)=CC(=CC=1C)N1CCCCC1
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| InChi Key |
BBVORAZSFSZSKG-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C22H24N4OS/c1-15-12-18(26-10-4-3-5-11-26)13-16(2)20(15)19-14-28-22(24-19)25-21(27)17-6-8-23-9-7-17/h6-9,12-14H,3-5,10-11H2,1-2H3,(H,24,25,27)
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| 化学名 |
N-[4-(2,6-dimethyl-4-piperidin-1-ylphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]pyridine-4-carboxamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~83.33 mg/mL (~212.29 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 6.25 mg/mL (15.92 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 62.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.37 mM) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.37 mM) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.30 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，您可以将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.5476 mL | 12.7382 mL | 25.4764 mL | |
| 5 mM | 0.5095 mL | 2.5476 mL | 5.0953 mL | |
| 10 mM | 0.2548 mL | 1.2738 mL | 2.5476 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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