Intepirdine (SB-742457; GSK-742457; RVT-101)   中文名称: 英特匹定

5-HT₆ Receptor ( pKi = 9.63 )

体外活性：SB-742457 是一种选择性 5-HT6 受体拮抗剂，具有认知、记忆和学习增强作用。 SB-742457 是一种治疗阿尔茨海默病的新型认知增强剂。 SB-742457 是一种潜在药物，可稳定轻度至中度阿尔茨海默病受试者的多奈哌齐治疗。

SB-742457 是一种有效的选择性 5-HT6 受体拮抗剂，可逆转新物体识别测试中东莨菪碱诱导的学习缺陷，并提高老年大鼠在水迷宫任务中的表现。

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本研究旨在研究所选APD（氟哌啶醇、利培酮、奥氮平）单独或与选择性5-HT6激动剂（WAY-181187）或拮抗剂（Intepirdine (SB742457)）联合给药对大鼠体重增加、食物摄入、血脂谱、葡萄糖水平以及脂肪（瘦素、脂联素）和胃肠道（胰岛素、胃饥饿素）组织衍生激素谱的慢性影响。SB-742457比WAY-181187更能抑制APD引起的体重增加和缓解高血糖，但也会加剧血脂异常。WAY-181187倾向于改善脂质状况，但增加了葡萄糖水平。当WAY-181187或英特哌定（SB742457）与氟哌啶醇联合给药时，获得了最大的益处。很难评估血清胰岛素、瘦素、胃饥饿素和脂联素水平的改变是否取决于所应用的治疗或其他药物非依赖性因素；因此，需要进一步的研究。[2]

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本研究旨在调查和比较急性和慢性（21天）给予5-羟色胺6受体（5-HT6R）激动剂（WAY-181187）和拮抗剂（Intepirdine（SB742457））对MK-801诱导的新物体识别（NORT）和Y迷宫连续自发交替试验（Y-CAT）记忆障碍的影响。此外，在给药21天后测量大鼠海马中脑源性神经营养因子（BDNF）的表达，以研究BDNF参与5-HT6R配体的促认知作用。我们发现，WAY-181187和SB-742457的急性给药逆转了MK-801在NORT和Y-CAT中的作用，并且这种影响在NORT中长期应用后仍然存在，但在Y-CAT中没有。两种5-HT6R配体都增加了海马BDNF蛋白的表达，但WAY-181187比SB-742457更有效，更好地缓解了MK-801诱导的BDNF信号通路的抑制，这似乎在行为测试中转化为更强的WAY-181187-效应。总的来说，急性和慢性给药的5-HT6R激动剂和拮抗剂都可以预防MK-801诱导的大鼠记忆障碍和BDNF信号的改变。目前的结果证实了这两种5-HT6R配体的促认知特性，并表明BDNF通路可能参与了它们的作用机制[3]。

第2组（n=6）用于11C-GSK215083区域结合的药理学表征。除了对5HT6受体的亲和力外，PET配体11C-GSK215083对5HT2A受体的亲和力也低约5倍（3）。因此，我们使用选择性5HT2A拮抗剂酮色林来检测是否存在与5HT2A受体的可检测结合，并使用SIntepirdine（SB742457）来检测与5HT6受体的结合。四名受试者分别在SB742457（口服175 mg，11C-GSK215083给药前5小时）和酮色林（缓慢静脉注射0.1 mg/kg，11C-GSK215083给药前2小时）后，以随机方式进行了基线11C-GSK251083扫描，然后进行了2次PET扫描，间隔7天。其余2名受试者接受了基线扫描、SB742457（175 mg）后的第二次扫描和7天后的第三次扫描（图1B）。
第3组（n=8）描述了英特哌定（SB742457）在大脑中的时间和剂量占用关系。每位受试者接受了3次PET扫描。扫描1是基线扫描，扫描2和3是在给药7至28天期间，每天重复一次SB742457给药2次后进行的。4名受试者在第1天接受了SB742457（175 mg）的负荷剂量，随后每天服用35 mg，持续21或28天（每组2名受试人）。受试者被随机分配在第7、14、21和28天接受2次扫描，每个时间点收集2个独立的数据点（图1C）。同样，另外2名受试者接受了SB742457（70 mg）治疗，随后每天服用15 mg，持续14天，最后2名受试验者接受了15 mg治疗，随后每日服用3 mg，连续14天。所有4名受试人都在第7天和第14天接受了扫描（图1D）。SB742457给药后约5小时进行扫描。
安全性评估包括病史、体检、不良事件报告、临床实验室评估和心电图、血压和脉搏率测量（补充信息）。在每次扫描之前和完成时，从第2组和第3组的受试者身上采集血液样本，用于血浆中SB742457的药代动力学分析，并给予英特哌定（SB742457）（补充信息）。https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26383152/

蛋白质印迹分析[3]
使用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的T-PER哺乳动物蛋白提取试剂对海马样本进行均质化。使用Bradford反应测定蛋白质浓度。将等分试样（40μg）溶解在含有2%2-巯基乙醇的Laemmli缓冲液中，并进行10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。使用1:500稀释的抗脑源性神经营养因子（BDNF，15-kDa）和1:1000稀释的抗β-肌动蛋白。第二抗体为1:2000稀释的抗兔IgG（HRP）。

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定量实时PCR[3]
使用RNA分离试剂盒从组织中提取RNA。在数量和质量评估后，RNA浓度标准化为15 ng/µL。使用高容量逆转录试剂盒进行逆转录。根据制造商在Applied Biosystems®7500快速实时PCR仪上的方案，使用TaqMan BDNF引物和探针（Rn02531967_s1）进行qPCR 96孔反应板。在初步实验的基础上，选择了内源性控制基因Gapdh（Rn01775763_g1）和Tbp（Rn01455646_m1）。使用ΔΔCq方法计算相对表达式。

本研究共使用了140只大鼠，每个治疗组随机选取10只动物。由于动物数量众多且实验室空间有限，实验分三轮进行：第一轮包括4个治疗组：赋形剂（1% Tween 80）、氟哌啶醇、利培酮和奥氮平；第二轮包括5个治疗组：赋形剂（1% Tween 80）、WAY-181187、氟哌啶醇+WAY-181187、利培酮+WAY-181187和奥氮平+WAY-181187；第三组包含5个治疗组：赋形剂（1% Tween 80）、Intepirdine (SB742457)、氟哌啶醇+SB-742457、利培酮+SB-742457和奥氮平+SB-742457。给药期间有一只动物死亡；因此，最终只有一个实验组（即利培酮+WAY-181187治疗组）仅包含9只动物。末次给药24小时后，由训练有素的人员通过颈椎脱臼处死大鼠。[2]实验中使用的药物包括氟哌啶醇、利培酮、奥氮平、WAY-181187（草酸盐）和Intepirdine (SB742457)。根据文献回顾和我们之前的研究（这些研究已证实了抗精神病药物（APDs）（氟哌啶醇0.5 mg/kg、利培酮0.5 mg/kg和奥氮平5 mg/kg）以及5-HT6受体配体（WAY-181187 3 mg/kg和SB-742457 3 mg/kg）的单独和联合行为效应，我们选择了这些药物用于实验。在给药前，将这些化合物悬浮于1%的吐温80溶液（Sigma Aldrich，美国密苏里州圣路易斯）中，并以2 mL/kg的体积进行腹腔注射（ip）。每天上午10:00至11:00之间给大鼠注射一次，持续28天。最后一次注射在处死前24小时进行。对照组大鼠接受1% Tween 80溶液，给药方案与实验组相同。[2]

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使用的药物包括：WAY-181187（草酸盐）、Intepirdine (SB742457)和(+)-MK-801（马来酸氢盐）。除溶于蒸馏水的MK-801外，所有化合物均在给药前立即悬浮于1% Tween 80溶液中，并以2 ml/kg的剂量腹腔注射。在急性实验中，5-HT6R配体在测试前60分钟注射；而在慢性实验中，连续21天每天注射一次，最后一次注射在测试前24小时。MK-801仅注射一次，在测试前30分钟注射。对照组大鼠按照相同的给药方案接受溶剂。药物剂量指的是其盐形式的剂量。[3]

[1]. 5-HT6 receptor antagonists as novel cognitive enhancing agents for Alzheimer's disease. Neurotherapeutics. 2008 Jul;5(3):458-69.

[2]. Selective 5-HT6 Receptor Ligands (Agonist and Antagonist) Show Different Effects on Antipsychotic Drug-Induced Metabolic Dysfunctions in Rats. Pharmaceuticals (Basel). 2023 Jan 20;16(2):154.

[3]. 5-HT6 receptor agonist and antagonist improve memory impairments and hippocampal BDNF signaling alterations induced by MK-801. Brain Res. 2019 Nov 1:1722:146375.

英替吡啶已用于阿尔茨海默病治疗的临床试验。英替吡啶是一种小分子药物，目前已完成最多III期临床试验（涵盖所有适应症），并有2个在研适应症。

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总之，所得结果明确表明，添加选择性5-HT6受体激动剂或拮抗剂是否能为APD后代谢紊乱带来更多益处。当5-HT6受体配体与氟哌啶醇联合用药时，获益最大。与利培酮（Ki = 420 nM）和奥氮平（Ki = 2.5 nM）不同，氟哌啶醇对5-HT6受体没有亲和力（Ki > 5000 nM）。 WAY-181187 可使氟哌啶醇引起的血清中调节食欲和代谢活动的肽类水平变化恢复正常，并在一定程度上减少体重增加和食物摄入量；而Intepirdine (SB742457) 则显著降低体重增加和食物摄入量，且不太可能改变激素水平。总体而言，SB-742457 更能抑制体重增加并缓解抗精神病药物引起的高血糖，但需要注意的是，它也会加重血脂异常。另一方面，WAY-181187 倾向于改善血脂谱，但会升高血糖水平。此外，也很难评估血清中胰岛素、瘦素、胃饥饿素和脂联素水平的变化是取决于所采用的治疗方法，还是取决于其他与药物无关的因素（例如：体重增加、日常活动量、脂肪组织含量）。因此，需要进一步研究。[2]MK-801 是一种非竞争性 NMDA 受体拮抗剂（Wong 等，1986），可诱发类似于痴呆症（Ellison，1995）和精神分裂症（Bubeníková-Valešová 等，2008）相关的认知障碍。MK-801 诱发的记忆缺陷模型被广泛用于临床前认知研究（van der Staay 等，2011）。目前已有大量对 MK-801 敏感的动物实验，包括 NORT 和 Y-CAT 实验，这些实验反映了啮齿动物的自然探索行为（Dix 和 Aggleton，1999；Lalonde，2002）。在本研究中，大鼠急性注射MK-801后，在NORT和Y-CAT行为学测试中表现出记忆障碍，这两种测试分别反映情景记忆和空间工作记忆过程。随后，我们研究了选择性5-HT6R激动剂WAY-181187和拮抗剂SB-745427急性及长期（21天）腹腔注射对MK-801诱导的这些认知障碍的影响。在急性实验中，5-HT6R激动剂（3 mg/kg）和拮抗剂（1和3 mg/kg）均能预防MK-801在NORT测试中引起的认知障碍。 WAY-181187 的记忆增强效果明显强于 Intepirdine (SB742457)，但均值差异未达到统计学意义 (F(1, 13) = 1,9383, ns)。两种 5-HT6R 配体单次给药后均能增强空间记忆任务 (Y-CAT) 的表现，显著提高大鼠的交替记忆能力；WAY-181187 在 1 和 3 mg/kg 剂量下均有显著效果，而 SB-742457 仅在 3 mg/kg 剂量下有显著效果。考虑到两种化合物在相同剂量下单次给药的疗效，在不同的记忆功能模型中可以观察到一些细微的差异。WAY-181187 在 NORT 任务中，高剂量时的效果强于 SB-742457，但在 1 mg/kg 剂量下则无活性。此外，WAY-181187 的 DI 值明显高于对照组，而 SB-742457 的 DI 值则无统计学差异（单因素方差分析后进行 Bonferroni 事后检验，结果显示 p = 0.08，与载体对照组相比）。这一结果提示，WAY-181187 的促记忆作用机制可能涉及其他因素，但目前的研究阶段尚难以解释这一现象。在 Y-CAT 模型中，情况则相反；两种剂量的 WAY-181187 和较高剂量的 SB-742457 的促认知作用效果相似，而较低剂量的 SB-742457 则无活性。在两项测试中，活性剂量的WAY-181187和SB-742457均未改变大鼠的探索行为，因此可以认为观察到的效应具有特异性。
长期使用两种选择性5-HT6R配体后，MK-801干扰的认知过程显著改善，其中WAY-181187在NORT模型中的作用略强。但WAY-181187和SB-742457在Y-CAT模型中的有益作用不再观察到。在现阶段的研究中，难以解释长期使用这两种5-HT6R配体后Y-CAT模型活性丧失的原因，尽管它们在NORT模型中的有益作用仍然存在。文献中已多次报道5-HT6R配体对记忆功能的有益作用。在认知障碍动物模型中研究的5-HT6R拮抗剂获得了更为一致的结果。 5-HT6R拮抗剂已被证明在情景记忆（NORT任务）、空间工作记忆（迷宫或自发交替任务）、社会认知和执行功能（转换学习或逆转学习任务）范式中有效，并能预防东莨菪碱、苯环利定（PCP）、MK-801、氯胺酮、链脲佐菌素以及年龄相关记忆障碍引起的记忆损伤（综述见Bokare等人(2018)、de Bruin和Kruse(2015)、de Jong和Mørk(2017)、Fone(2008)以及Upton等人(2008)）。然而，关于SB-742457在动物认知模型中的活性报道却很少。de Bruin等人。 (2011)年的研究表明，腹腔注射3和10 mg/kg剂量的Intepirdine (SB742457)可改善东莨菪碱引起的物体识别障碍；口服10 mg/kg剂量的Intepirdine (SB742457)可减轻东莨菪碱引起的物体定位任务障碍。同一研究团队还报道，亚慢性（连续5天）给予SB-742457 (0.63 mg/kg)可减轻大鼠在双杆操作箱任务中PCP引起的逆转学习障碍（de Bruin等，2013）；然而，Idris等人进行的类似实验表明，皮下注射2.5和5 mg/kg剂量的SB-742457可产生活性（Idris等，2010）。 Callaghan 等人的研究表明，连续 7 天口服 3 mg/kg 的该化合物可逆转中年（13 个月）大鼠在延迟非匹配样本任务中出现的与年龄相关的认知缺陷（Callaghan 等人，2012）。因此，本研究中关于 SB-742457 活性的研究结果与现有的临床前数据相符，进一步丰富了人们对该化合物在大鼠（尤其是情景记忆模型）中促记忆潜力的认识。[3]

C19H19N3O2S

353.44

353.119

C, 64.57; H, 5.42; N, 11.89; O, 9.05; S, 9.07

607742-69-8

11256720

Light yellow to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

608.3±45.0 °C at 760 mmHg

321.7±28.7 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.649

2.1

70.68

1

5

3

25

535

0

S(C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])(C1=C([H])N=C2C(C([H])=C([H])C([H])=C2N2C([H])([H])C([H])([H])N([H])C([H])([H])C2([H])[H])=C1[H])(=O)=O

JJZFWROHYSMCMU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H19N3O2S/c23-25(24,16-6-2-1-3-7-16)17-13-15-5-4-8-18(19(15)21-14-17)22-11-9-20-10-12-22/h1-8,13-14,20H,9-12H2

3-(benzenesulfonyl)-8-piperazin-1-ylquinoline

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 2% DMSO , 48% PEG300, 2% Tween 80 and 48% water: 5mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。