Isoliquiritin apioside   中文名称: 芹糖异甘草苷

MMP9; NF-κB; p38 MAPK
Isoliquiritin Apioside suppresses PMA-induced activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathways including p38, ERK, and JNK. It also inhibits NF-κB activation by blocking nuclear translocation of the p65 subunit. Additionally, ISLA impairs the hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) pathway, reducing HIF-1α accumulation and phosphorylation of Akt, mTOR, 4E-BP1, and p70S6K. No IC50, Ki, EC50, or DC50 values were reported for these targets. [1]

当HT1080细胞暴露于PMA时，异甘草苷能有效抑制其明胶酶MMP-9活性。此外，异甘草苷还能降低PMA诱导的HT1080细胞中MMP-9合成的增加。在恶性癌细胞和内皮细胞(EC)中，异甘草苷表现出抗转移和抗血管生成特性，且不引起细胞毒性[1]。

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浓度高达100 μM的异甘草苷不影响HT1080细胞的增殖；相反，与未处理的对照细胞相比，100 μM的异甘草苷使细胞活力略微提高了约10%（CCK-8检测，处理48小时）。 [1]
如明胶酶谱分析所示（PMA 20 nM刺激；ISLA处理降低了明胶酶解MMP-9活性），ISLA抑制了PMA诱导的HT1080细胞中MMP-9活性和产量的增加。ISLA不抑制MMP-2活性。HT1080条件培养基中的总MMP活性以剂量依赖的方式被ISLA降低（单因素方差分析，F = 91.44，p < 0.0001）。 [1]
在Transwell迁移实验中，ISLA抑制了血清诱导的HT1080细胞迁移：与对照组相比，100 μM ISLA处理后，8 h和12 h细胞迁移率分别降低了56.8%和71.8%（8 h：F = 259.7，p < 0.0001；12 h：F = 312.0，p < 0.0001，单因素方差分析）。在划痕迁移实验中，100 μM ISLA处理24 h后，伤口愈合率降低了60.6%（24 h：F = 87.3，p < 0.0001，单因素方差分析）。 [1]
ISLA抑制HT1080细胞穿过Matrigel包被的Transwell膜的侵袭：与未处理的对照组相比，100 μM ISLA导致约83.2%的抑制（F = 272.5，p < 0.0001，单因素方差分析）。在划痕侵袭实验中，100 μM ISLA在24小时时抑制了63.6%的侵袭（24小时：F = 26.28，p < 0.0001，单因素方差分析）。在三维球状体侵袭实验中，100 μM ISLA 处理后 3 天和 5 天分别使球状体的侵袭能力降低了 72.1% 和 87.3%（T3：F = 9.006，p = 0.0061；T5：F = 42.39，p < 0.0001，单因素方差分析）。[1] ISLA 可阻断 PMA 诱导的 HT1080 细胞中 p38、ERK 和 JNK 的磷酸化（蛋白质印迹分析；100 μM ISLA 预处理 12 小时，然后用 20 nM PMA 刺激指定时间）。ISLA 还可抑制 PMA 诱导的 NF-κB p65 亚基的核转位（50 μM ISLA 预处理 12 小时，然后用 20 nM PMA 处理 30 分钟；胞质和核组分蛋白质印迹分析）。 [1]
ISLA抑制了HT1080细胞中缺氧诱导的HIF-1α核积累：在100 μM ISLA处理下，CoCl₂刺激（F = 184.3，p < 0.0001）和1% O₂刺激（F = 646.4，p < 0.0001，单因素方差分析）下，含有核HIF-1α的细胞比例降低至对照组的约5%（荧光免疫细胞化学）。ISLA还以剂量依赖的方式抑制了缺氧诱导的HIF-1α积累以及Akt、mTOR、4E-BP1和p70S6K的磷酸化（蛋白质印迹）。[1]
在常氧条件下，ISLA降低了HT1080条件培养基中促血管生成因子MMP-9和胎盘生长因子（PlGF）的产生。在低氧（1% O₂）条件下，与常氧相比，MMP-9 和 PlGF 水平分别升高了 1.69 倍和 2.52 倍，而 ISLA 可降低这些水平。在常氧和低氧条件下，ISLA 均可轻微降低 VEGF 水平（蛋白质组分析抗体芯片）。[1]
ISLA 抑制了 EGM-2 诱导的 HUVEC 细胞跨 Transwell 膜的迁移：在 25、50 和 100 μM 浓度下，与对照组相比，迁移率分别降低了 51.9%、81.9% 和 89.9%（F = 471.4，p < 0.0001，单因素方差分析）。ISLA 还以剂量依赖的方式抑制了 HUVEC 细胞在基底膜提取物上的管状结构形成（F = 577.1，p < 0.0001，单因素方差分析）。[1]

异甘草苷芹菜苷（ISLA）抑制了鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）的自发性血管生成：局部应用ISLA（每片100 μg）可抑制血管生成约37%，与单独使用载体相比（第9天）。ISLA还能有效阻断VEGF诱导的血管生成（每片200 ng VEGF），使血管形成减少至载体对照组的约46.8%（使用ImageJ测量血管总长度，每组n=3）。[1]

为了测定总MMPs活性，收集经ISLA处理或未处理的HT1080细胞的培养上清液，并使用MMPs活性检测试剂盒进行检测。使用多功能酶标仪在激发/发射波长490/525 nm处测量绿色荧光强度。[1]
对于明胶酶谱分析，将细胞在无血清培养基中用指定浓度的ISLA预处理12小时，然后用20 nM PMA刺激24小时。收集培养上清液，离心去除细胞碎片，并在含有0.1%明胶的8% SDS-PAGE凝胶上进行电泳。用洗涤缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，100 mM NaCl，2.5% Triton X-100）洗涤后，将凝胶置于活化缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM NaCl，10 mM CaCl₂，0.02% NaN₃，1 μM ZnCl₂）中，于 37°C 孵育 24-48 小时。凝胶用考马斯亮蓝 R-250 溶液染色，然后脱色。在 92 kDa 处检测到明胶酶 MMP-9 活性，在 72 和 64 kDa 处检测到 MMP-2 活性，均为透明条带。[1]

采用CCK-8法评估细胞活力。将HT1080细胞用指定浓度的ISLA处理48小时后，测定细胞活力。[1]
对于Transwell迁移实验，将悬浮于无血清培养基中的HT1080细胞或HUVECs（1×10⁴个细胞）接种于Transwell小室（孔径8 μm）的上室。下室加入10% FBS/RPMI1640或EGM-2培养基。孵育后，去除上室细胞，用0.2%结晶紫/20%甲醇溶液染色下室迁移的细胞，并在相差显微镜下计数。[1]
对于划痕迁移实验，将培养至约90%汇合度的细胞用25 μg/mL丝裂霉素C预处理30分钟。使用96针划痕仪制作划痕。将细胞在有或无ISLA的条件下孵育，每3小时拍摄一次伤口图像。相对伤口迁移率基于0小时的伤口宽度计算。[1]
对于Transwell侵袭实验，采用与迁移实验相同的步骤，但使用Matrigel（用无血清培养基1:4稀释）作为侵袭屏障。[1]
对于三维（3D）球体侵袭实验，将悬浮于50 μL预冷的球体形成细胞外基质（ECM）中的细胞（3×10⁵）加入96孔超低吸附微孔板中。以200×g离心3分钟后，将细胞培养3天形成球体。然后加入50 μL预冷的侵袭基质，并在37°C下孵育1小时。加入有或无ISLA的培养基，并将微孔板孵育5天。每隔24小时观察并拍摄细胞侵入周围基质的情况。[1]
对于蛋白质印迹分析，使用蛋白质提取试剂制备全细胞裂解液和核/胞质组分。使用BCA试剂盒测定蛋白质浓度。取等量蛋白质（25 μg）进行SDS-PAGE电泳分离，并使用特异性抗体进行免疫印迹分析。使用化学发光成像系统测定蛋白质水平。[1]
对于HIF-1α核转位的荧光免疫细胞化学染色，将生长在玻璃底培养皿中的细胞用ISLA处理12小时，然后用200 μM CoCl₂刺激6小时。用4%多聚甲醛固定细胞，进行透化和封闭处理，然后用Alexa Fluor 488标记的兔抗HIF-1α抗体（1:500稀释）染色。用DAPI对细胞核进行复染，并在荧光显微镜下观察细胞。 [1]
在HUVEC管形成实验中，将50 μL冰冷的基底膜提取物（BME）加入96孔板中，并在37°C下凝固30分钟。将预先用或不用ISLA处理12小时的HUVEC细胞（5×10⁴）悬浮于100 μL EGM-2培养基中，并加入每个孔中。4小时后，在相差倒置显微镜下观察管形成情况。[1]

受精鸡卵在37℃、65%湿度下孵育。胚胎发育第3天（ED 3），小心去除卵清蛋白，并在卵的钝端开一个圆窗。用胶带封住圆窗，并将卵放回孵育箱。ED 6天，将含有异甘草苷（100 μg）和/或血管内皮生长因子（VEGF，200 ng）的5 mm圆片（溶于20 μL PBS）放置于单个胚胎的绒毛尿囊膜（CAM）上。继续孵育3天。ED 9天，对血管进行宏观观察和拍照，并使用ImageJ软件测量血管总长度（每组三个样本）。[1]

浓度高达 100 μM 的异甘草苷芹菜苷未显示对 HT1080 细胞的细胞毒性；相反，与未处理的对照组相比，100 μM 浓度下细胞活力略有增加，约 10%（CCK-8 法，48 小时）。未报告体内毒性数据（例如，LD50、肝毒性、肾毒性）。也未提供血浆蛋白结合或药物相互作用方面的信息。[1]

[1]. Isoliquiritin Apioside Suppresses in vitro Invasiveness and Angiogenesis of Cancer Cells and Endothelial Cells.Front Pharmacol. 2018 Dec 10;9:1455.

新苦参碱属于黄酮类化合物，是一种糖苷。据报道，甘草中含有异甘草酸，相关数据可供参考。

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异甘草苷芹菜苷是从甘草根茎（甘草的根）中分离得到的成分。先前的研究表明，异甘草苷芹菜苷对H₂O₂和4NQO诱导的DNA损伤（SOS染色试验和彗星试验）具有抑制作用，并能抑制大鼠腓肠肌的电刺激诱导强直收缩（20 μmol/kg注射）。本研究首次报道了异甘草苷芹菜 ... ISLA不影响HT1080细胞与细胞外基质（纤连蛋白、I型胶原、玻连蛋白）的黏附，也不影响整合素或EMT相关蛋白（β-连环蛋白、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、Snail蛋白、波形蛋白、ZO-1）的表达。其抗转移机制涉及阻断PMA诱导的MAPK激活和NF-κB核转位，从而降低MMP活性。其抗血管生成机制涉及抑制HIF-1α/Akt/mTOR通路并减少促血管生成因子（MMP-9、PlGF、VEGF）。ISLA还直接抑制HUVEC的血管生成活性（迁移、管状结构形成），并减少CAM实验中的血管生成。作者认为ISLA可能是一种安全有效的先导化合物，可用于开发抗癌药物以限制原发肿瘤的扩散。[1]

C26H30O13

550.5086

550.168

120926-46-7

6442433

Yellow to orange solid

1.6±0.1 g/cm3

901.0±65.0 °C at 760 mmHg

301.9±27.8 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.709

1.96

215.83

8

13

9

39

833

8

O([C@@]1([H])[C@@]([H])([C@@](C([H])([H])O[H])(C([H])([H])O1)O[H])O[H])[C@@]1([H])[C@]([H])(OC2C([H])=C([H])C(/C(/[H])=C(\[H])/C(C3C([H])=C([H])C(=C([H])C=3O[H])O[H])=O)=C([H])C=2[H])O[C@]([H])(C([H])([H])O[H])[C@]([H])([C@]1([H])O[H])O[H]

VMMVZVPAYFZNBM-KVFWHIKKSA-N

InChI=1S/C26H30O13/c27-10-19-20(32)21(33)22(39-25-23(34)26(35,11-28)12-36-25)24(38-19)37-15-5-1-13(2-6-15)3-8-17(30)16-7-4-14(29)9-18(16)31/h1-9,19-25,27-29,31-35H,10-12H2/b8-3+/t19-,20-,21+,22-,23+,24-,25+,26-/m1/s1

(E)-3-[4-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3-[(2S,3R,4R)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyphenyl]-1-(2,4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~25 mg/mL (~45.41 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.54 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。