| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
描述:ISO-1,曾被称为MIF拮抗剂和ISO-1及巨噬细胞迁移抑制因子,是一种MIF抑制剂。ISO-1的CAS号为478336-92-4。INVIVO-6924可保护光感受器并减少实验性视网膜脱离中的胶质增生。全身性给予MIF抑制剂ISO-1可显著抑制光感受器凋亡、外核层(ONL)变薄和视网膜胶质增生。ISO-1和MIF敲除(MIFKO)小鼠脱离的视网膜中Müller胶质细胞pERK表达的积累量更高,表明Müller胶质细胞存活通路可能是神经保护反应的基础。
| 靶点 |
Macrophage migration inhibitory factor (MIF) tautomerase active site [1]
Macrophage migration inhibitory factor (MIF) [2] Macrophage migration inhibitory factor (MIF) [3] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在未添加重组MIF的情况下,ISO-1(0.1–20 μM;16小时)对Cox-2分泌具有轻微的抑制作用[1]。
ISO-1以剂量依赖的方式抑制MIF D-多巴色素互变酶活性,IC50约为7 μM。非羟基化的苯基类似物(化合物2)的效力降低了10-15倍。4-甲氧基类似物(化合物3)没有活性。将ISO-1氧化为异噁唑(化合物4)后活性消失,还原为化合物5也导致活性丧失[1]。 ISO-1以剂量依赖的方式抑制转染了表达MIF质粒的RAW 264.7巨噬细胞中MIF诱导的花生四烯酸释放;化合物 2、3 和 4 在大多数浓度下均未表现出抑制作用,但化合物 2 在 100 μM 时显示出一定的抑制作用 [1]。 ISO-1 剂量依赖性地拮抗 MIF 依赖性地塞米松对 LPS 激活的人单核细胞的抑制作用,在 0.1 至 20 μM 的浓度范围内降低 TNFα、PGE2 和 Cox-2 的产生。在未添加重组MIF的情况下,也观察到对细胞因子分泌的轻微抑制作用,这可能是由于天然MIF受到抑制所致[1]。 ISO-1在处理30分钟后,以剂量依赖性方式(1-100 μM)抑制RAW 267.4巨噬细胞内的MIF互变异构酶活性,该活性通过L-多巴色素甲酯转化法测定[2]。 ISO-1以剂量依赖性方式抑制LPS诱导的RAW 267.4巨噬细胞的TNF分泌(1-100 μM)[2]。 ISO-1抑制LPS诱导的RAW 267.4巨噬细胞的NF-κB活化,在100 μM浓度下抑制率高达70%,该结果通过电泳迁移率变动分析法测定[2]。荧光标记的ISO-1(FL-ISO-1)被RAW 267.4巨噬细胞摄取,并在30分钟内定位于细胞质和细胞核中[2]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
ISO-1(腹腔注射;3.5–35 mg/kg;每日两次;持续 2 周)具有抗炎特性,并能提高致命性内毒素血症的存活率 [2]。腹腔注射 ISO-1(35 mg/kg,每日两次,持续 3 天)可显著降低植入物中 Flk1 的表达并减小平均植入物尺寸 [3]。
ISO-1(35 mg/kg 腹腔注射,每日两次,持续 3 天)可显著保护雄性 Balb/C 小鼠免受致命性内毒素血症(LPS 5 mg/kg 腹腔注射)的侵害,并以剂量依赖的方式提高存活率(35 mg/kg 时 p < 0.001),与载体组相比。该效果与抗 MIF 抗体治疗相当 [2]。 在盲肠结扎和穿孔 (CLP) 诱导的多微生物败血症后 24 小时开始进行 ISO-1 治疗(35 mg/kg 腹腔注射,每天两次,持续 3 天),与载体治疗的对照组相比,存活率为 77%(p < 0.001)。在同一时间段内给予抗MIF抗体,其提高生存率的效果与ISO-1相当[2]。 ISO-1可抑制LPS处理的野生型小鼠腹腔巨噬细胞中TNF释放67%,但对MIF缺陷小鼠的细胞因子释放无影响[2]。 在子宫内膜异位症小鼠模型(腹腔注射子宫碎片的C57BL/6-Tg(ACTB-EGFP)受体小鼠)中,使用ISO-1(35 mg/kg,腹腔注射,每日两次,连续3天,诱导后1周开始)治疗可显著降低子宫内膜异位病灶的平均大小。血管生成指标Flk1(VEGF受体2)mRNA表达也显著降低。生殖周期未受影响[3]。 |
| 酶活实验 |
D-多巴色素互变异构酶活性测定:L-多巴色素甲酯由L-3,4-二羟基苯丙氨酸甲酯经高碘酸钠氧化制备。在室温下,将多巴色素甲酯加入含有MIF的磷酸钾缓冲液(pH 6.0,0.5 mM EDTA)比色皿中,测定其活性。用分光光度计记录475 nm处2至20秒内吸光度的下降值。在加入多巴色素之前,将溶于DMSO的抑制剂加入含有MIF的比色皿中。IC50值由剂量反应曲线确定[1]。
细胞内MIF互变异构酶活性测定:将RAW 267.4巨噬细胞用不同浓度的ISO-1处理30分钟,然后洗涤并在非变性缓冲液中裂解。如上所述,使用L-多巴色素甲酯测定裂解液的互变异构酶活性,测量475 nm处的吸光度下降值[2]。 腹腔液中MIF活性评估:收集小鼠腹腔液,校正蛋白浓度,并将样品与测定缓冲液(50 mM磷酸钾,pH 6.0,1 mM EDTA)混合。加入多巴色素甲酯,使用微孔板分光光度计在475 nm处读取吸光度。活性以相对于对照组的倍数变化表示[3]。 |
| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型: RAW 264.7 巨噬细胞 测试浓度: 0.1μM、1μM、10μM、20μM 孵育时间: 16 小时 实验结果: 抑制 Cox-2 分泌。 糖皮质激素拮抗试验:通过密度梯度离心法从全血中分离人或小鼠单核细胞,并通过贴壁法纯化单核细胞。将细胞(1×10^6/孔)预先与地塞米松(10^-8 M)、地塞米松加MIF(100 ng/ml野生型或突变型)或地塞米松加MIF和ISO-1(0.1-20 μM)孵育1小时,然后加入LPS(0.5 μg/ml)。16小时后,收集上清液,用ELISA法测定TNFα和PGE2的含量。采用特异性抗体通过Western blot分析Cox-2的表达[1]。 花生四烯酸释放实验:将RAW 264.7巨噬细胞与[14C]花生四烯酸孵育过夜,然后洗涤,并在有或无载体或ISO-1的情况下,转染表达MIF的质粒或空载体。 16 小时后,收集上清液,并通过闪烁计数法定量 14C 标记的花生四烯酸 [1]。 TNF 分泌测定:在加入 LPS (100 ng/ml) 前 30 分钟,用 ISO-1 (1-100 μM) 处理 RAW 267.4 巨噬细胞。孵育 16 小时后,收集细胞培养上清液,并通过 ELISA 法测定 TNF [2]。 NF-κB 激活测定 (EMSA):在加入 LPS 前 30 分钟,用 ISO-1 (1-100 μM) 处理 RAW 267.4 巨噬细胞。2 小时后分离核提取物。将 5 μg 核蛋白与含有 NF-κB 共识序列的 32P 标记的双链寡核苷酸孵育。样品经4%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并通过放射自显影法显影。结合的NF-κB条带通过密度分析法定量[2]。 荧光标记的ISO-1的细胞内定位:将RAW 267.4巨噬细胞接种于盖玻片上,用荧光标记的ISO-1(FL-ISO-1)处理,然后洗涤,用甲醛固定,用DAPI染色,并使用荧光显微镜成像[2]。 mRNA表达分析:从子宫内膜异位症病灶或子宫组织中提取总RNA,并合成cDNA。进行qRT-PCR以定量Mif和Flk1 mRNA水平,并以18S rRNA进行标准化。使用抗MIF抗体对蛋白质提取物进行Western blot分析,并以β-actin进行标准化[3]。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型: C57Bl/6 MIF+/+ 和 MIF–/– 小鼠 [2]
剂量: 3.5-35 mg/kg 给药途径: 腹腔注射 (ip);3.5-35 mg/kg;每日两次;持续 2 周 实验结果: 是 可预防致命性败血症。 动物/疾病模型: 雌性 C57BL/6-Tg(ACTB-EGFP)1Osb/J 小鼠 [3] 剂量: 35 mg/kg 给药途径: 腹腔注射 (ip);35 mg/kg;每日两次; 3天 实验结果:子宫内子宫内膜异位症病灶的平均大小缩小。 内毒素血症模型:雄性Balb/C小鼠(8周龄)腹腔注射LPS(5 mg/kg)。异丙肾上腺素-1(3.5-35 mg/kg)或溶剂(5% DMSO水溶液)在LPS注射前30分钟和注射后6小时腹腔注射,然后每天两次,持续3天。监测动物存活情况2周[2]。 盲肠结扎穿刺(CLP)模型:小鼠麻醉后,分离盲肠,在回盲瓣下方结扎,并用22号针头穿刺一次,挤出少量粪便。 CLP术后立即皮下注射抗生素(0.5 mg/kg Premaxin),并皮下注射复苏液(生理盐水,20 ml/kg)。CLP术后24小时开始腹腔注射ISO-1(35 mg/kg)或溶剂(5% DMSO),每日两次,持续3天。监测动物存活情况2周。在平行实验中,CLP术后24小时开始腹腔注射抗MIF抗体(2.8 mg/kg),每日一次,持续3天[2]。 子宫内膜异位症小鼠模型:以雌性C57BL/6-Tg(ACTB-EGFP)小鼠为受体。取未成熟C57BL/6小鼠的子宫,在注射PMSG后取出子宫组织,并将子宫组织碎片(1 mm³)注射到受体小鼠的腹腔内。诱导一周后,小鼠连续3天,每天两次(间隔12小时)腹腔注射ISO-1(35 mg/kg体重)或载体(5% DMSO生理盐水)。末次注射后一周处死小鼠,计数并测量子宫内膜异位症病灶的大小(mm³)。通过阴道细胞学检查监测小鼠的动情周期,持续14天(治疗前4天至处死)[3]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在所用的药理剂量下,ISO-1及其衍生物无毒性,这已通过细胞培养中的台盼蓝排除试验评估得出[1]。
ISO-1在小鼠中剂量高达250 mg/kg时未显示致死性,该剂量约为体内疗效研究中使用的最大剂量的7倍[2]。 用ISO-1治疗不会干扰小鼠的生殖动情周期,表明在实验条件下无明显的生殖毒性[3]。 |
| 参考文献 |
|
| 其他信息 |
5-异噁唑乙酸,即4,5-二氢-3-(4-羟基苯基)-甲酯,属于酚类化合物。
巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)是一种促炎细胞因子,参与脓毒症、关节炎、肾小球肾炎和其他炎症性疾病的发生发展。MIF的互变异构酶活性位点是抗炎药物的潜在靶点。ISO-1与底物对羟基苯基丙酮酸结合于MIF活性位点的相同位置。MIF-ISO-1复合物的晶体结构显示,只有R-异构体与MIF口袋结合,其相互作用包括与Lys-32、Ile-64和Asn-97的氢键,以及与Tyr-95的芳香相互作用。 PAM突变体(Pro-1和Met-2之间插入丙氨酸)破坏了催化位点,导致糖皮质激素拮抗调节活性缺陷[1]。 ISO-1是首个具有治疗意义的MIF促炎活性小分子抑制剂。它靶向互变异构酶活性位点,而互变异构酶活性位点并非必需的酶促功能。盲肠结扎穿孔术(CLP)后24小时内,血清MIF水平升高至最大值的70%,并在36小时达到峰值,表明MIF是脓毒症的晚期介质。ISO-1对MIF的抑制作用重现了MIF缺陷型巨噬细胞(对内毒素反应低下)的表型[2]。 在子宫内膜异位症中,异位种植灶中MIF表达升高。 ISO-1 可缩小植入物体积并降低血管密度,且不影响生殖周期,提示其具有治疗人类子宫内膜异位症的潜力[3]。 |
| 分子式 |
C12H13NO4
|
|---|---|
| 分子量 |
235.239
|
| 精确质量 |
235.084
|
| CAS号 |
478336-92-4
|
| 相关CAS号 |
478336-92-4;
|
| PubChem CID |
4633677
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
365.0±48.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
114 °C
|
| 闪点 |
174.6±29.6 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±0.8 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.582
|
| LogP |
0.89
|
| tPSA |
64.63
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
17
|
| 分子复杂度/Complexity |
308
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
AIXMJTYHQHQJLU-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C12H13NO4/c1-16-12(15)7-10-6-11(13-17-10)8-2-4-9(14)5-3-8/h2-5,10,14H,6-7H2,1H3
|
| 化学名 |
4,5-dihydro-3-(4-hydroxyphenyl)-5-isoxazoleacetic acid, methyl ester
|
| 别名 |
ISO-1 ISO 1 ISO1 MIF Antagonist Macrophage Migration Inhibitory Factor
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~212.55 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 5 mg/mL (21.25 mM) in 5% DMSO + 95% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.63 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。 例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中,混合均匀。 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.2510 mL | 21.2549 mL | 42.5098 mL | |
| 5 mM | 0.8502 mL | 4.2510 mL | 8.5020 mL | |
| 10 mM | 0.4251 mL | 2.1255 mL | 4.2510 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT02284919 | ACTIVE, NOT RECRUITING | Drug: [18F]ISO-1 | Breast Cancer Breast Neoplasm |
University of Pennsylvania | 2014-11 | Phase 1 |
| NCT00968656 | COMPLETED | Radiation: PET/CT Other: Laboratory Testing Other: Safety Testing |
Breast Cancer Diffuse Large B-cell Lymphoma Head and Neck Cancer |
Washington University School of Medicine | 2009-01 | Phase 1 |
| NCT02204202 | TERMINATED | Drug: [18F]FDG Drug: [18F]ISO-1 |
Lung Disease | Washington University School of Medicine | 2014-02 | |
| NCT03057743 | TERMINATED | Device: Positron emission tomography (PET/CT) imaging Device: radiotracer [18F]ISO-1 |
METASTATIC BREAST CANCER | Abramson Cancer Center at Penn Medicine | 2016-04-05 | |
| NCT04831892 | COMPLETED | Other: Moisturizer Containing Isosorbide Diesters and Colloidal Oatmeal Other: Moisturizer containing Colloidal Oatmeal only |
Atopic Dermatitis | Integrative Skin Science and Research | 2021-04-12 | Not Applicable |
|
|
|