SEC   中文名称: （S）-1-（3-（4-氯苯氧基）-2-羟丙基）-3-（4-甲氧基苯基）-1H-吡唑-5-羧酸乙酯

ANXA7 GTPase; AMPK/mTORC1/STAT3

SEC (20 µM) 可防止 PC3 前列腺癌细胞和 HEK 293T RKIP−/− 细胞迁移 [1]。 ANXA7 GTPase 特异性抑制剂 ABO 可逆转 SEC (20 µM) 引起的 PC3 细胞中 AMPK 磷酸化的显着增加，表明磷酸化水平增加的激活的 ANXA7 可促进 AMPK 磷酸化（细胞选择性）[1]。
SEC通过促进ITGB4核易位特异性诱导ITGB4高表达的肿瘤细胞凋亡。［2］

在 PC-3M-Luc 原位植入裸鼠模型中，SEC（3 mg/kg/天或 18 mg/kg/天）可预防转移 [1]。 SEC抑制PC-3M-Luc原位植入裸鼠模型的转移[1]
接下来，我们通过监测小鼠原位前列腺癌转移来评估SEC的体内疗效。原位接种PC-3M-Luc的小鼠分别注射SEC (3 mg/kg/d或18 mg/kg/d) 3周。重要的是，SEC降低了以光子计数表达的生物发光信号（图7，A和B）。淋巴结是前列腺癌的常见转移部位。然后分离主动脉淋巴结，进行体外生物发光成像。PC-3M-Luc细胞能够扩散到远处的器官，这表明存在淋巴结转移。值得注意的是，SEC降低了转移淋巴结的生物发光信号，减少了前列腺癌转移的主动脉淋巴结的数量（图7，C至E）。同时，SEC治疗不影响小鼠的体重（图7F）。一致地，SEC注射确实降低了移植肿瘤中CCL2、APLN和IL6ST的mRNA水平（图8）。这些体内观察表明，SEC抑制了裸鼠模型中PC-3M-Luc细胞的淋巴结转移能力[1]。

---

SEC抑制人肿瘤异种移植物在禽胚模型中的生长[2]
接下来，我们在体内确定SEC是否具有促进细胞凋亡的作用。鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane， CAM）由于其免疫缺陷的环境和致密的毛细血管网络，被广泛用于肿瘤植入，以评估抗癌药物的疗效和促血管生成或抗血管生成因子的作用。因此，我们采用CAM模型来研究SEC在肿瘤生长和正常血管生成中的作用。A549细胞沉积在CAM上，2天内形成实体瘤。从第2天到第8天，用PBS或每2天含SEC的PBS局部治疗实体腺癌。与单独使用PBS相比，PBS加SEC治疗可显著抑制肿瘤生长（图6A）。5FU处理有利于减小异种移植物的大小（补充图6）。肿瘤冷冻切片的TUNEL检测显示，SEC在体内有效促进了细胞凋亡，并且在肿瘤周围边缘检测到更强的信号（图6B）。为了确定SEC是否干扰正常血管生成并抑制肿瘤生长，我们直接测量了SEC对CAM的血管生成作用。SEC对CAM正常血管生成无影响（图6C）。与体内血管生成研究完全一致，在体外Matrigel实验中，SEC没有干扰血清和FGF-2的毛细血管样管结构的形成（图6D）。因此，SEC在体内通过诱导细胞凋亡有效抑制肿瘤生长，对正常CAM血管生成无不良影响。

体外ANXA7活性测定[2]
将人宽型ANXA7、ANXA7-mt1 （T275A）和-mt2 （T286A）突变体的编码区亚克隆到带6*His标签的mCherry-N1表达载体中。当HEK293在10 cm培养皿上的密度达到70% ~ 80%合流时，用指定的表达载体转染细胞。横切24 h后，收获总蛋白，用His gravrap Ni-NTA蛋白纯化试剂盒提取表达的重组蛋白ANXA7并进行柱层析纯化。纯化的ANXA7在37°C下加或不加SEC孵育，孵育指定的浓度和时间。使用atp酶/GTPase活性测定试剂盒测定ANXA7的GTPase活性。

细胞活力测定[1]
细胞类型： HEK293T RKIP−/− 细胞。 [1]
测试浓度： 20 µM。
孵化持续时间：24 小时。
实验结果：抑制HEK293T RKIP−/−细胞的迁移，但对HEK293T RKIP+/+细胞无影响。

Animal/Disease Models: Luciferase-labeled PC-3M-Luc cells (2 × 106 cells per 50 µL sterile HBSS−/−) were in situ inoculated into the prostate of 8weeks old nude mice [1].
Doses: 3 mg/kg/day or 18 mg/kg/day.
Doses: Daily IP for 3 weeks.
Experimental Results: Inhibited the lymph node metastasis ability of PC-3M-Luc cells in nude mouse model. Decreases the mRNA levels of CCL2, APLN and IL6ST in implanted tumors. Does not affect mouse body weight.

[1]. SEC-induced Activation of ANXA7 GTPase Suppresses Prostate Cancer Metastasis. Cancer Lett. 2018 Mar 1;416:11-23.

[2]. A small molecule induces integrin β4 nuclear translocation and apoptosis selectively in cancer cells with high expression of integrin β4. Oncotarget. 2016 Mar 29; 7(13): 16282–16296.

Annexin A7 (ANXA7) is a suppressor of tumorigenesis and metastasis in prostate cancer. Activated ANXA7 GTPase promotes prostate cancer cell apoptosis. However, the role and underlying mechanism of ANXA7 GTPase in prostate cancer metastasis have not been established. RKIP is a metastatic suppressor and downregulated in prostate cancer metastases. The binding of RKIP and its target proteins could inhibit the activation of its interactive partners. However, the effect of RKIP on ANXA7 GTPase activation is not clear. Here, we report that activation of ANXA7 GTPase by a small molecule SEC ((S)-ethyl 1-(3-(4-chlorophenoxy)-2-hydroxypropyl)-3- (4-methoxyphenyl)-1H-pyrazole-5-carboxylate) effectively inhibited prostate cancer metastasis. Mechanistically, activated ANXA7 promoted AMPK phosphorylation, leading to decreased mTORC1 activity, suppressed STAT3 nuclear translocation, and downregulation of pro-metastatic genes, including CCL2, APLN, and IL6ST. Conversely, RKIP interacted with ANXA7 and impaired activation of ANXA7 GTPase by SEC and its downstream signaling pathway. Notably, SEC treatment suppressed metastasis of prostate cancer cells in in vivo orthotopic analysis. Together, our findings provide a novel insight into how metastasis of prostate cancer with low RKIP expression is suppressed by SEC-induced activation of ANXA7 GTPase via the AMPK/mTORC1/STAT3 signaling pathway.[1]

---

Increased integrin β4 (ITGB4) level is accompanied by malignant progression of multiple carcinomas. However, selective therapeutic strategies against cancer cells expressing a high level of ITGB4 have not been reported. Here, for the first time, we report that a chiral small molecule, SEC, selectively promotes apoptosis in cancer cells expressing a high level of ITGB4 by inducing ITGB4 nuclear translocation. Nuclear ITGB4 can bind to the ATF3 promoter region and activate the expression of ATF3, then upregulate the downstream pro-apoptosis genes. Furthermore, SEC promoted the binding of annexin A7 (ANXA7) to ITGB4 and increased ANXA7 GTPase activity. Activated ANXA7 promoted ITGB4 nuclear translocation by triggering ITGB4 phosphorylation at Y1494. SEC also inhibited the growth of xenograft tumors in the avian embryo model. We identified a small molecule, SEC, with selective pro-apoptosis effects on cancer cells with high expression of ITGB4, both in vitro and in vivo, by triggering the binding of ITGB4 and ANXA7, ITGB4 nuclear trafficking, and pro-apoptosis gene expression.[2]

C22H23CLN2O5

430.881425142288

430.1295

C, 61.33; H, 5.38; Cl, 8.23; N, 6.50; O, 18.57

1802997-81-4

1802997-81-4;918879-70-6 (recemate);

146681186

Light yellow to yellow ointment

4

82.8Ų

1

6

10

30

524

1

O=C(C1=CC(C2=CC=C(OC)C=C2)=NN1C[C@H](O)COC3=CC=C(Cl)C=C3)OCC

OFKGGSVHXHMDDN-KRWDZBQOSA-N

InChI=1S/C22H23ClN2O5/c1-3-29-22(27)21-12-20(15-4-8-18(28-2)9-5-15)24-25(21)13-17(26)14-30-19-10-6-16(23)7-11-19/h4-12,17,26H,3,13-14H2,1-2H3/t17-/m0/s1

ethyl 2-[(2S)-3-(4-chlorophenoxy)-2-hydroxypropyl]-5-(4-methoxyphenyl)pyrazole-3-carboxylate

Sec; 1802997-81-4; ethyl 2-[(2S)-3-(4-chlorophenoxy)-2-hydroxypropyl]-5-(4-methoxyphenyl)pyrazole-3-carboxylate;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~232.08 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.80 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。