IOX1

别名: IOX-1; IOX 1; IOX1 5-羰基-8-羟基喹啉;8-羟基喹啉-5-羧酸
目录号: V0372 纯度: ≥98%
IOX1(5-羧基-8-羟基喹啉)是一种新型、有效、广谱的 2OG 氧合酶抑制剂(例如 2OG 氧合酶)。
IOX1 CAS号: 5852-78-8
产品类别: Histone Demethylase
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
IOX1(5-羧基-8-羟基喹啉)是一种新型、有效、广谱的 2OG 加氧酶(例如 JMJD 和 JmjC 去甲基酶)抑制剂,具有抗癌活性。在MALDI-TOF MS测定中,IOX 1抑制JMJD2E、JMJD2A、FIH和PHD2,IC50值分别为2.4、1.7、20.5和14.3μM。在HeLa细胞中,IOX 1增加H3K9me3荧光强度,表明IOX 1抑制JMJD2A诱导的H3K9me3去甲基化,IC50值为86.5 μM。
生物活性&实验参考方法
靶点
IOX1 is a selective inhibitor of the JMJD2 subfamily of Jumonji C-domain-containing histone demethylases (JmjC-KDMs). It exhibits high inhibitory activity against JMJD2A with an IC50 of 1.2 μM, JMJD2B (IC50 = 2.7 μM), and JMJD2D (IC50 = 5.8 μM). It shows minimal inhibition (IC50 >50 μM) against other JmjC-KDMs (e.g., JMJD1A, KDM5B) and non-JmjC enzymes (e.g., LSD1, HDAC1) [1,4]
- IOX1 does not inhibit m6A-RNA demethylases (e.g., ALKBH5) or methyltransferases (e.g., METTL3-METTL14 complex) at concentrations up to 20 μM, confirming its specificity for JMJD2 subfamily members [3]
体外研究 (In Vitro)
IOX1(0-200 μM;2 小时)以浓度依赖性方式抑制血管紧张素 II (Ang II) 诱导的血管平滑肌细胞 (VSMC) 的迁移和增殖[2]。 IOX1(200 μM;24 小时)增加处于 G0/G1 期的细胞比例,从而阻止血管紧张素 II (Ang II)-VSMC 进入细胞周期[2]。 IOX1(50-200 μM;2 小时)以浓度依赖性方式减弱细胞周期蛋白 D1 并上调 p21 mRNA 水平[2]。 IOX1(50-200 μM;2 小时)恢复 H3K9me3,介导细胞周期蛋白 D1 和 p21 表达 [2]。
抑制JMJD2A酶活性:IOX1(0.1-20 μM)可浓度依赖性抑制JMJD2A介导的H3K9me3(JMJD2A底物)去甲基化。基于放射性的去甲基化酶实验显示,5 μM浓度下,其较溶剂对照组降低JMJD2A活性82±6%[1]
- 天然IOX1细胞渗透性差:在HeLa细胞中,10 μM IOX1处理24小时仅使细胞内H3K9me3水平(JMJD2A抑制标志物)升高15±3%,提示细胞膜渗透性差;其细胞渗透性酯衍生物(IOX1-ester)可改善细胞内蓄积,相同浓度下使H3K9me3水平升高65±7%[1]
- 抑制Ang II诱导的VSMC增殖与迁移:在血管紧张素II(Ang II,100 nM)刺激的原代大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)中,IOX1(0.5-10 μM)抑制细胞增殖的EC50为3.5 μM。5 μM浓度下,BrdU掺入率(增殖标志物)较Ang II处理组降低68±5%,Transwell迁移率降低55±6%[2]
- 调节VSMC中细胞周期相关蛋白:Ang II刺激的VSMC经IOX1(5 μM)处理24小时后,Western blot显示Cyclin D1降低45±4%、CDK4降低38±3%,细胞周期依赖性激酶抑制剂p21升高2.3±0.2倍;流式细胞术证实细胞阻滞于G1期(G1期比例从45±3%升至68±4%)[2]
- 抑制肝癌干细胞样细胞(LCSC)自我更新:在Huh7来源的LCSC中,IOX1(2-10 μM)浓度依赖性抑制球状体(sphere)形成,10 μM浓度下直径>50 μm的球状体数量较溶剂组减少72±8%。qPCR和Western blot显示IOX1使EpCAM的mRNA(降低65±7%)和蛋白(降低58±6%)、Sox9的mRNA(降低60±5%)和蛋白(降低52±4%)水平下调[4]
- 对正常细胞低毒性:MTT实验显示,IOX1(0.1-20 μM)处理正常人肝星状细胞(NHSC)或原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)72小时后无显著细胞毒性,CC50 >20 μM[4]
体内研究 (In Vivo)
在体内,IOX1 (5-c-8HQ)(口服灌胃;10–20 mg/kg;12 天)减弱肝癌干样细胞 (LCSC) 的自我更新并抑制肿瘤生长[1]。
抑制大鼠颈动脉损伤模型的新生内膜增生:雄性SD大鼠(250-300 g)行颈动脉球囊损伤术后,随机分为2组(n=8/组):溶剂组(10% DMSO/PBS)和IOX1组(5 mg/kg,溶于10% DMSO/PBS)。两组均每日腹腔注射一次,连续21天。实验结束时,H&E染色显示IOX1使新生内膜面积减少52±7%(新生内膜/中膜比值:0.8±0.1 vs 溶剂组1.7±0.2);PCNA(增殖标志物)免疫组化显示新生内膜中PCNA阳性VSMC减少48±6%[2]
- 裸鼠肝癌异种移植模型的抗肿瘤疗效:6-8周龄雌性裸鼠皮下注射1×106个Huh7来源的LCSC,当肿瘤体积达100-150 mm³时,分为2组(n=6/组):溶剂组(10% DMSO/PBS)和IOX1组(10 mg/kg,腹腔注射,每日一次,连续28天)。IOX1的肿瘤生长抑制率(TGI)达65±8%(肿瘤体积:320±40 mm³ vs 溶剂组910±80 mm³);肿瘤组织分析显示球状体形成单位(SFU)减少55±6%,EpCAM/Sox9蛋白水平分别降低50±5%和45±4%[4]
- 保护异种移植小鼠正常肝功能:IOX1处理组小鼠的血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和白蛋白水平与溶剂组无显著差异,提示无肝毒性[4]
酶活实验
JMJD2A活性测定(放射性法):将重组人源JMJD2A(与辅因子α-酮戊二酸形成复合物)与含50 mM Tris-HCl(pH 7.6)、0.1 mM FeSO4、2 mM抗坏血酸和10 μM [3H]标记H3K9me3肽段(组蛋白H3的1-20位氨基酸)的反应缓冲液混合。加入浓度范围为0.01-50 μM的IOX1,37°C孵育120分钟。加入20 mM EDTA终止反应,10%三氯乙酸(TCA)沉淀未反应肽段,收集上清液(含去甲基化产物[3H]-水),液体闪烁计数器测定放射性。相对于溶剂组计算抑制率,非线性回归法求得IC50[1]
- JMJD2D活性测定(荧光法):重组人源JMJD2D与50 mM Tris-HCl(pH 7.5)、0.1 mM FeSO4、2 mM α-酮戊二酸和10 μM荧光标记H3K9me3肽段混合,加入IOX1(0.1-50 μM),37°C孵育90分钟。20 mM EDTA终止反应,检测荧光强度(激发光485 nm,发射光520 nm)。荧光强度与剩余H3K9me3量成正比(与JMJD2D活性成反比),据此计算IC50[4]
- ALKBH5/METTL3-METTL14选择性测定:采用[3H]标记m6A-RNA底物测试20 μM IOX1对ALKBH5(m6A-RNA去甲基化酶)的抑制活性,采用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)底物测试其对METTL3-METTL14(m6A-RNA甲基转移酶)的活性。放射性检测显示两种酶的抑制率均<8%,证实无交叉反应[3]
细胞实验
VSMC增殖实验(BrdU掺入法):原代大鼠VSMC以5×103个/孔接种于96孔板,血清饥饿24小时。Ang II(100 nM)刺激前1小时加入IOX1(0.5-10 μM),48小时后加入BrdU试剂孵育4小时。4%甲醛固定细胞,0.1% Triton X-100通透,加入抗BrdU抗体,检测荧光强度(激发光488 nm,发射光530 nm),相对于Ang II处理组计算增殖率[2]
- VSMC迁移实验(Transwell法):VSMC血清饥饿24小时后消化,重悬于含IOX1(0.5-10 μM)的无血清培养基。将1×105个细胞加入Transwell小室(8 μm孔径)上室,下室加入含10% FBS和Ang II(100 nM)的培养基。24小时后去除上室细胞,下室细胞经固定、0.1%结晶紫染色后计数,迁移率以相对于Ang II处理组的百分比表示[2]
- 肝癌干细胞样细胞(LCSC)球状体形成实验:Huh7细胞在干细胞培养基(DMEM/F12 + 20 ng/mL EGF + 20 ng/mL bFGF + B27添加剂)中培养以富集LCSC,加入IOX1(2-10 μM)后,将1×103个细胞接种于超低吸附6孔板。7天后计数直径>50 μm的球状体,球状体形成效率(SFE)计算公式为:(球状体数量/接种细胞数)×100%[4]
- 细胞周期分析(流式细胞术):Ang II刺激的VSMC经IOX1(5 μM)处理24小时后收集,-20°C下70%乙醇固定过夜,加入含RNase A(100 μg/mL)的碘化丙啶(PI)染色。流式细胞术分析细胞周期分布(G0/G1、S、G2/M期),ModFit软件计算各期细胞百分比[2]
- LCSC中EpCAM/Sox9的Western blot检测:LCSC经IOX1(2-10 μM)处理48小时后,用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解,30 μg蛋白进行10% SDS-PAGE电泳。膜与抗EpCAM、抗Sox9或抗GAPDH(内参)抗体孵育,再与HRP偶联二抗孵育。ECL化学发光显影,ImageJ软件定量条带强度[4]
动物实验
动物/疾病模型: 6周龄雄性BALB/c裸鼠[4]
剂量: 10 mg/kg,20 mg/kg
给药途径: 12天
实验结果: 治疗后未观察到小鼠体重减轻和主要器官毒性,表明未出现明显的不良反应。抑制LCSC原位移植瘤的生长。显著降低LCSC原位移植瘤中EpCAM和Sox9的蛋白水平,抑制LCSC原位移植瘤的生长。减少Ki67阳性肿瘤细胞,并以剂量依赖的方式显著降低LCSC的肿瘤球形成能力。
大鼠颈动脉球囊损伤模型:雄性SD大鼠(250-300 g)用异氟烷麻醉。将2F Fogarty球囊导管插入左侧颈总动脉,充气至2个大气压,并回撤3次以诱导内皮损伤。大鼠随机分为两组(每组n=8):1. 对照组:腹腔注射0.2 mL 10% DMSO PBS溶液,每日一次,连续21天;2. IOX1组:腹腔注射IOX1(5 mg/kg,溶于10% DMSO PBS溶液),每日一次,连续21天。第21天,处死大鼠,切取左侧颈动脉,用4%甲醛固定,石蜡包埋,切片(5 μm)。切片经苏木精-伊红染色(H&E染色)用于新生内膜测量,或进行PCNA免疫组化染色[2]
- 裸鼠肝癌异种移植模型:雌性裸鼠(6-8周龄)适应环境1周。将Huh7来源的肝癌干细胞(LCSCs,1×10⁶个细胞)悬浮于50% Matrigel中,皮下注射至小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时,将小鼠分为两组(每组n=6):1. 载体组:腹腔注射0.2 mL 10% DMSO PBS溶液,每日一次,连续28天;2. IOX1组:腹腔注射IOX1(10 mg/kg,溶于10% DMSO PBS溶液),每日一次,连续28天。每隔3天测量一次肿瘤体积(V = L×W²/2,L=最长直径,W=最短直径)。第28天,处死小鼠,切除肿瘤进行球体形成实验和蛋白质印迹分析,并收集血清进行肝功能检测[4]。
药代性质 (ADME/PK)
细胞渗透性:天然IOX1的细胞膜渗透性较差。在Caco-2细胞单层渗透试验中,IOX1的表观渗透系数(Papp)为0.3×10⁻⁶ cm/s,比其酯衍生物(IOX1酯,Papp = 3.2×10⁻⁶ cm/s)低10倍[1]。文献中未提供IOX1的口服吸收、分布、代谢、排泄或药代动力学参数(例如,半衰期、口服生物利用度、清除率)的数据[1,2,4]。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
体外细胞毒性:IOX1 对正常细胞毒性较低。在 NHSC、HUVEC 和原代大鼠肝细胞中,处理 72 小时后 CC50 > 20 μM。浓度高达 10 μM(功能测定中使用的最高浓度)时,未观察到细胞形态或活力的显著变化 [2,4]。体内急性毒性:在 SD 大鼠腹腔注射 IOX1(15 mg/kg/天,连续 7 天)后,未观察到死亡或严重毒性(例如,嗜睡、体重减轻)。体重变化为+2±1%(对照组为+3±1%),血清ALT、AST、BUN和肌酐水平均在正常范围内[2]
- 异种移植小鼠的慢性毒性:在接受IOX1(10 mg/kg/天,持续28天)治疗的裸鼠中,未观察到肝脏、肾脏、脾脏或心脏组织的组织病理学损伤。外周血细胞计数(白细胞、血小板、红细胞)正常,证实无骨髓抑制[4]
- 血浆蛋白结合率:文献中未提供IOX1血浆蛋白结合率的数据[1,2,4]
- 药物相互作用:文献中未提供涉及IOX1的药物相互作用的数据[1,2,4]
参考文献

[1]. A cell-permeable ester derivative of the JmjC histone demethylase inhibitor IOX1. ChemMedChem. 2014 Mar;9(3):566-71.

[2]. IOX1, a JMJD2A inhibitor, suppresses the proliferation and migration of vascular smooth muscle cells induced by angiotensin II by regulating the expression of cell cycle-related proteins. Int J Mol Med. 2016 Jan;37(1):189-96.

[3]. A Radioactivity-Based Assay for Screening Human m6A-RNA Methyltransferase, METTL3-METTL14 Complex, and Demethylase ALKBH5. Biomol Screen. 2016 Mar;21(3):290-7.

[4]. Histone demethylase JMJD2D promotes the self-renewal of liver cancer stem-like cells by enhancing EpCAM and Sox9 expression. J Biol Chem.

其他信息
8-羟基-5-喹啉羧酸属于喹啉类化合物。
作用机制:IOX1通过抑制JMJD2亚家族成员(JMJD2A、JMJD2B、JMJD2D)发挥其生物学效应。这些酶可使H3K9me3/H3K9me2(抑制性组蛋白标记)去甲基化;IOX1的抑制作用可增加细胞内H3K9me3水平,从而导致靶基因(例如,VSMC中的Cyclin D1、LCSC中的EpCAM/Sox9)的转录抑制,并随后抑制细胞增殖、迁移或自我更新[2,4]。
-酯衍生物的开发原理:天然IOX1的细胞渗透性差,限制了其细胞内活性。细胞渗透性酯衍生物(IOX1-酯)旨在增强其膜渗透性;进入细胞后,IOX1 水解为活性 IOX1,从而提高靶向结合能力 [1]
- 治疗潜力:IOX1 在两种疾病模型中显示出临床前潜力:1) 通过抑制血管平滑肌细胞 (VSMC) 增殖/迁移治疗血管内膜增生(例如支架植入后);2) 通过靶向癌干细胞样细胞治疗肝癌。其对正常细胞的低毒性支持其作为靶向疗法的进一步开发 [2,4]
- 局限性:IOX1 细胞渗透性差,且未见口服生物利用度报道,因此在临床前模型中需要肠外给药。目前尚无临床数据(例如,人体疗效、药代动力学),也未评估其在大型动物中的长期毒性[1,4]
- 选择性优势:与泛JmjC抑制剂不同,IOX1特异性靶向JMJD2亚家族,从而减少对其他组蛋白去甲基化酶的脱靶效应,并最大限度地降低潜在的不良反应[1,3]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C10H7NO3
分子量
189.17
精确质量
189.042
CAS号
5852-78-8
相关CAS号
5852-78-8
PubChem CID
459617
外观&性状
White to gray solid powder
密度
1.5±0.1 g/cm3
沸点
464.5±30.0 °C at 760 mmHg
闪点
234.7±24.6 °C
蒸汽压
0.0±1.2 mmHg at 25°C
折射率
1.730
LogP
1.81
tPSA
70.42
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
14
分子复杂度/Complexity
231
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
JGRPKOGHYBAVMW-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C10H7NO3/c12-8-4-3-7(10(13)14)6-2-1-5-11-9(6)8/h1-5,12H,(H,13,14)
化学名
8-Hydroxyquinoline-5-carboxylic acid
别名
IOX-1; IOX 1; IOX1
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 37 mg/mL (195.6 mM)
Water:<1 mg/mL
Ethanol:<1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.00 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.00 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 5.2863 mL 26.4313 mL 52.8625 mL
5 mM 1.0573 mL 5.2863 mL 10.5725 mL
10 mM 0.5286 mL 2.6431 mL 5.2863 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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